抵抗素rs1862513与广东地区2型糖尿病的相关性研究＊

徐 英，王李莉，周 强，邓 聪，陈 波，黄海樱，林 桢，杨 静，夏少梅（.西藏林芝地区人民医院检验科 860000；.南方医科大学检验系008级，广州 5060；.广州医科大学附属第二医院检验科，广州 5060）

2型糖尿病是现阶段最主要和增长最快的糖尿病类型，占整个糖尿病人群的90%以上［1］。其发病率逐年上升，WHO预测糖尿病的发病率将从1995年的4.0%发展至2025年的5.4%［2］。2型糖尿病是由于遗传和环境因素共同导致的胰岛素相对或绝对缺乏及不同程度的胰岛素抵抗（insulin resistance，IR），使体内碳水化合物、脂肪及蛋白质代谢发生紊乱［3－4］。研究表明，抵抗素（rs）的多个单核苷酸位点存在多态性（SNP），且在不同国家、不同种族中有很大差异。单核苷酸多态性包括单个碱基的转换、插入、缺失等［5－6］。血清rs1862513位点在国外人群中有一定的多态性。现将广东地区人群该基因位点多态性的相关研究报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2010年10月至2011年10月广州医学院第二附属医院收治的新诊断为2型糖尿病的患者182例为治疗组，其中男95例，女87例，平均年龄（64±12）岁。排除1型糖尿病，继发性2型糖尿病患者，严重肝肾功能不全及其他内分泌代谢疾病患者。收集同期健康体检者191例为健康对照组，其中男70例，女121例，平均年龄（62±11）岁。

1.2 实验仪器 实验用仪器有日立7600全自动生化分析仪；罗氏E411全自动电化学发光免疫分析仪；STAR全自动样本工作站；FAME全自动酶免分析仪；MassARRAY实验平台；MassARRAY 384孔双头聚合酶链反应扩增仪；MassARRAY质谱检测仪；MassARRAY点样仪。

1.3 实验试剂 实验试剂为葡萄糖氧化酶试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司）；胰岛素诊断试剂盒［罗氏诊断产品（上海）有限公司］；抵抗素检测试剂盒（美国RapidBio Lab公司）；iPLEX反应试剂（美国Sequenom公司）；SpectroCHIP生物芯片（美国Sequenom公司）；HOTSTART taq酶（美国Se－quenom公司）；SAP酶（美国Sequenom公司）；纯化琼脂（美国Sequenom公司）。

1.4 方法

1.4.1 抵抗素SNP基因位点的选择 根据NCBI数据库提供的数据检索，综合国内外文献报道及资料，得出rs1862513位点在国外2型糖尿病患者中有一定的多态性。

1.4.2 标本采集与处理 所有受试者均隔夜空腹8h以上，清晨抽取静脉血两管共6mL。一支干燥管（3mL），3 000r／min，14.2cm，离心15min，进行血清分离，该血清用于空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FIN）水平的检测，并移取200 μL血清置－20℃低温保存，以用于抵抗素的批量检测。另一支为乙二胺四乙酸二钾（EDTA－K2）抗凝血（3mL），充分摇匀以彻底抗凝，－20℃存放，以用作rs1862513单核苷酸多态性分析之用。

1.4.3 指标测定 FBG测定采用葡萄糖氧化酶法，FIN测定采用化学发光法。根据国际通用的稳态模式评估法，计算IRI，IRI＝FBG×FIN／22.5［7］。血清抵抗素测定采用双抗夹心ELISA两步法测定。rs1862513位点基因型的检测由深圳华大基因研究院完成。

1.5 统计学处理 采用SPSS17.0分析软件进行数据处理。对抵抗素以及胰岛素抵抗指数进行单样本Kolmogorov－Smirnov检验正态性分析，以抵抗素为自变量，IRI为因变量进行相关性回归分析。基因型群体符合程度用Hardy－Weinberg遗传平衡定律检验，计数资料基因型频率在2型糖尿病组与健康对照组间的差异比较采用行×列表资料的双侧χ2检验。基因型与疾病相关性分析通过logistic回归分析，以比值比（OR）和95%置信区间（CI）表示相对危险度。所有统计资料均以双侧概率检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 抵抗素与胰岛素抵抗指数 单样本Kolmogorov－Smirnov检验分别检测抵抗素水平与胰岛素抵抗指数的正态性分布。采用Pearson相关性分析，r＝0.709，P＜0.05。抵抗素水平与胰岛素抵抗指数在P＝0.05（双侧）上显著相关。

2.2 rs1862513位点基因型频率 rs1862513位点基因型频率已达到遗传平衡，具有群体代表性。其中χ2＝4.645，P＝0.098，rs1862513位点C／G基因型的分布频率差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 两组rs1862513（C／G）基因型频率比较

表2 rs1862513（C／G）基因型与2型糖尿病的危险度分析

2.3 logistic回归分析 GG纯合子患病率是CC纯合子患病率的1.375倍，OR＝1.375，95%CI：0.575～3.285，基因型间危险度差异无统计学意义（P＝0.473）。见表2。

3 讨 论

糖尿病是世界上普遍危害人类健康的慢性疾病之一。作为糖尿病的主要类型，2型糖尿病是一种具明显异质性的多因素、多基因遗传病，其遗传方式和发病机制十分复杂，许多微小基因的变异都会增加其发病率［8］。近年来的研究认为，抵抗素是2型糖尿病的重要信号分子［9－10］。抵抗素为2型糖尿病的发病机制和治疗提供了一个新的方向［11］。本研究发现，抵抗素与胰岛素抵抗指数呈显著的正相关关系，与文献研究结果一致［12－17］。

有研究表明，人抵抗素基因编码区由326个碱基组成，编码108个氨基酸残基组成的抵抗素蛋白。羧基端有一独特的富含半胱氨酸的高度重复序列CX（12）CX（8）CXCX（3）CX（10）CXCXCX（9）CC，占12%［10］。 据NCBI数据库显示，rs1862513位点基因型存在C→G的突变，由此推测其可能影响抵抗素的表达水平以及生物活性，进而影响到抵抗素相关疾病（如糖尿病）的发生、发展与转归。

对于抵抗素基因多态性在2型糖尿病研究中的重要性各界未达成一致的共识。本研究中，通过对2型糖尿病抵抗素基因1862513位点的检测，证实该位点单核苷酸多态性存在C→G的突变而呈现3种基因型：CC型、CG型和GG型；研究结果发现该位点基因型频率在广东地区2型糖尿病组和健康对照组间差异无统计学意义（P＞0.05），表明了该位点抵抗素基因多态性与广东地区2型糖尿病间无相关性。周强等［18］研究发现，脂联素＋45位点多态性与2型糖尿病关系密切，该基因变异可能在2型糖尿病的发病过程中起了重要作用。董艳等［19］研究显示7个抵抗素基因的单核苷酸多态性基因频率在华东地区2型糖尿病和健康对照组中差异无统计学意义（P＞0.05）。Sentinclli等［20］研究发现，意大利人＋1326G／C位存在1个单核苷酸多态性，而且该单核苷酸多态性的等位基因频率在意大利人2型糖尿病中和肥胖间差异也无统计学意义（P＞0.05）。本研究在危险度分析的研究结果中显示，rs1862513位点的各种基因型结果差异均无统计学意义（P＞0.05），可能与2型糖尿病的发生无关。在广东地区2型糖尿病患者中，rs1862513位点的各基因型之间发生2型糖尿病风险无差异，rs1862513可能不是2型糖尿病的易感基因。

目前国内外学者普遍认为2型糖尿病为一类多种不同病因所致的代谢综合征，人们对该疾病的发病机制及影响因素的认识仍较肤浅，抵抗素基因多态性与2型糖尿病的关系亦仅是初步研究。此次研究证实其与广东地区2型糖尿病无相关性，可能原因为抵抗素基因多态性在不同国家、不同地区中与2型糖尿病的关系亦不一致，该位点可能不是广东地区2型糖尿病患者的易感基因。

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