IL—1B基因多态性及幽门螺旋杆菌感染与胃癌的关系研究

张军喜　段广才　郭爱叶　柴健　马颖辉　董玮

【摘要】 目的：探讨IL-1B基因多态性与胃癌易感性的关系。方法：以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分析法检测65例胃癌患者和130例非胃癌患者的IL-1B基因位点多态性。结果：IL-1B-31及IL-1B-511均有3种基因型，分别是C/C、C/T和T/T；病例组Hp阳性感染率（70.8%）高于对照组（55.4%），差异有统计学意义（字2=5.6，P<0.05）。Hp感染时，IL-1B-511和IL-1B-31的T/T均能增加胃癌发病的风险，OR分别为8.1（95%CI： 2.4-10.1）和11.5（95%CI： 1.9-13.1）。结论：IL-lB-31和-511 TT基因多态性与河南地区胃癌的发生有关。

【关键词】 白细胞介素-1； 基因多态性； 胃癌

胃癌（Gastric cancer，GC）是我国常见的恶性肿瘤之一，严重危害着人们的身体健康。多数研究表明，胃癌的发生是由遗传、环境和幽门螺杆菌感染等因素相互作用的结果。近年来，有学者认为幽门螺杆菌感染可致慢性胃炎、消化性溃疡等疾病的发生[1-2]。人体感染幽门螺杆菌是否是胃癌发病独立危险因素尚未定论[3-4]。白细胞介素-1是一种重要的炎症介质，有研究表明：IL-1B和IL-1RN基因多态性可能与胃癌易感性有关[5-6]。本研通过对河南汉族人群中HP及IL-1B基因的检测和分析，初步探讨了感染幽门螺杆菌（Hp）后IL-1基因多态性与胃癌的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 病例组来河南省肿瘤医院、郑州大学一附院、河南省第一人民医院就诊并确诊为非贲门胃癌的患者，诊断由县级以上医院胃镜和手术病理切片（组织蜡块）确诊，临床症状、体征或其他检查符合胃癌诊断标准。对照组要求与病例组同地区、同民族、同性别，年龄相差不超过5岁，能清楚回答问题并排除胃癌家族史和消化系统疾病及免疫系统疾病的非胃癌患者。病例组65例，男49例，女16例，平均年龄（59.00±13.64）岁；对照组130例，男94例，女36例，平均年龄（60.00±12.15）岁。两组患者的年龄比较差异无统计学意义（t=-0.88， P=0.38），性别、吸烟、饮酒等因素比较差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。两组患者的年龄、性别等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 实验方法

1.2.1 基因组DNA的提取 采用改良的NaCl-酚/氯仿抽提法提取基因组DNA。抽取200 μL血细胞混悬液于1.5 mL EP管中，经过消化、裂解、酚/氯仿抽、无水乙醇沉淀提等步骤提取基因组DNA。

1.2.2 目的片段扩增 应用Primer 5.0软件自行设计引物：IL-1B-31 F：5' -AGAAGCTTCCA CCAA TACTC-3和R：5'-AGCACCTAGTTGTAAGGAAG-3；IL-1B-511 F：5'-CACTTTG CTGGTGTC TCGGT-3和R：5'-GTGGGACAA AGTGGA AGACA-3（北京赛百盛基因技术有限公司）；扩增反应体系（50 μL）：5μL 10×PCR缓冲液，2 μL引物（10 μmol/L），1 μL dNTP（10 mmol/L），0.5 μL TaqDNA聚合酶（北京天为时代科技有限公司，2.5 U/μL），4μL模板DNA，35.5μL去离子水；PCR扩增反应条件：95 ℃变性5 min；退火温度依次为51 ℃和54 ℃，各1 min；72 ℃延伸1 min，35个循环后72 ℃延伸10 min。

1.2.3 IL-1B基因多态性检测 IL-1B基因多态性检测用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性。酶切反应体系为20μL，包括10μL PCR产物，0.5 μL限制性内切酶（10 U/μL，MBI公司），2 μL 10×buffer，

7.5 μL去离子水。混匀后37 ℃恒温消化6 h。3%的琼脂糖凝胶电泳分析基因酶切产物。

1.2.4 HP检测 采用ELISA法检测血清中Hp IgG抗体，试剂盒购自深圳赛尔生物公司。

1.3 统计学处理 应用SPSS 13.0统计学软件对数据进行处理，计量资料以（x±s）表示，计数资料比较和基因型Hardy-Weinberg平衡检验采用 字2检验，α=0.05，风险因素OR值及95%的可信区间采用Logistic回归分析，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IL-1B基因多态性检测结果 IL-1B-31及IL-1B-511各有3种基因型，均为C/C、C/T和T/T，如图1～图2。

图1 IL-1B-31基因扩增产物酶切电泳图

图2 IL-1B-511基因扩增产物酶切电泳图

2.2 两组IL-1B基因型的分布 IL-1B-31、IL-1B-511基因型频率符合Hardy-Weinberg平衡（ 字2=0.04、0.32，P>0.05），见表1。

2.3 两组HP感染情况的比较 病例组Hp阳性感染率为70.8%（46/65），高于对照组的55.4%（72/130），差异有统计学意义（ 字2=5.6，P<0.05）。

2.4 基因多态性与胃癌关系 Hp感染时，IL-1B-511T/T能增加胃癌发病的风险，OR=8.1（95%CI：2.4-10.1）；IL-1B-31T/T能增加胃癌发病的风险，OR=11.5（95%CI：1.9-13.1），见表2。

3 讨论

IL-1B是IL-1基因族在430 kb区域内的3个基因之一，其功能是编码和调控IL-1β，IL-1β不仅在炎症的免疫损伤过程中起着重要作用，而且还有较强抑制胃酸分泌功能[7]。研究发现，IL-1B基因多态性会影响IL-1β的表达水平[8]。2001年，El-Omar等[9]发现IL-1B-511 T/IL-1B-31C基因型（OR值分别为7.5和2.1）和IL-1RNII/II等位基因（OR值为2.9）是低胃酸分泌的胃癌患的独立危险因素。随后，Machado等[10]在上述研究的基础上发现：IL-1B-511 T基因携带者和IL-1RNII/II基因型增加肠型胃癌的发病风险；Kudo等[11]报道IL-1B-511 TT基因型与Hp感染后发生胃癌的高危险有关；然而，最近有学者报道IL-1B-511、IL-1B-31 T/T基因型与胃癌无关[12-13]。考虑与研究样本量和种族有关，本研究以患有非幽门螺杆菌感染疾病的同期住院患者作对照，研究发现患者感染幽门螺杆菌后携带IL-1B-31和IL-1B-511 T/T基因型者较非T/T型携带者发生胃癌机会增高，OR值分别为11.5和8.1。提示：感染幽门螺杆菌后，患者IL-1B-31和IL-1B-511两位点T/T基因型可能与胃癌发生密切有关。推测可能的机制是：IL-1B-31和511基因位点突变后，白细胞介素-1β因子分泌增加，抑制胃酸分泌，使胃内长期处于低胃酸状态，从而引发慢性胃炎的发生，再者胃内酸度降低也可导致某些细菌在胃内生长繁殖，进一步造成胃内亚硝胺类致癌物质物质合成增加，造成胃黏膜的损害、黏膜上皮化生，最终演化为胃癌，因此，如果患者检测到携带有IL-1B-31和511 T/T突变基因型，且合并有幽门螺杆菌感染，应引起临床医生足够的重视。endprint

我国正常人群中Hp感染率在50%～60%之间，研究发现河南汉族人群中Hp-IgG阳性率高达55.4%，与国内田淑梅等[14]研究结果基本相符。另一项国外研究发现，一般人群中Hp感染虽然较高，但胃炎、胃癌等与HP感染高度相关的消化道疾病发病率则处于相对较低水平，分析认为可能与Hp菌株毒力基因分布及宿主炎症因子某些基因位点突变相关[15]。因此，笔者在研究宿主炎症因子某些突变热点的同时，也要充分考虑人群中感染HP毒力基因的分子特征，运用分子流行病学研究方法分析二者在普通人群和患病人群中交互作用，这对揭示胃癌患者中HP感染、炎症因子基因位点突变在疾病发生机制中的作用有着重要的价值。

综上所述，Hp感染后，携带IL-1B-31和IL-1B-511 T/T基因型与胃癌发病密切有关。目前IL-1B-31和511基因位点突变与胃癌发生仍存在争议。在今后研究中，应充分考虑研究的样本量大小、研究人群的种族、Hp感染情况及Hp菌株毒力基因分子特征等因素。

参考文献

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（收稿日期：2014-04-01） （本文编辑：蔡元元）endprint

我国正常人群中Hp感染率在50%～60%之间，研究发现河南汉族人群中Hp-IgG阳性率高达55.4%，与国内田淑梅等[14]研究结果基本相符。另一项国外研究发现，一般人群中Hp感染虽然较高，但胃炎、胃癌等与HP感染高度相关的消化道疾病发病率则处于相对较低水平，分析认为可能与Hp菌株毒力基因分布及宿主炎症因子某些基因位点突变相关[15]。因此，笔者在研究宿主炎症因子某些突变热点的同时，也要充分考虑人群中感染HP毒力基因的分子特征，运用分子流行病学研究方法分析二者在普通人群和患病人群中交互作用，这对揭示胃癌患者中HP感染、炎症因子基因位点突变在疾病发生机制中的作用有着重要的价值。

综上所述，Hp感染后，携带IL-1B-31和IL-1B-511 T/T基因型与胃癌发病密切有关。目前IL-1B-31和511基因位点突变与胃癌发生仍存在争议。在今后研究中，应充分考虑研究的样本量大小、研究人群的种族、Hp感染情况及Hp菌株毒力基因分子特征等因素。

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我国正常人群中Hp感染率在50%～60%之间，研究发现河南汉族人群中Hp-IgG阳性率高达55.4%，与国内田淑梅等[14]研究结果基本相符。另一项国外研究发现，一般人群中Hp感染虽然较高，但胃炎、胃癌等与HP感染高度相关的消化道疾病发病率则处于相对较低水平，分析认为可能与Hp菌株毒力基因分布及宿主炎症因子某些基因位点突变相关[15]。因此，笔者在研究宿主炎症因子某些突变热点的同时，也要充分考虑人群中感染HP毒力基因的分子特征，运用分子流行病学研究方法分析二者在普通人群和患病人群中交互作用，这对揭示胃癌患者中HP感染、炎症因子基因位点突变在疾病发生机制中的作用有着重要的价值。

综上所述，Hp感染后，携带IL-1B-31和IL-1B-511 T/T基因型与胃癌发病密切有关。目前IL-1B-31和511基因位点突变与胃癌发生仍存在争议。在今后研究中，应充分考虑研究的样本量大小、研究人群的种族、Hp感染情况及Hp菌株毒力基因分子特征等因素。

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