苍术麸炒前后正丁醇部位对湿阻中焦证大鼠的药效学研究

季光琼，肖 波，刘艳菊，刘 芬，李 鑫，许安安

(湖北中医药大学药学院，湖北武汉 430065)

苍术为菊科植物茅苍术 Atractylodes lancea(Thunb.)DC.或北苍术Atractylodes chinensis(DC.)Koidz.的干燥根茎。主治湿阻中焦，脘腹胀满，泄泻，水肿，脚气痿躄，风湿痹痛，风寒感冒，雀目，眼目昏涩等症。味甘、苦，性温，归脾、肾、肝经［1］。生苍术燥性较大，麸炒后燥性缓和，辛性减弱，健脾和胃作用增强［2］。 《神农本草经》将其列为上品; 《本经》中称“作煎饵久服，轻身延年，不饥”［3］。苍术为临床常用中药，本课题组已完成苍术麸炒前后水提物总部位药效研究［4］，研究表明苍术炮制以后水提物总部位健脾和胃的功效有所加强，苍术麸炒后燥性得以缓和，本实验在此基础上，对其有效部位之一正丁醇部位进行进一步药效学研究，通过比较苍术麸炒前后正丁醇部位药效变化，探讨其健脾和缓和燥性的作用，寻求麸炒苍术药效变化的物质基础，为进一步阐释麸炒苍术炮制机理提供实验依据。

1 材料

1.1 药物 苍术饮片 (购自亳州市保华药业有限公司，批号110501)，麸苍术为自制 (方法参考《中国药典》2010年版麸炒法附录ⅡD)，香砂养胃片 (昆明金殿制药有限公司，国药准字Z20025521)。10%炭末混悬液 (活性炭和阿拉伯胶各10%)，胃泌素放射免疫分析试剂盒 (北京北方生物技术研究所，国药准字S10940100)，Xylene brilliant cyaninG(考马斯蓝工作液，百浩生物科技有限公司)。

1.2 动物 SD大鼠70只，雌雄各半，体质量 (150±20)g(周龄为5～7周，选择体质量是与给药量对应，故选则此质量的大鼠)，由华中科技大学同济医学院提供，许可证号SCXK鄂2004-0007。

1.3 仪器 UV-1200紫外可见分光光度计 (上海美谱达仪器有限公司);KS604721放射免疫分析仪 (北京科斯佳科技有限公司);TG-16S低温离心机 (四川蜀科仪器有限公司)。

2 方法与结果

2.1 药液

2.1.1 给药剂量计算［5］根据《中国药典》2010年版，设定9 g为成人用剂量 (临床上苍术处方剂量为3～9 g)，成人以60 kg为标准体质量计算，每天的剂量为9×103mg/60 kg，即150 mg/kg，大鼠以150 g计，由成人换算大鼠用药剂量为 D大鼠=D成人×换算系数 =150 mg/kg×6.17=925.5 mg/kg。以150 g为大鼠标准体质量，得到每只大鼠每天给药量为138.8 mg饮片。

2.1.2 药液制备方法 给药组:称取苍术及麸炒苍术饮片各50 g，加水500 mL，浸泡过夜，蒸馏法提尽挥发油，水液过滤，浓缩，备用。将浓缩液加水制成约150 mL水液，依次用三氯甲烷、正丁醇萃取，每次加入溶剂50 mL萃取至无色。所得正丁醇萃取液用旋转蒸发仪减压蒸干，制得浸膏备用 (生苍术浸膏得率为19.80%，麸苍术浸膏得率为20.20%)。阳性对照组:将香砂养胃片碾碎，取适量药粉 (根据“2.1.1”项换算剂量)，加水制成混悬液，得阳性组药液。模型组以0.9%生理盐水相同量给药。各给药组剂量为:低剂量组和阳性组为925.5 mg/kg，高剂量加倍;给药量均为1.5 mL。

2.2 分组与造模［6］将70只SD大鼠随机分为7组，每组10只，分别为生品高、低剂量组，麸品高、低剂量组，阳性组，模型组和正常组。除正常组外，其他6组按以下方法造模7 d:每天定时游泳15 min(水深25 cm、水温25℃)游泳完毕后，立即在7 d内单日灌胃给予25 mL/kg液态猪油，7 d内双日灌胃给予30%的蜂蜜，放到用1000 mL水浇200 g湿垫料鼠笼中饲养 (大鼠笼需用塑料薄膜覆盖)。正常组大鼠在正常实验环境中饲养。

2.3 统计学分析 采用SPSS 19.0统计软件进行组间均数的统计学分析 (t检验)。

2.4 正丁醇部位对湿阻中焦大鼠GAS的影响 造模7 d以后，生、麸品高低剂量组、阳性组、模型组分别按照对应药液灌胃给药，2次/d，1.5 mL次，正常组不给药。造模组在造模完成后次日断头取血，正常组在饲养7 d后断头取血，各给药组末次给药后1 h断头取血，用低温离心机离心分离出血清，用放射免疫方法测血清中GAS水平 (按试剂盒方法操作)。结果见表1。

表1 苍术麸炒前后正丁醇部位提取物对GAS水平和小肠推进率的影响 ()

注:与模型组比较，*P＜0.05;与生品低剂量比较，▲P＜0.05;与生品高剂量比较，●P＜0.05

组别 动物数只 GAS(mg·L－1) 小肠推进率%生品低剂量组 10 71.18±13.69* 73.52±7.58*10 86.66±7.40 60.20±4.70生品高剂量组 10 73.61±19.01* 58.48±3.61＊▲麸品低剂量组 10 73.96±18.20＊▲ 75.33±9.18＊▲麸品高剂量组 10 75.12±7.30＊▲● 62.59±6.84*阳性组 10 90.82±5.36* 65.82±9.52*模型组 10 58.17±12.01 37.30±13.46正常组

数据表明:生、麸品高低剂量组较模型组GAS水平明显升高，且麸品GAS水平高于生品，且经t检验生、麸品组都较模型组有差异。结果提示，苍术经麸炒后正丁醇部位健脾和胃作用增强。

2.5 正丁醇部位对湿阻中焦证大鼠小肠推进率的影响 各组大鼠给水不给食12 h(空腹状态)，各给药组末次给药1 h后、模型组造模完成后次日、正常组在饲养7 d后，灌胃给予新鲜配制的炭末混悬液，15 min后脱颈处死大鼠，立即剖腹，取出自幽门至回盲部的消化管，不加牵引地平铺于玻璃板上，测其全长和炭末所在位置，计算占结肠全长的百分比，进行组间比较，即小肠推进率。小肠推进率=炭末推进长度 (cm)小肠长度 (cm) ×100%，结果见表1。

结果显示，各药物组小肠推进率较模型组均明显增加，经t检验均有明显差异。直观上比较数据，显示麸品小肠推进率强于生品，且生、麸品高剂量组更接近正常组平均值。结果提示，苍术经麸炒后正丁醇部位健脾作用增强。

2.6 正丁醇部位对湿阻中焦大鼠证尿量的影响 取大鼠代谢笼收集尿液:模型组造模7 d后次日12 h收集尿量1次，正常组饲养7 d后收集次日尿量1次，其他各给药组在给药 (造模后次日给药)7 d后，收集的尿液，均以2000 r/min离心5 min，将上清液置于4℃冰箱保存，备用。记录数据。结果见表2。

表2 苍术麸炒前后正丁醇部位提取物给药7天后尿量结果()

表2 苍术麸炒前后正丁醇部位提取物给药7天后尿量结果()

注:与模型组比较，*P＜0.05;与正常组比较，△P＜0.05

mL生品低剂量组组别 动物数只 尿量10 5.0±1.7生品高剂量组 10 5.2±1.5*麸品低剂量组 10 4.6±1.2麸品高剂量组 10 4.7±1.0阳性组 10 6.9±2.2*模型组 10 3.6±2.2△正常组10 4.9±1.3

从实验结果直观判断，模型组大鼠尿量少于正常组;生、麸品正丁醇部位尿量较模型组均有所增多，但麸品高低剂量组尿量少于生品相应组。进一步t检验，结果表明，仅生苍术正丁醇部位高剂量组较模型组有显著性差异(P＜0.05)，其他给药组较模型组无显著性差异。结果提示，生苍术利尿作用强于麸炒品，苍术麸炒后燥性得以缓和。

2.7 正丁醇部位对湿阻中焦证大鼠尿液中AQP2(水孔蛋白2)的影响［7］采用Bradford法，选用BSA蛋白对照品制作标准曲线 (y=0.2466x+0.0039)。在595 nm波长下测定各组尿液中AQP2的量，结果见表3。

表3 苍术麸炒前后正丁醇部位提取物对尿液中AQP2影响(，n=10)

表3 苍术麸炒前后正丁醇部位提取物对尿液中AQP2影响(，n=10)

注:与正常组比较，*P＜0.05;与模型组比较，△P＜0.05

mg生品低剂量组 10 1.22±0.21组别 动物数只 AQP2△生品高剂量组 10 1.26±0.13△麸品低剂量组 10 1.45±0.14△麸品高剂量组 10 1.44±0.12△阳性组 10 1.34±0.24△模型组 10 2.03±0.41*正常组10 1.29±0.11

结果显示，模型组AQP2的量较正常组明显增加;各给药组正丁醇部位AQP2的量均较模型组有明显降低，且生品组低于麸品组接近正常组;阳性组较模型组AQP2的量有所降低，平均值介于生品和麸品之间。总之，给药后模型大鼠尿液中AQP2的量趋于正常。结果提示:各给药组有调节AQP2量的作用。且由于苍术生品燥性较强，对湿阻中焦模型大鼠的去湿作用较强，麸炒后该部位燥湿作用表现较弱，两者差异显著。

2.8 正丁醇部位对大鼠脾脏质量的影响 造模以后，给药方式同“2.4”项，于相同时间点取出脾脏，称取脾脏质量。结果见表4。

结果显示，生品高、低剂量组，麸品高、低剂量组，正常组脾质量都较模型组大，麸品高、低剂量组分别较生品高、低剂量组大，经t检验，生品低、高剂量组，麸品低、高剂量组，以及正常组都较模型组有显著性差异。提示为苍术正丁醇部位健脾燥湿作用有一定的指导作用，且麸品正丁醇部位健脾作用增强。

表4 苍术麸炒前后正丁醇部位提取物对脾质量影响()

表4 苍术麸炒前后正丁醇部位提取物对脾质量影响()

注:与模型组比较，*P＜0.01

g生品低剂量组 10 0.5935±0.0723组别 动物数只 脾质量*生品高剂量组 10 0.6193±0.0854*麸品低剂量组 10 0.6287±0.0539*麸品高剂量组 10 0.6441±0.0734*模型组 10 0.4649±0.0986阳性组 10 0.6203±0.0584正常组 10 0.6993±0.0916*

3 结论

苍术正丁醇部位药效实验结果表明，麸炒苍术可增加湿阻中焦大鼠胃泌素水平、小肠推进率，且可提高模型大鼠脾质量，提示能增强健脾作用;生苍术能促进模型大鼠利尿作用、增加尿量，降低尿液中AQP2的量，其作用强于麸炒苍术，提示麸炒可缓和燥性。该结果表明，苍术正丁醇部位是其炮制改变药效的有效部位之一，是探讨麸炒作用的关键物质基础部位之一。

4 讨论

4.1 苍术健脾作用主要指标的选择 中医理论认为，脾喜燥恶湿，苍术具燥湿健脾作用，用于湿阻中焦，脘腹胀满。本实验选择湿阻中焦证模型符合苍术的主治病证。湿困脾，不能运化水谷，而致脘腹胀满。GAS为胃壁细胞表面的一种囊体［8］，能刺激胃黏膜细胞增殖，分泌盐酸和胃蛋白酶原;刺激胃窦与肠运动，有利于胃排空等作用。所以选择GAS水平可作为疗效评定的客观指标［9］。肠推进率是胃动力评价的常用指标［10］，该指标可评价病症的改善情况。GAS水平及小肠推进率可共同反映健脾作用强弱。

4.2 苍术燥性指标的选择 中医认为，“湿”为六淫之一，湿困脾，使水失运化，代谢不健，出现便溏。脾喜“燥”，燥能祛湿健脾，恢复运化水液之功能，具利水之功，所以尿量多少可作为评价苍术“燥”性直观指标之一。脾为先天之本，肾为后天之本，在运化水液过程中相互协作。脾气虚弱，可致肾阳不足，肾主通调水道，调节水液代谢。有实验表明，湿阻中焦证大鼠远端肾小管与集合管水分重吸收加强，水分被保留体内［11-12］，尿量少，便溏。而AQP2存在于肾脏集合管主细胞中，具调节尿液生成与排泄的作用，尿量增加与AQP2降低有关，因此AQP2的高低与“燥”性有关［13］。选择AQP2为燥性的另一指标符合中医和西医理论。实验结果可表明尿量增加则AQP2降低，燥性得以缓和，为解释苍术经麸炒后燥性得以缓和提供了依据。

4.3 苍术麸炒后正丁醇部位对脾质量的影响 现代医学研究认为，脾胃湿热证与水液代谢关系密切［14］。本实验生品高低剂量组、麸品高低剂量组、正常组分别与模型组比较，均有显著性差异，表明生品以及麸品正丁醇部位能增加湿阻中焦模型大鼠的脾脏质量。有实验表明，免疫器官脾脏质量的变化可反映出免疫细胞的增值数量及机体免疫功能的变化情况［15］。

4.4 苍术炮制前后水提物和正丁醇部位提取物的健脾燥湿作用的对比 通过对比苍术炮制前后水提物和正丁醇部位提取物的药效学指标尿量，直观数据显示除生品高剂量组为水提物与正丁醇部位相近外，生品低剂量、麸品高低剂量组均为水提物低于正丁醇部位，显示水提物的去湿作用稍弱于正丁醇部位。

通过对比苍术炮制前后水提物和正丁醇部位提取物的药效学指标AQP2，直观数据显示生品高低剂量、麸品高低剂量组均为水提物高于正丁醇部位，显示水提物的缓和燥性的作用弱于正丁醇部位提取物。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:150.

［2］龚千峰.中药炮制学［M］.北京:中国中医药出版社，2002:133.

［3］江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海:上海人民出版社，2006:174.

［4］刘艳菊，陈雯雯，曾 敏，等.苍术炮制前后水提物药效学研究［J］.中国中药杂志，2012，32(15):21-24.

［5］陈 奇.中药药理研究方法学［M］.北京:人民卫生出版社，2006:1169.

［6］孔祥华，汪 霞，黄 海，等.黄芩正气胶囊对湿阻中焦症大鼠模型胃肠功能的影响［J］.中国新药与临床药理，2006，17(5):338.

［7］廖荣鑫，周福生，文小敏，等.脾胃湿热证大鼠湿偏重、热偏重模型中AQP2的变化及在肾组织中的表达［J］.山东中医杂志，2007，26(12):846.

［8］王凌娟，张 雯.胃溃疡及实验性胃溃疡模型［J］.中国烧伤创疡杂质，2000(2):66-69.

［9］Cheng J，Zhou T，Liu C，et al.Protection from Fas-mediated apoptosis by a soluble form of the Fas molecule ［J］.Science，1994，263(5154):1759-1762.

［10］陈 奇.中药药理研究方法学［M］.北京:人民卫生出版社，2006:327.

［11］杨 钢.内分泌生理与病理生理学［M］.2版.天津:天津科学技术出版社，2000:173.

［12］黄秀深，刘德芳，陈 洁.大鼠中焦湿阻证与抗利尿激素关系的实验研究［J］.成都中医药大学学报，2002，25(1):37.

［13］伍小燕，陈 朝，张过伟，等.泽泻水提物对正常利尿活性及肾脏髓质AQP2作用研究［J］.实用临床医药杂志，2010，14(21):5.

［14］高清华，吕文亮，李华锋，等.燥湿运脾合剂对小鼠水液代谢影响的实验研究［J］.湖北中医杂志，2007，29(11):5-6.

［15］林培英，潘竞锵，冯昭明.蒿甲醚对小鼠血清IgG及脾重的影响［J］.药学学报，1985，20(3):211-213.