HPLC法测定补肾益脑片中补骨脂素和异补骨脂素的含量

王亚辉+李洪泽+韩风雨

【摘要】目的：建立补肾益脑片含量测定方法。方法：用HPLC法以Dikma C18（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（45∶55）；检测波长：245nm；柱温：室温；流速：1.0ml/min测定补肾益脑片中补肾脂数和异补肾脂数的含量。结果：补骨脂素的含量在0.0744～0.4644μg范围内线性关系良好（r=0.9997），异补骨脂素的含量在0.075～0.450μg范围内线性关系良好（r=0.9999）。补骨脂素平均回收率为99.668%，RSD%=0.94%；异补骨脂素平均回收率为99.5%，RSD%=1.85%。结论：该含量测定方法简便、准确。

【关键词】补肾益脑片；高效液相色谱法；补骨脂素、异补骨脂素；含量测定

【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）17-0019-02

Abstract：

Keywords：

补肾益脑片方由鹿茸（去毛）、红参、补骨脂（盐制）等十六味药组成。其功能主治为补肾益气，养血生精。用于气血两虚，肾虚精亏，心悸气短，失眠健忘，遗精盗汗，腰腿酸软，耳鸣耳聋。依据《中国药典》（2010版）中补肾益脑片标准[1]，经多次试验，确立了本品中补骨脂有效成分补骨脂素、异补骨脂素的含量测定方法，阴性无干扰，经方法学考察，方法的重现性、稳定性、精密度、回收率试验均符合有关规定。

1仪器与试药

1.1仪器Lab Alliance高效液相色谱仪，Model 500检测器，Series III泵，ANASTAR色谱工作站，Dikma C18柱（4.6×250mm，5μm）；AB135-S电子分析天平；Model C3860A 超声波仪（上海超声仪器厂）。

1.2试药补骨脂素对照品（批号：110739-201115，中国食品药品检定研究院）；异补骨脂素（批号：110738-201012，中国食品药品检定研究院）；补肾益脑片（自制，批号20130217、20131007、20131008、20131009）。甲醇为色谱纯；水为二次蒸馏水，其试剂均为分析纯。

2方法和结果

2.1波长选择称取补骨脂素、异补骨脂素对照品适量，加甲醇溶液配成每1ml含0.06mg的溶液，在200～500nm的波长范围内扫描，在245nm处有最大吸收。

2.2色谱条件色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（45∶55）；检测波长：245nm；柱温：室温；流速：1.0ml/min。在此条件下，补骨脂素、异补骨脂素与其他组分均达到基线分离，理论板数按补骨脂素计算大于3000。

2.3溶液的制备

2.3.1对照品溶液的制备分别取补骨脂素异补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含25μg的混合溶液，即得。

2.3.2供试品溶液的制备取本品适量，研细，取约3.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率280W，频率40kHz）30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足损失的重量，摇匀，滤过，即得。

2.3.3阴性溶液的制备取除补骨脂外其它药材按供试品制备方法制成阴性样品溶液。

2.4阴性干扰试验精密吸取上述三种溶液各10μl，注入液相色谱仪中，绘制液相色谱图，在对照品色谱相应的位置，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性液在此峰位无吸收，表明该方法专属性良好。

2.5线性范围考察分别精密吸取补骨脂素对照品溶液7.74、15.48、23.22、30.96、38.7、46.44μg/ml；异补骨脂素对照品溶液7.5、15、22.5、30.0、37.5、45.0μg/ml，按拟定的色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，补骨脂素、异补骨脂素进样量（μg）坐标绘制标准曲线，计算得回归方程。补骨脂素为：Y=5020682X-387.807（r=0.99974）；异补骨脂素为Y=5079826X-18635.9（r=0.9999）。补骨脂素、异补骨脂素分别在0.0744-0.4644μg和0.075-0.450μg范围内与峰面积程良好的线性关系。

2.6稳定性性试验取样品（批号20130217），研细，取粉末3.0g，精密称定，按正文“2.3”制备供试液，精密吸取同一供试液，分别于0、2、4、6、8、10h进样分析，测定色谱峰面积，RSD%为0.97%，故供试液10h内具有良好的稳定性。

2.7精密度试验精密吸取同一浓度供品溶液10μl，连续进样5次，测定峰面积，补骨脂素与异补骨脂素RSD%分别为1.43%和1.34%。

2.8重复性试验取本品（批号20130217），研细，分别取五份，精密称定，分别按正文“2.3”方法操作，测定，补骨脂素含量为4.9999、0.5042、0.5038、0.5005、0.4882 mg/g，异补骨脂素含量为0.4526、0.4729、0.4620、0.4584、0.4558 mg/g，总含量RSD%为1.31%，表明本试验重复性良好。

2.9回收率考察精密称取本品（批号20130217，补骨脂素含量0.4993mg/g和异补骨脂素含量0.4603mg/g）五份，每份分别加补骨脂素对照品（0.1162mg/ml）5ml和异补骨脂素（0.1072mg/ml）5ml，按正文“2.3”制备供试品溶液，按上述色谱条件依法测定，结果如下：

3讨论

参考文献[2]，对索氏提取和超声提取，且对超声提取时间进行考察。结果表明超声提取在30min提取已完全且与索氏提取含量相当，由于超声提取方便，故选择超声提取30min。

测定结果表明，选用补骨脂素和异补骨脂素作为定量检测指标以及建立的HPLC色谱条件，方法灵敏度高，专属性强，重现性好并通过对三批样品含量及药材含量进行考察，可作为补肾益脑片质量控制指标之一。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2]张卫红，郑玉光，李晓松，等.HPLC法测不同产地补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量[J].河北中医药学报，2008，23（1）：43.

（收稿日期：2014.07.09）endprint

【摘要】目的：建立补肾益脑片含量测定方法。方法：用HPLC法以Dikma C18（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（45∶55）；检测波长：245nm；柱温：室温；流速：1.0ml/min测定补肾益脑片中补肾脂数和异补肾脂数的含量。结果：补骨脂素的含量在0.0744～0.4644μg范围内线性关系良好（r=0.9997），异补骨脂素的含量在0.075～0.450μg范围内线性关系良好（r=0.9999）。补骨脂素平均回收率为99.668%，RSD%=0.94%；异补骨脂素平均回收率为99.5%，RSD%=1.85%。结论：该含量测定方法简便、准确。

【关键词】补肾益脑片；高效液相色谱法；补骨脂素、异补骨脂素；含量测定

【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）17-0019-02

Abstract：

Keywords：

补肾益脑片方由鹿茸（去毛）、红参、补骨脂（盐制）等十六味药组成。其功能主治为补肾益气，养血生精。用于气血两虚，肾虚精亏，心悸气短，失眠健忘，遗精盗汗，腰腿酸软，耳鸣耳聋。依据《中国药典》（2010版）中补肾益脑片标准[1]，经多次试验，确立了本品中补骨脂有效成分补骨脂素、异补骨脂素的含量测定方法，阴性无干扰，经方法学考察，方法的重现性、稳定性、精密度、回收率试验均符合有关规定。

1仪器与试药

1.1仪器Lab Alliance高效液相色谱仪，Model 500检测器，Series III泵，ANASTAR色谱工作站，Dikma C18柱（4.6×250mm，5μm）；AB135-S电子分析天平；Model C3860A 超声波仪（上海超声仪器厂）。

1.2试药补骨脂素对照品（批号：110739-201115，中国食品药品检定研究院）；异补骨脂素（批号：110738-201012，中国食品药品检定研究院）；补肾益脑片（自制，批号20130217、20131007、20131008、20131009）。甲醇为色谱纯；水为二次蒸馏水，其试剂均为分析纯。

2方法和结果

2.1波长选择称取补骨脂素、异补骨脂素对照品适量，加甲醇溶液配成每1ml含0.06mg的溶液，在200～500nm的波长范围内扫描，在245nm处有最大吸收。

2.2色谱条件色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（45∶55）；检测波长：245nm；柱温：室温；流速：1.0ml/min。在此条件下，补骨脂素、异补骨脂素与其他组分均达到基线分离，理论板数按补骨脂素计算大于3000。

2.3溶液的制备

2.3.1对照品溶液的制备分别取补骨脂素异补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含25μg的混合溶液，即得。

2.3.2供试品溶液的制备取本品适量，研细，取约3.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率280W，频率40kHz）30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足损失的重量，摇匀，滤过，即得。

2.3.3阴性溶液的制备取除补骨脂外其它药材按供试品制备方法制成阴性样品溶液。

2.4阴性干扰试验精密吸取上述三种溶液各10μl，注入液相色谱仪中，绘制液相色谱图，在对照品色谱相应的位置，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性液在此峰位无吸收，表明该方法专属性良好。

2.5线性范围考察分别精密吸取补骨脂素对照品溶液7.74、15.48、23.22、30.96、38.7、46.44μg/ml；异补骨脂素对照品溶液7.5、15、22.5、30.0、37.5、45.0μg/ml，按拟定的色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，补骨脂素、异补骨脂素进样量（μg）坐标绘制标准曲线，计算得回归方程。补骨脂素为：Y=5020682X-387.807（r=0.99974）；异补骨脂素为Y=5079826X-18635.9（r=0.9999）。补骨脂素、异补骨脂素分别在0.0744-0.4644μg和0.075-0.450μg范围内与峰面积程良好的线性关系。

2.6稳定性性试验取样品（批号20130217），研细，取粉末3.0g，精密称定，按正文“2.3”制备供试液，精密吸取同一供试液，分别于0、2、4、6、8、10h进样分析，测定色谱峰面积，RSD%为0.97%，故供试液10h内具有良好的稳定性。

2.7精密度试验精密吸取同一浓度供品溶液10μl，连续进样5次，测定峰面积，补骨脂素与异补骨脂素RSD%分别为1.43%和1.34%。

2.8重复性试验取本品（批号20130217），研细，分别取五份，精密称定，分别按正文“2.3”方法操作，测定，补骨脂素含量为4.9999、0.5042、0.5038、0.5005、0.4882 mg/g，异补骨脂素含量为0.4526、0.4729、0.4620、0.4584、0.4558 mg/g，总含量RSD%为1.31%，表明本试验重复性良好。

2.9回收率考察精密称取本品（批号20130217，补骨脂素含量0.4993mg/g和异补骨脂素含量0.4603mg/g）五份，每份分别加补骨脂素对照品（0.1162mg/ml）5ml和异补骨脂素（0.1072mg/ml）5ml，按正文“2.3”制备供试品溶液，按上述色谱条件依法测定，结果如下：

3讨论

参考文献[2]，对索氏提取和超声提取，且对超声提取时间进行考察。结果表明超声提取在30min提取已完全且与索氏提取含量相当，由于超声提取方便，故选择超声提取30min。

测定结果表明，选用补骨脂素和异补骨脂素作为定量检测指标以及建立的HPLC色谱条件，方法灵敏度高，专属性强，重现性好并通过对三批样品含量及药材含量进行考察，可作为补肾益脑片质量控制指标之一。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2]张卫红，郑玉光，李晓松，等.HPLC法测不同产地补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量[J].河北中医药学报，2008，23（1）：43.

（收稿日期：2014.07.09）endprint

【摘要】目的：建立补肾益脑片含量测定方法。方法：用HPLC法以Dikma C18（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（45∶55）；检测波长：245nm；柱温：室温；流速：1.0ml/min测定补肾益脑片中补肾脂数和异补肾脂数的含量。结果：补骨脂素的含量在0.0744～0.4644μg范围内线性关系良好（r=0.9997），异补骨脂素的含量在0.075～0.450μg范围内线性关系良好（r=0.9999）。补骨脂素平均回收率为99.668%，RSD%=0.94%；异补骨脂素平均回收率为99.5%，RSD%=1.85%。结论：该含量测定方法简便、准确。

【关键词】补肾益脑片；高效液相色谱法；补骨脂素、异补骨脂素；含量测定

【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）17-0019-02

Abstract：

Keywords：

补肾益脑片方由鹿茸（去毛）、红参、补骨脂（盐制）等十六味药组成。其功能主治为补肾益气，养血生精。用于气血两虚，肾虚精亏，心悸气短，失眠健忘，遗精盗汗，腰腿酸软，耳鸣耳聋。依据《中国药典》（2010版）中补肾益脑片标准[1]，经多次试验，确立了本品中补骨脂有效成分补骨脂素、异补骨脂素的含量测定方法，阴性无干扰，经方法学考察，方法的重现性、稳定性、精密度、回收率试验均符合有关规定。

1仪器与试药

1.1仪器Lab Alliance高效液相色谱仪，Model 500检测器，Series III泵，ANASTAR色谱工作站，Dikma C18柱（4.6×250mm，5μm）；AB135-S电子分析天平；Model C3860A 超声波仪（上海超声仪器厂）。

1.2试药补骨脂素对照品（批号：110739-201115，中国食品药品检定研究院）；异补骨脂素（批号：110738-201012，中国食品药品检定研究院）；补肾益脑片（自制，批号20130217、20131007、20131008、20131009）。甲醇为色谱纯；水为二次蒸馏水，其试剂均为分析纯。

2方法和结果

2.1波长选择称取补骨脂素、异补骨脂素对照品适量，加甲醇溶液配成每1ml含0.06mg的溶液，在200～500nm的波长范围内扫描，在245nm处有最大吸收。

2.2色谱条件色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（45∶55）；检测波长：245nm；柱温：室温；流速：1.0ml/min。在此条件下，补骨脂素、异补骨脂素与其他组分均达到基线分离，理论板数按补骨脂素计算大于3000。

2.3溶液的制备

2.3.1对照品溶液的制备分别取补骨脂素异补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含25μg的混合溶液，即得。

2.3.2供试品溶液的制备取本品适量，研细，取约3.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率280W，频率40kHz）30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足损失的重量，摇匀，滤过，即得。

2.3.3阴性溶液的制备取除补骨脂外其它药材按供试品制备方法制成阴性样品溶液。

2.4阴性干扰试验精密吸取上述三种溶液各10μl，注入液相色谱仪中，绘制液相色谱图，在对照品色谱相应的位置，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性液在此峰位无吸收，表明该方法专属性良好。

2.5线性范围考察分别精密吸取补骨脂素对照品溶液7.74、15.48、23.22、30.96、38.7、46.44μg/ml；异补骨脂素对照品溶液7.5、15、22.5、30.0、37.5、45.0μg/ml，按拟定的色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，补骨脂素、异补骨脂素进样量（μg）坐标绘制标准曲线，计算得回归方程。补骨脂素为：Y=5020682X-387.807（r=0.99974）；异补骨脂素为Y=5079826X-18635.9（r=0.9999）。补骨脂素、异补骨脂素分别在0.0744-0.4644μg和0.075-0.450μg范围内与峰面积程良好的线性关系。

2.6稳定性性试验取样品（批号20130217），研细，取粉末3.0g，精密称定，按正文“2.3”制备供试液，精密吸取同一供试液，分别于0、2、4、6、8、10h进样分析，测定色谱峰面积，RSD%为0.97%，故供试液10h内具有良好的稳定性。

2.7精密度试验精密吸取同一浓度供品溶液10μl，连续进样5次，测定峰面积，补骨脂素与异补骨脂素RSD%分别为1.43%和1.34%。

2.8重复性试验取本品（批号20130217），研细，分别取五份，精密称定，分别按正文“2.3”方法操作，测定，补骨脂素含量为4.9999、0.5042、0.5038、0.5005、0.4882 mg/g，异补骨脂素含量为0.4526、0.4729、0.4620、0.4584、0.4558 mg/g，总含量RSD%为1.31%，表明本试验重复性良好。

2.9回收率考察精密称取本品（批号20130217，补骨脂素含量0.4993mg/g和异补骨脂素含量0.4603mg/g）五份，每份分别加补骨脂素对照品（0.1162mg/ml）5ml和异补骨脂素（0.1072mg/ml）5ml，按正文“2.3”制备供试品溶液，按上述色谱条件依法测定，结果如下：

3讨论

参考文献[2]，对索氏提取和超声提取，且对超声提取时间进行考察。结果表明超声提取在30min提取已完全且与索氏提取含量相当，由于超声提取方便，故选择超声提取30min。

测定结果表明，选用补骨脂素和异补骨脂素作为定量检测指标以及建立的HPLC色谱条件，方法灵敏度高，专属性强，重现性好并通过对三批样品含量及药材含量进行考察，可作为补肾益脑片质量控制指标之一。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2]张卫红，郑玉光，李晓松，等.HPLC法测不同产地补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量[J].河北中医药学报，2008，23（1）：43.

（收稿日期：2014.07.09）endprint