γ干扰素释放试验诊断儿童隐性结核感染的临床价值

林 隆，陈园园，王孙尧

（杭州市红十字会医院，浙江杭州310003）

γ干扰素释放试验诊断儿童隐性结核感染的临床价值

林 隆，陈园园，王孙尧@

（杭州市红十字会医院，浙江杭州310003）

目的：探讨γ干扰素释放试验在儿童隐性结核感染诊断中的临床价值。方法：选取同期隐性结核感染儿童患者33例，活动性结核感染儿童患者45例及健康儿童30例，分别进行γ干扰素释放试验（IGRA）、结核菌素皮肤试验（TST）和痰涂片分析，比较不同方法的阳性率。结果：隐性结核感染组和活动性结核感染组IGRA的阳性率分别是为84.85%和86.67%，显著高于TST和痰涂片分析法（P＜0.05）。结论：IGRA诊断儿童隐性结核感染的敏感性及特异性强，具有重要的临床应用价值，可作为儿童隐性结核感染诊断的重要方法之一。

γ干扰素释放试验；隐性结核感染；结核菌素皮肤试验

结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，是困扰全球公共卫生的难题之一。儿童是结核菌感染的特殊人群，感染后极易发展成重症结核病，未经诊治的隐性结核感染的儿童随时都可能转为结核患者而成为传染源［1-2］。因此儿童隐性结核感染的早期诊断已经成为临床医师高度重视的问题，对隐性结核感染进行及时治疗是预防结核病的最佳措施。

目前对隐性结核感染的诊断主要依靠结核菌素皮肤试验（Tuberculin Skin Test，TST）的结果判断，该试验因其操作简便而广泛使用，但容易出现假阳性和假阴性。痰涂片分析或培养结核杆菌是诊断结核病的金标准，但培养时间长，阳性率低。因此有必要寻找一种不受卡介苗接种影响的，更敏感、更特异、更快速的诊断方法。γ干扰素释放试验（Interferon Gamma Release Assays，IGRA）是近年来国际上流行的一种快速诊断结核感染的免疫检测技术，但对儿童隐性结核病的诊断价值仍存在争议［3］。我院使用IGRA在诊断儿童隐性结核感染方面取得了良好的效果，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

根据结核病诊断标准［4］，选取2012年1月至2013年12月来杭州市红十字会医院诊治的隐性结核感染儿童患者33例，其中男18例，女15例，年龄（6.2±3.9）岁；活动性结核感染儿童患者45例，其中男性 24例，女性21例，年龄（5.1±3.3）岁；另外选取同一时期来我院儿科普通门诊体检的30名健康儿童作为对照组，其中男15例，女15例，年龄（7.4±1.4）岁。所有入选对象均已接种卡介苗，所有研究对象在年龄、性别等一般资料上差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 方法

对所有研究对象进行 IGRA、TST和痰涂片分析。IGRA抽取外周血，使用TB-IGRA试剂盒检测，严格按照试剂说明书所述方法进行操作，阳性判定标准为满足以下任一项［5］：（1）空白孔的斑点数＜5个，而检测孔的斑点数减去空白孔的斑点数≥6个；（2）空白孔的斑点数≥6个，而检测孔≥2×空白孔的斑点数。TST试验给研究对象前臂皮内注射0.1mL的标注 PPD，当硬结直径大于10mm时为阳性。痰涂片分析是取研究对象的痰液制成涂片，干燥固定后使用抗酸染色，若观察到抗酸杆菌则为阳性。

1.3 统计学处理

采用SPSS 16.0统计学软件进行数据分析。

2 结果

对3组的检测结果进行对比分析，结果如下：在隐性结核感染组中，IGRA的阳性率为84.85%，显著高于TST法（60.61%）和痰涂片分析法（21.21%），差异有统计学意义（P＜0.05）；在活动性结核感染组中，IGRA的阳性率为 86.67%，显著高于 TST（68.89%）和痰涂片分析法（42.22%），差异有统计学意义（P＜0.05）；健康对照组有2例IGRA检测呈阳性，说明 IGRA的特异性为 93.33%（28/30），TST阳性的检测结果高于IGRA，这可能与研究对象曾接种过卡介苗有关。详见表1。

表1 不同检测方法在不同病例组的阳性检测结果比较［N（%）］

3 讨论

儿童隐性结核感染是一种难以进行病原学诊断的疾病，约有5%～10%的患儿可转化成活动性结核病［2］，临床诊断在于早期、准确地提供结核感染证据。IGRA是利用结核分枝杆菌的特异性抗原ESAT-6（早期分泌靶抗原-6）和CFP-10（培养滤过蛋白-10），体外刺激受检者的全血或外周血单个细胞，致使T淋巴细胞释放大量细胞因子γ干扰素（INF-γ），再定量检测 INF-γ的释放水平，根据INF-γ的释放水平判断机体是否存在隐性结核感染。研究表明ESAT-6和CFP-10存在一段RD1区编码，该编码只存在于结核分枝杆菌和少数致病性分枝杆菌中，而卡介苗菌株和非致病性分枝杆菌的基因中无此编码［3］，理论上证明 IGRA能够不受卡介苗接种影响，更有效、更敏感地诊断隐性结核感染。

IGRA诊断成人隐性结核感染的作用日益明确，美国的指南建议用IGRA代替TST以提高隐性结核感染的敏感性和特异性［6］，但是在诊断儿童隐性结核感染时，有研究表明，IGRA和TST虽有很好的一致性，但并不优于TST［7］。本研究结果表明：在隐性结核感染组中IGRA敏感度高达84.85%，显著高于TST和痰涂片分析法，在活动性结核感染组中，IGRA检测的阳性率达86.67%，也显著高于TST和痰涂片分析法，充分说明在本组研究对象中，IGRA诊断儿童隐性结核感染和活动性结核感染的敏感性优于TST和痰涂片分析法，有助于临床更早期、准确地诊断结核感染。健康对照组中使用TST法检测出6例阳性病例，考虑与受检者曾经接种过卡介苗以及暴露在高危环境中有关，使用IGRA法仅检测出2例阳性病例，说明IGRA的特异性为93.33%，高于TST法，调查发现他们均有结核患者的密切接触史，需要临床的密切随访观察。

目前TST仍是诊断儿童隐性结核感染的主要方法，IGRA相比TST具有以下优势：试验仅需要采集一次静脉血，并在24小时内出结果；能有效避免重复试验，减轻患者的痛苦；且试验结果的判定标准统一，不受人为因素的干扰。目前有2种较为成熟的血液免疫检测技术：一种是基于酶联免疫吸附试验（ELISA）法，检测全血INF-γ浓度；另外一种是基于酶联免疫斑点（ELISPOT）法，检测结核分枝杆菌特异性效应T细胞斑点数，如本研究使用的T-SPOT法。IGRA的劣势在于实验成本相对昂贵，且需要配备完善的实验室设备和专业检测人员，限制了该技术的开展。本研究仍存在一定的局限性，比如样本量的限制，采用的是横断面研究，以及不同地域、不同年龄、不同免疫状态对实验结果可能存在影响等，有待进一步行大样本的前瞻性研究，建立长期、系统的跟踪随访资料，以更好地证明IGRA在诊断儿童隐性结核感染中的重要作用。

儿童结核病起病隐匿，临床表现多样化，体征不典型，诊断尤其困难；随着我国卡介苗预防接种的普及，传统的结核菌素试验已经不能满足诊断的需求，因此临床上对有结核密切接触史或高度怀疑结核感染的儿童，使用IGRA作为诊断的重要辅助手段，可以大大提高诊断的敏感性和特异性，值得推广。

［1］World Health Organization.Global Tuberculosis Report 2012.Geneva：WHO，2012.

［2］辛田田，黎有伦.结核潜伏感染诊断方法新进展与临床应用［J］.中国人兽共患病学报，2013，29（4）：403-406.

［3］Nenadic N，Kirin BK，Letoja IZ，et al.Serial interferon-gamma release assay in children with latent tuberculosis infection and children with tuberculosis［J］.Pediatr Pulmonol，2012，47（4）：401-408.

［4］中华医学会儿科学分会呼吸学组，《中华儿科杂志》编辑委员会.儿童肺结核的临床诊断标准和治疗方案（试行）［J］.中华儿科杂志，2006，44（4）：249-251.

［5］蒋英，张胜男，黄小玲，等.γ干扰素释放试验用于结核病诊断的临床应用价值［J］.中国药业，2012，21（13）：87-89.

［6］Mazurek GH，Jereb J，Lobue P，et al.Guidelines for using the QuantiFERON-TB Gold test for detecting Mycobacterium tuberculosis infection，United States［J］.MMWR Recomm Rep，2005，54（RR-15）：49-55.

［7］Machingaidze S，Wiysonge CS，Gonzalez-Angulo Y，et al.The utility of an interferon gamma release assay for diagnosis of latent tuberculosis infection and disease in children：a systematic review and meta-analysis［J］.Pediatr Infect Dis J，2011，30（8）：694-700.

The clinical application value of interferon gamma release assays for diagnosis of latent tuberculosis infection in children

LIN Long，CHEN Yuanyuan，WANG Sunyao@
（Hangzhou Red Cross Hospital，Hangzhou，310003，China）

［Objective］To evaluate the clinical value of interferon gamma release assays（IGRA）diagnosis of latent tuberculosis infection in early childhood.［Method］During the same period，33 pediatric patients with latent tuberculosis infection and 45 pediatric patients with active tuberculosis infection were selected，with 30 healthy children as a control group.IGRA，tuberculin skin test（TST）and sputum smear analysis were performed.The positive rates of different methods were compared.［Result］In latent tuberculosis group，the positivity was 84.85%by IGRA，which was significantly higher than TST and sputum smear test results（P ＜ 0.05）.In active tuberculosis infection group，the positivity was 86.67%by IGRA，which was significantly higher than TST and sputum smear test results（P ＜ 0.05）.［Conclusion］Latent tuberculosis infection diagnosis by IGRA has high sensitivity and specificity.IGRA has important clinical value and can be used as one important way to latent tuberculosis infection diagnosis.

interferon gamma release assays（IGRA）；latent tuberculosis infection；tuberculin skin test（TST）

R725.1

B

1672-0024（2014）03-0054-03

林 隆（1979-），男，福建云霄人，硕士，主治医师。研究方向：儿科学

浙江省医药卫生科技项目（编号：2013KYA164）

王孙尧 wsy5610@163.com