巴桑母酥油丸血清药物化学初探

黄晓芹 卿大双 彭易兰

成都中医药大学民族医药学院，四川 成都 611137

巴桑母酥油丸为藏医传统滋补方，由清热的三果 (余甘子、诃子、毛诃子)药酥和治疗寒症的五根 (天冬、黄精、西藏棱子芹、喜马拉雅紫茉莉、蒺藜)药酥合成[1]。因药味较多，有效剂量大、油脂重，口味特殊，服用不便，如能精简组方，将有助于其推广运用。故对其服用后药物吸收情况进行了初步探讨，为进一步研究其组方中可能的主要成分提供基础。

1 实验材料

1.1 药品和试剂 巴桑母酥油丸为青海帝玛尔藏药药业有限公司产品，批准文号:国药准字 Z63020163，批号20120211。乙腈、甲醇、甲酸等均为色谱纯。

1.2 实验动物 8～10周龄雄性昆明种小鼠20只，体质量22～28g，购于成都达硕实验动物有限公司。

1.3 仪器设备 高效液相色谱仪 (安捷伦1200)，色谱柱(Kromasil Etemity-5 C18);离心机 (TDZ5-WS多管架自动平衡离心机);注射器;电子天平;小鼠灌胃针头;移液管;烧杯;试管;抽滤瓶;量筒;0.45μm微孔滤膜。

2 实验方法

2.1 色谱条件 色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶填充柱;流动相:乙腈 (A)-0.25%甲酸 (B)梯度洗脱 (0～20min，3% →12%A;20～40min，12% →16%A;40～60min，16%→22%A);流速:0.8ml/min;柱温30℃;检测波长297nm。

将乙腈 (流动相:A)和0.25%甲酸水 (流动相:B)分别经0.45μm微孔滤膜过滤3次，将过滤好的流动相分别超声30min。

2.2 巴桑母酥油丸溶液制备 石油醚脱脂后制成甲醇溶液:巴桑母酥油丸置于索式提取器中，石油醚回流提取除去脂溶性成分，药渣挥发干燥。取1g药渣用10ml甲醇超声提取20min×2次，过滤，合并滤液，用甲醇将滤液定容到10ml，过0.45μm微孔滤膜，冷藏备用。

2.3 巴桑母酥油丸含药血清制备 小鼠禁食一晚(自由饮水)后随机分为空白血清提供组和含药血清提供组，其中含药血清提供组给予1.5g/kg巴桑母酥油丸灌胃，于灌胃30、60、120min后乙醚麻醉小鼠，去眼球取全血后处死小鼠。将采集的全血静置30min后，在3000r/min条件下离心10min得到血清。取血清1ml加入4ml的甲醇，涡旋5min，再3000r/min条件下离心30min×2次。取上清液过0.45μm微孔滤膜。冷冻保存备用。空白血清提供组小鼠除不给予灌胃外，血清分离保存同含药血清组。

2.4 HPLC图谱测定 分别取2.2，2.3中所得的巴桑母酥油丸甲醇溶液和含药血清、空白血清20μl上样，记录分析巴桑母酥油丸甲醇溶液和含药血清、空白血清含药血清图谱。

3 结果和讨论

灌胃巴桑母酥油丸后不同时间分离的含药血清HPLC图谱与空白血清和巴桑母酥油丸体外HPLC图谱的比较结果见图1-3。

从图中可以看出，灌胃后各个时间点，含药血清的可见峰均显著少于巴桑母酥油丸在体外的可见峰，但均显著多于空白血清的可见峰，提示我们在实验条件下，灌胃后巴桑母酥油丸中能被吸收的成分是有限的，灌胃后随着时间的延长，含药血清的可见峰逐渐增多，其吸收入血的成分在逐渐增加。在灌胃后60、120min含药血清的指纹图谱峰数和峰值没有非常显著的差异，提示灌胃后60～120min间，药物的吸收较为平稳。值得注意的是，灌胃后60min和120min的含药血清，在进样后30min时，均出现了一个较为明显的空白血清和巴桑母酥油丸体外指纹图谱中所没有的峰，提示可能有新的成分在血清中出现。其来源是巴桑母酥油丸在体内的代谢产物或是药物作用下机体产生的新的成分，有待进一步研究。

[1]毛继祖，卡洛，毛韶玲.蓝琉璃 [M].上海:上海科学技术出版社，2012.