HPLC法测定秋水仙药材中秋水仙碱的含量

刘伟新　沈晓丽　苏莱曼?哈力克

【摘要】目的：研究秋水仙药材中秋水仙碱的提取分离及对秋水仙碱进行质量控制。方法：用0.03mol/L的盐酸乙醇溶液提取药材。色谱柱：Waters MS C18（4.6×250mm）；流动相：甲醇-水（45∶55）；检测波长：353nm；流速：1.0ml/min。结果：能很好的将秋水仙碱分离出来，秋水仙碱在0.074～0.444mg/ml之间线性关系良好，r=0.9999；平均回收率为103.57%，RSD为4.58%。结论：本文使用用乙醇做提取溶剂，无毒性；含量测定方法操作简单，结果准确，重复性好，可用于秋水仙药材的质量控制。

【关键词】维吾尔药材秋水仙；秋水仙碱；质量控制；含量测定

【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）17-0010-02

Abstract：

Keywords：

秋水仙为百合科植物秋水仙Colchicum autumnale L.的干燥鳞茎。为维吾尔药常用药材，维吾尔语称“苏润江”。主产于欧洲，尤盛产于地中海和黑海沿岸，非洲和西亚、南亚等地亦有分布 ，目前多从巴基斯坦进口。我国自七十年代起从国外引进种子和球茎，分别在北京、庐山、昆明等地试种。

秋水仙被收载于《卫生部药品标准维吾尔药分册》，秋水仙碱作为秋水仙的主要化学成分，尚未建立含量测定方法。此次，作为国家药品（维药）标准提高研究课题，对原有的秋水仙标准进行了修订、提高，同时，建立了秋水仙碱含量测定的方法。

1仪器与材料

1.1仪器Waters 2695高效液相色谱仪（美国Waters公司），Empower工作站（美国Waters公司）；ZY012台式电热干燥箱；METTLER AE 200型电子分析天平（瑞士）。

1.2材料秋水仙碱（批号101176-201001，中国药品生物制品检定所）。甲醇为色谱纯，水为去离子水，其余试剂均为分析纯。10批秋水仙Colchicum autumnale L.供试品药材分别从伊朗、巴基斯坦进口，由新疆维吾尔药业有限责任公司、新疆华康药业股份有限公司提供。

2方法与结果

2.1秋水仙提取分离取秋水仙粉末（过3号筛）2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.03mol/L的盐酸乙醇溶液（2.7→100）20ml，振荡15min，放置24h，滤过，取续滤液，即得。

2.2秋水仙碱的含量测定

2.2.1色谱条件色谱柱：Waters MS C18（4.6×250mm）；流动相：甲醇-水（45∶55）；检测波长：353nm；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；进样量：10μl 。在此色谱条件下，秋水仙碱峰型较好，并且能够较好的分离。色谱图见图1。

2.2.2对照品溶液的制备取秋水仙碱对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含24μg的溶液，摇匀，即得。

2.2.3供试品溶液的制备取本品粉末约1g，精密称定，置具塞锥形瓶瓶中，精密加入0.03mol/L的盐酸乙醇溶液（2.7→1000）20ml，振荡15min（恒温振荡器；室温；中等强度），放置24h，过0.45微孔滤膜，即得。

2.2.4线性关系考察精密称取秋水仙碱6.17mg，置25ml容量瓶中，加入乙醇适量，溶解，并定容至刻度，摇匀，作为对照储备液。精密量取上述储备液3、6、9、12、15、18μl，注入高效液相色谱仪，照上述色谱条件测定峰面积。以秋水仙碱浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程Y=2446183.144X-18495.7333 （r=0.9999），结果表明，秋水仙碱量在0.074～0.444mg/ml之间线性关系良好。

2.2.5精密度实验吸取秋水仙碱对照品溶液10μl，在上述色谱条件下，连续进样6次，结果秋水仙碱峰面积RSD值为0.15%。

2.2.6重复性试验取秋水仙药材6份，按供试品溶液的制备方法制得供试品，在相同的色谱条件下，连续进6针，进样量10μl，依次测定。结果供试品中秋水仙的平均质量分数为0.04%，RSD为0.73%。

2.2.7稳定性试验分别于0、4、8、12、24h后进样，共5次，结果秋水仙峰面积的 RSD值为0.56%。结果表明，供试品溶液室温下24h内稳定。

2.2.8加样回收试验精密称取已测定的秋水仙药材供试品6份，每份0.5g，另取0.2468mg/ml秋水仙碱对照品溶液1ml，因所用秋水仙对照品含量为93.0%，实际加入量为0.2295mg/ml，按供试品溶液制备方法同法操作，进样量10μl。结果秋水仙碱平均回收率为103.57%，RSD为4.58%。

2.2.9专属性试验将制得的供试品溶液、空白溶液和秋水仙碱对照品溶液，依次进样，结果：空白溶液不干扰供试品中秋水仙碱的含量测定。

2.2.10供试品测定取不同产地、不同批次的秋水仙药材供试品，按供试品制备方法处理，依次测定（n=10），结果见表1。

根据测定结果，秋水仙药材的含量定为按干燥品计算，含秋水仙碱 （C22H25NO6）不得少于0.008%，纳入标准。

3结论

秋水仙Colchicum autumnale L.的干燥鳞茎做为维吾尔常用药材，一直被用来治疗关节骨痛，肝炎，黄疸等疾病。秋水仙药材中秋水仙碱的含量测定也曾有文章报导过，但其提取方法使用大量的三氯甲烷，毒性大，提取方式及含测方法都较为繁复。本文使用的含测方法，用乙醇做提取溶剂，无毒性，操作简单，结果准确，可用于秋水仙药材的质量控制。

参考文献

[1]卫生部药典委员会.卫生部药品标准维吾尔药分册[S].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：721.

[2]刘勇民.维吾尔药志下册[M].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：588-592.

[3]何红平.秋水仙化学成分研究[J].化学研究与应用，1999，11（5）：509-510.

[4]国家中医药管理局《中华本草》编委会编.中华本草（维吾尔药卷）[M].上海：上海科学技术出版社，2005：281-283.endprint

【摘要】目的：研究秋水仙药材中秋水仙碱的提取分离及对秋水仙碱进行质量控制。方法：用0.03mol/L的盐酸乙醇溶液提取药材。色谱柱：Waters MS C18（4.6×250mm）；流动相：甲醇-水（45∶55）；检测波长：353nm；流速：1.0ml/min。结果：能很好的将秋水仙碱分离出来，秋水仙碱在0.074～0.444mg/ml之间线性关系良好，r=0.9999；平均回收率为103.57%，RSD为4.58%。结论：本文使用用乙醇做提取溶剂，无毒性；含量测定方法操作简单，结果准确，重复性好，可用于秋水仙药材的质量控制。

【关键词】维吾尔药材秋水仙；秋水仙碱；质量控制；含量测定

【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）17-0010-02

Abstract：

Keywords：

秋水仙为百合科植物秋水仙Colchicum autumnale L.的干燥鳞茎。为维吾尔药常用药材，维吾尔语称“苏润江”。主产于欧洲，尤盛产于地中海和黑海沿岸，非洲和西亚、南亚等地亦有分布 ，目前多从巴基斯坦进口。我国自七十年代起从国外引进种子和球茎，分别在北京、庐山、昆明等地试种。

秋水仙被收载于《卫生部药品标准维吾尔药分册》，秋水仙碱作为秋水仙的主要化学成分，尚未建立含量测定方法。此次，作为国家药品（维药）标准提高研究课题，对原有的秋水仙标准进行了修订、提高，同时，建立了秋水仙碱含量测定的方法。

1仪器与材料

1.1仪器Waters 2695高效液相色谱仪（美国Waters公司），Empower工作站（美国Waters公司）；ZY012台式电热干燥箱；METTLER AE 200型电子分析天平（瑞士）。

1.2材料秋水仙碱（批号101176-201001，中国药品生物制品检定所）。甲醇为色谱纯，水为去离子水，其余试剂均为分析纯。10批秋水仙Colchicum autumnale L.供试品药材分别从伊朗、巴基斯坦进口，由新疆维吾尔药业有限责任公司、新疆华康药业股份有限公司提供。

2方法与结果

2.1秋水仙提取分离取秋水仙粉末（过3号筛）2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.03mol/L的盐酸乙醇溶液（2.7→100）20ml，振荡15min，放置24h，滤过，取续滤液，即得。

2.2秋水仙碱的含量测定

2.2.1色谱条件色谱柱：Waters MS C18（4.6×250mm）；流动相：甲醇-水（45∶55）；检测波长：353nm；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；进样量：10μl 。在此色谱条件下，秋水仙碱峰型较好，并且能够较好的分离。色谱图见图1。

2.2.2对照品溶液的制备取秋水仙碱对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含24μg的溶液，摇匀，即得。

2.2.3供试品溶液的制备取本品粉末约1g，精密称定，置具塞锥形瓶瓶中，精密加入0.03mol/L的盐酸乙醇溶液（2.7→1000）20ml，振荡15min（恒温振荡器；室温；中等强度），放置24h，过0.45微孔滤膜，即得。

2.2.4线性关系考察精密称取秋水仙碱6.17mg，置25ml容量瓶中，加入乙醇适量，溶解，并定容至刻度，摇匀，作为对照储备液。精密量取上述储备液3、6、9、12、15、18μl，注入高效液相色谱仪，照上述色谱条件测定峰面积。以秋水仙碱浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程Y=2446183.144X-18495.7333 （r=0.9999），结果表明，秋水仙碱量在0.074～0.444mg/ml之间线性关系良好。

2.2.5精密度实验吸取秋水仙碱对照品溶液10μl，在上述色谱条件下，连续进样6次，结果秋水仙碱峰面积RSD值为0.15%。

2.2.6重复性试验取秋水仙药材6份，按供试品溶液的制备方法制得供试品，在相同的色谱条件下，连续进6针，进样量10μl，依次测定。结果供试品中秋水仙的平均质量分数为0.04%，RSD为0.73%。

2.2.7稳定性试验分别于0、4、8、12、24h后进样，共5次，结果秋水仙峰面积的 RSD值为0.56%。结果表明，供试品溶液室温下24h内稳定。

2.2.8加样回收试验精密称取已测定的秋水仙药材供试品6份，每份0.5g，另取0.2468mg/ml秋水仙碱对照品溶液1ml，因所用秋水仙对照品含量为93.0%，实际加入量为0.2295mg/ml，按供试品溶液制备方法同法操作，进样量10μl。结果秋水仙碱平均回收率为103.57%，RSD为4.58%。

2.2.9专属性试验将制得的供试品溶液、空白溶液和秋水仙碱对照品溶液，依次进样，结果：空白溶液不干扰供试品中秋水仙碱的含量测定。

2.2.10供试品测定取不同产地、不同批次的秋水仙药材供试品，按供试品制备方法处理，依次测定（n=10），结果见表1。

根据测定结果，秋水仙药材的含量定为按干燥品计算，含秋水仙碱 （C22H25NO6）不得少于0.008%，纳入标准。

3结论

秋水仙Colchicum autumnale L.的干燥鳞茎做为维吾尔常用药材，一直被用来治疗关节骨痛，肝炎，黄疸等疾病。秋水仙药材中秋水仙碱的含量测定也曾有文章报导过，但其提取方法使用大量的三氯甲烷，毒性大，提取方式及含测方法都较为繁复。本文使用的含测方法，用乙醇做提取溶剂，无毒性，操作简单，结果准确，可用于秋水仙药材的质量控制。

参考文献

[1]卫生部药典委员会.卫生部药品标准维吾尔药分册[S].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：721.

[2]刘勇民.维吾尔药志下册[M].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：588-592.

[3]何红平.秋水仙化学成分研究[J].化学研究与应用，1999，11（5）：509-510.

[4]国家中医药管理局《中华本草》编委会编.中华本草（维吾尔药卷）[M].上海：上海科学技术出版社，2005：281-283.endprint

【摘要】目的：研究秋水仙药材中秋水仙碱的提取分离及对秋水仙碱进行质量控制。方法：用0.03mol/L的盐酸乙醇溶液提取药材。色谱柱：Waters MS C18（4.6×250mm）；流动相：甲醇-水（45∶55）；检测波长：353nm；流速：1.0ml/min。结果：能很好的将秋水仙碱分离出来，秋水仙碱在0.074～0.444mg/ml之间线性关系良好，r=0.9999；平均回收率为103.57%，RSD为4.58%。结论：本文使用用乙醇做提取溶剂，无毒性；含量测定方法操作简单，结果准确，重复性好，可用于秋水仙药材的质量控制。

【关键词】维吾尔药材秋水仙；秋水仙碱；质量控制；含量测定

【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）17-0010-02

Abstract：

Keywords：

秋水仙为百合科植物秋水仙Colchicum autumnale L.的干燥鳞茎。为维吾尔药常用药材，维吾尔语称“苏润江”。主产于欧洲，尤盛产于地中海和黑海沿岸，非洲和西亚、南亚等地亦有分布 ，目前多从巴基斯坦进口。我国自七十年代起从国外引进种子和球茎，分别在北京、庐山、昆明等地试种。

秋水仙被收载于《卫生部药品标准维吾尔药分册》，秋水仙碱作为秋水仙的主要化学成分，尚未建立含量测定方法。此次，作为国家药品（维药）标准提高研究课题，对原有的秋水仙标准进行了修订、提高，同时，建立了秋水仙碱含量测定的方法。

1仪器与材料

1.1仪器Waters 2695高效液相色谱仪（美国Waters公司），Empower工作站（美国Waters公司）；ZY012台式电热干燥箱；METTLER AE 200型电子分析天平（瑞士）。

1.2材料秋水仙碱（批号101176-201001，中国药品生物制品检定所）。甲醇为色谱纯，水为去离子水，其余试剂均为分析纯。10批秋水仙Colchicum autumnale L.供试品药材分别从伊朗、巴基斯坦进口，由新疆维吾尔药业有限责任公司、新疆华康药业股份有限公司提供。

2方法与结果

2.1秋水仙提取分离取秋水仙粉末（过3号筛）2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.03mol/L的盐酸乙醇溶液（2.7→100）20ml，振荡15min，放置24h，滤过，取续滤液，即得。

2.2秋水仙碱的含量测定

2.2.1色谱条件色谱柱：Waters MS C18（4.6×250mm）；流动相：甲醇-水（45∶55）；检测波长：353nm；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；进样量：10μl 。在此色谱条件下，秋水仙碱峰型较好，并且能够较好的分离。色谱图见图1。

2.2.2对照品溶液的制备取秋水仙碱对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含24μg的溶液，摇匀，即得。

2.2.3供试品溶液的制备取本品粉末约1g，精密称定，置具塞锥形瓶瓶中，精密加入0.03mol/L的盐酸乙醇溶液（2.7→1000）20ml，振荡15min（恒温振荡器；室温；中等强度），放置24h，过0.45微孔滤膜，即得。

2.2.4线性关系考察精密称取秋水仙碱6.17mg，置25ml容量瓶中，加入乙醇适量，溶解，并定容至刻度，摇匀，作为对照储备液。精密量取上述储备液3、6、9、12、15、18μl，注入高效液相色谱仪，照上述色谱条件测定峰面积。以秋水仙碱浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程Y=2446183.144X-18495.7333 （r=0.9999），结果表明，秋水仙碱量在0.074～0.444mg/ml之间线性关系良好。

2.2.5精密度实验吸取秋水仙碱对照品溶液10μl，在上述色谱条件下，连续进样6次，结果秋水仙碱峰面积RSD值为0.15%。

2.2.6重复性试验取秋水仙药材6份，按供试品溶液的制备方法制得供试品，在相同的色谱条件下，连续进6针，进样量10μl，依次测定。结果供试品中秋水仙的平均质量分数为0.04%，RSD为0.73%。

2.2.7稳定性试验分别于0、4、8、12、24h后进样，共5次，结果秋水仙峰面积的 RSD值为0.56%。结果表明，供试品溶液室温下24h内稳定。

2.2.8加样回收试验精密称取已测定的秋水仙药材供试品6份，每份0.5g，另取0.2468mg/ml秋水仙碱对照品溶液1ml，因所用秋水仙对照品含量为93.0%，实际加入量为0.2295mg/ml，按供试品溶液制备方法同法操作，进样量10μl。结果秋水仙碱平均回收率为103.57%，RSD为4.58%。

2.2.9专属性试验将制得的供试品溶液、空白溶液和秋水仙碱对照品溶液，依次进样，结果：空白溶液不干扰供试品中秋水仙碱的含量测定。

2.2.10供试品测定取不同产地、不同批次的秋水仙药材供试品，按供试品制备方法处理，依次测定（n=10），结果见表1。

根据测定结果，秋水仙药材的含量定为按干燥品计算，含秋水仙碱 （C22H25NO6）不得少于0.008%，纳入标准。

3结论

秋水仙Colchicum autumnale L.的干燥鳞茎做为维吾尔常用药材，一直被用来治疗关节骨痛，肝炎，黄疸等疾病。秋水仙药材中秋水仙碱的含量测定也曾有文章报导过，但其提取方法使用大量的三氯甲烷，毒性大，提取方式及含测方法都较为繁复。本文使用的含测方法，用乙醇做提取溶剂，无毒性，操作简单，结果准确，可用于秋水仙药材的质量控制。

参考文献

[1]卫生部药典委员会.卫生部药品标准维吾尔药分册[S].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：721.

[2]刘勇民.维吾尔药志下册[M].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：588-592.

[3]何红平.秋水仙化学成分研究[J].化学研究与应用，1999，11（5）：509-510.

[4]国家中医药管理局《中华本草》编委会编.中华本草（维吾尔药卷）[M].上海：上海科学技术出版社，2005：281-283.endprint