应用离子色谱法测定甲硝唑片中亚硝酸盐的含量

曹大春，余敏灵，周 筠

(1.四川省新津县中医医院，四川 新津611430;2.四川省乐山食品药品检验检测中心，四川 乐山 614000;3.四川省乐山市第二人民医院，四川 乐山 614000)

甲硝唑片为抗厌氧菌、抗滴虫口服制剂，收载于《中国药典》2010年版二部［1］。在实验中我们发现甲硝唑片中含有微量亚硝酸盐。由于亚硝酸盐对人机体有一定的危害［2］，定量分析制剂中的亚硝酸盐对控制甲硝唑片质量有较为重要的意义。迄今还没有采用离子色谱法测定甲硝唑中亚硝酸根的相关报道。参阅相关文献［3，4］，我们采用离子色谱法对甲硝唑片中亚硝酸盐进行了定量分析，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 ICS-90A离子色谱仪(美国DIONEX);ASRS_4MM淋洗液发生器(美国DIONEX);ASRS300(4-mm)阴离子抑制器;(美国DIONEX);DS5电导检测器(美国DIONEX);Chromeleon色谱工作站;IonpacAS11-HC型分离柱(4×250 mm)(美国DIONEX);IonpacAG11-HC型保护柱(4 mm×50 mm)(美国DIONEX);XS205电子天平(德国mettler toledo公司)。标准亚硝酸根溶液(1 mg/mL)批号:12D409，厂家:国家有色金属及电子材料分析测试中心);甲硝唑片［远大医药(中国)有限公司，批号:121261、121245、130125，规格 0.2 g/片］。

1.2 方法 ①标准亚硝酸根储备液和样品溶液的制备:精密量取标准亚硝酸根溶液1 ml，置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，作为标准亚硝酸根储备液。取甲硝唑片［远大医药(中国)有限公司，批号:121261］10片，置100 ml量瓶中，加水适量，超声处理15 min，加水至刻度，摇匀，精密量取10 ml置25 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，用0.2 μm微孔滤膜滤过，作为样品溶液。②色谱条件:IonpacAS11-HC型分离柱(4×250 mm)(载体为大孔乙基乙烯苯和2-乙烯苯的聚合物，直径9.0 μm，孔径2000埃，功能基团为烷醇季胺，胶联度55，柱容量高为290 μm/柱);柱温:30℃;淋洗液:氢氧化钾溶液(20 mmol/L);流速1.10 ml/min电导检测法检测(电导池有效容积:1 μl，信号范围:0 ～ 500 μS，温度:室温);进样体积:100 μl。③系统实用性:精密量取标准亚硝酸根储备液2 ml置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为亚硝酸根对照溶液;取亚硝酸根对照溶液和样品溶液按②项下色谱条件分别进样，结果绘制图谱。④线性关系:精密量取标准亚硝酸根溶液0.1、1、2、3、4 及5 ml分别置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，取溶液按②项下色谱条件分别进样，以亚硝酸根峰面积(A)与亚硝酸根进样量(C)作回归曲线。⑤精密度试验:精密量取标准亚硝酸根储备液2 ml置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，取溶液按②项下色谱条件重复进样5次，以亚硝酸根色谱峰面积计算。⑥重复性试验:取甲硝唑片［远大医药(中国)有限公司，批号:121261］50片，分置5个100 ml量瓶(每个量瓶中10片)中，分别照①项下样品溶液的制备方法制成样品溶液;取样品溶液按②项下色谱条件分别进样，以亚硝酸根色谱峰面积计算。⑦最低检出限和最低定量限:精密量取标准亚硝酸根储备液0.2 ml，置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为亚硝酸根对照溶液，用水做为空白溶液。取上述两种溶液按②项下色谱条件进样，以基线噪音计算最低检出限和最低定量限。⑧稳定性试验:将样品测定项下溶液放置0、2、4、8、12 h 后按②项下色谱条件分别进样，按亚硝酸根色谱峰面积计算RSD。⑨加样回收试验:取甲硝唑片［远大医药(中国)有限公司，批号121261，每1片含亚硝酸根2.015 μg］5片，分别置9个100 ml量瓶中，分别加标准亚硝酸根储备液0.5、0.5、0.5、1、1 、1、1.5、1.5 和 1.5 ml，分别照①项下样品溶液的制备方法制成样品溶液;取样品溶液按②项下色谱条件分别进样，按线性回归方程计算测得量。⑩样品含量:分别取3个批次甲硝唑片［远大医药(中国)有限公司，批号 121261、121245、130125］，分别置100 ml量瓶(每瓶10片)中，分别照①项下样品溶液的制备方法制成样品溶液，取样品溶液按②项下色谱条件分别进样，按线性回归方程计算含量。

2 结果

2.1 系统实用性 样品溶液色谱图中在亚硝酸根对照溶液色谱图相同保留时间位置有相应的色谱峰，亚硝酸根色谱峰与其他相邻色谱峰有较好的分离度，分离度大于2.5，理论塔板数按亚硝酸根色谱峰计算大于3000，见图1。

图1 离子色谱图 a.对照品 b.样品 1.亚硝酸根色谱峰

2.2 线性关系 线性关系回归曲线:A=4.4623C-0.00003，r=0.9999，n=6。结果表明，亚硝酸根进样量在0.001～0.05 μg呈良好的线性关系。

2.3 精密度 精密度试验结果亚硝酸根平均峰面积为0.08923，RSD为0.5%。

2.4 重复性 重复性试验结果亚硝酸根平均峰面积为0.036，RSD为0.8%。

2.5 最低检出限和最低定量限 结果空白溶液色谱图中未见色谱峰，基线噪音0.001 μS;亚硝酸根色谱峰峰高为0.0425 μS。按3倍噪音比计算，最低检出限每1 ml被测定溶液中含亚硝酸根0.0014 μg。按10倍噪音比计算，最低定量线为每1 ml被测定溶液中含亚硝酸根0.0046 μg。

2.6 稳定性 稳定性试验结果亚硝酸根色谱峰面积变化不大，RSD为0.7%。

2.7 加样回收试验结果 平均99.0%，RSD0.3%，见表1。

表1 亚硝酸根加样回收试验结果

2.8 样品含量 测定结果见表2。

表2 3批样品含量测定结果

3 讨论

①该实验方法结果准确、方便、快速、测定溶液稳定，适用于甲硝唑片中亚硝酸根的定量分析。②检测亚硝酸根可选择安倍检测器、紫外检测器、电导检测器。安倍检测器虽然专属性较强，但峰面积重现性较差;紫外检测器在检测亚硝酸根需要衍生显色后测定，方法繁琐，影响因素较多，且该方法检测灵敏度低;电导检测器对常见阴离子均有响应，灵敏度高，可测定样品中痕量的亚硝酸根。③使用电导检测器时，淋洗液有很高的检测信号，抑制器可降低淋洗液的背景电导，增加被测定离子的电导值。④由于甲硝唑片中其他成分影响，为了达到符合测定要求的色谱条件，实验中采用了稀释样品到较低浓度的方法。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)［M］.北京:中国医药科技出版社，2010:153-154.

［2］何金奎，王丹丹.亚硝酸盐中毒临床分析［J］.中国社区医师:2013，15(1):176.

［3］李良，王晴，江勇，等.离子色谱法同时测定奶粉中亚硝酸根、硝酸根、氯离子和磷酸跟［J］.理化检验-化学分册，2007，43(10):836-837.

［4］张磊，刘肖，赵云峰，等.离子色谱法测定食品中硝酸盐和亚硝酸盐［J］.中国食品卫生杂志，2008，20(4):294-295.