益艾康胶囊对无症状期HIV感染者T淋巴细胞亚群的影响＊

刘萍萍，李倩如△，轩小燕，董子明，王 哲，杜 英

（郑州大学基础医学院：1.微生物学与免疫学教研室；2.病理生理学教研室，郑州 450001；3.河南省疾病控制中心性病艾滋病研究所，郑州 450016）

获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）即艾滋病是由人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）引起的免疫缺陷型疾病，导致CD4＋T细胞数量进行性减少，机体免疫功能缺失，最终引起机体各种机会性感染和肿瘤以致死亡。机体感染HIV后发展为AIDS的过程可大致分为3个阶段：急性感染期、无症状期、AIDS期。目前，对AIDS的预防尚缺乏有效的特异性疫苗，世界普遍公认的有效治疗手段是高效抗逆转录病毒疗法（highly active antiretroviral therapy，HAART），但对无症状 HIV感染者，因尚未达到HAART疗法应用标准，现无合适药物可用。若任病情逐渐进展，不利于疾病的早期控制。基于此种原因，充分发挥中医药的优势，对无症状HIV感染者进行中医药早期干预治疗，以延缓感染者发病进程，提高感染者生存质量，具有重大现实意义。益艾康胶囊由人参、黄芪等多种中药组成，具有健脾补胃，益气养血、化痰解毒之功效，能增加机体免疫功能。故本研究通过检测HIV早期无症状感染者经益艾康胶囊干预治疗后CD4＋、CD8＋T细胞亚群的表达，探讨益艾康药物对T细胞亚群功能的影响，试图寻找到能准确、敏感反映病情进展和药物疗效的指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料 60例无症状HIV感染者（HIV抗体阳性、并经确认试验证实，CD4＋T细胞介于200～500个／μL之间，仅表现为淋巴结肿大，未出现机会感染和肿瘤），其中，男34例，女26例，年龄35～45岁，均系河南确山县及尉氏县经有偿献血感染者。将上述60例感染者随机分为两组：益艾康干预组30例，接受益艾康胶囊干预治疗6个月；对照组30例，未接受任何抗病毒治疗。益艾康胶囊主要药物组成：人参、黄芪、炒白术、茯苓、当归、川芎、白芍、黄芩等。由河南省中医药研究院研制，规格：0.5g／粒，60粒／瓶，每次3.0g，每日3次。

1.2 主要试剂和仪器 10mL乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝负压真空采血管、免洗溶血剂、CD4／CD8／CD3三色单抗标记试剂盒，FITC－CD4、FITC－CD8、PE－CD45RA、PE－CD45RO、PECD95、PE－CD28和PE－CD38单抗及同型对照抗体、流式细胞仪FASCAN，均为Becton Dicknson公司产品。

1.3 标本采集 用10mL EDTA抗凝真空负压采血管采集受试者静脉血5mL，4℃冷藏保存运输。

1.4 细胞绝对值计数 将20μL CD4／CD8／CD3三色单抗加入绝对计数管中，加入50μL抗凝全血，室温避光15min，加入免洗溶血素450μL室温避光15min，流式细胞仪检测，FACSMULTISET软件自动分析，得到CD4＋、CD8＋、CD3＋淋巴细胞绝对值、百分比及CD4／CD8比值。

1.5 淋巴细胞亚群检测 取5mL抗凝静脉血加入红细胞裂解液2mL，振荡混匀后继续孵育15min，1 500r／min离心5 min收集细胞，用PBS溶液洗2次，去上清液，再重悬于PBS溶液中，取100μL细胞悬液，加入相应的荧光标记抗体各5 μL，室温避光孵育30min，离心后弃上清液，每管加0.5mL PBS液，上流式细胞仪检测，每管收集5 000个细胞进行分析。

1.6 统计学处理 采用SPSS10.0进行统计学处理，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 益艾康胶囊治疗前、后病毒载量变化情况 益艾康干预组干预后感染者病毒载量与药物干预前相比有所下降（P＜0.05），见表1。

2.2 益艾康胶囊干预对外周血CD4＋T淋巴细胞亚群的影响益艾康干预前，干预组和对照组CD4计数经t检验，差异无统计学意义（P＞0.05）；干预6个月后干预组CD4计数与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。无症状HIV感染者接受益艾康胶囊干预后外周血CD4＋CD45RA＋、CD4＋CD45RO＋、CD4＋CD28＋、CD4＋CD95＋细胞比例显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表1 益艾康胶囊干预前、后两组患者病毒载量比较±s）

表1 益艾康胶囊干预前、后两组患者病毒载量比较±s）

＊：P＜0.05，与干预组干预前比较。

病毒载量（log 10copy／mL）组别干预前 干预后干预组 4.55±1.25 3.47±0.79＊对照组4.37±0.87 4.78±1.14

表2 两组患者干预前、后CD4计数比较±s，个／μL）

表2 两组患者干预前、后CD4计数比较±s，个／μL）

＊：P＜0.05，与对照组干预后比较。

时间 干预组 对照组干预前437.64±64.12 431.25±65.67干预后 546.23±87.65＊406.48±75.81

表3 两组患者外周血CD4＋T淋巴细胞亚群比例比较［s），%］

表3 两组患者外周血CD4＋T淋巴细胞亚群比例比较［s），%］

＊：P＜0.05，与对照组比较。

组别 CD4＋ CD4＋CD45RA＋ CD4＋CD45RO＋ CD4＋CD28＋ CD4＋CD95＋干预组 25.81±3.21＊ 9.21±1.24＊ 12.69±2.53＊ 12.05±2.67＊ 17.41±3.08＊对照组 13.43±1.85 4.17±0.87 9.80±2.14 9.04±1.78 8.56±1.74

2.3 益艾康胶囊干预对外周血CD8＋T淋巴细胞亚群的影响

益艾康胶囊干预组CD8＋、CD8＋CD38＋T细胞比例显著低于对照组（P＜0.05）；而两组CD8＋CD95＋T细胞比例比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表4。

表4 两组患者外周血CD8＋T淋巴细胞亚群比例比较±s），%］

表4 两组患者外周血CD8＋T淋巴细胞亚群比例比较±s），%］

＊：P＜0.05，与对照组比较。

组别 CD8＋ CD8＋CD38＋ CD8＋CD95＋干预组 50.90±5.67＊ 40.52±4.23＊41.18±4.17对照组64.48±5.81 57.15±4.79 42.50±3.84

3 讨 论

AIDS是由HIV感染引起的以细胞免疫缺陷为主的继发性免疫缺陷病。HIV感染属慢发病毒感染，一般有较长潜伏期。但是，一旦发病，疾病往往呈进行性加重。目前，HAART疗法主要是针对AIDS期患者，而HIV感染后的无症状期持续时间长，感染者数量最多。根据中医学“未病先防、既病防变”的学术思想，可把无症状期作为中医药治疗AIDS的切入点，对此期感染者进行免疫学和病毒学指标的监控，有利于及时了解病情并采取相应的治疗方案，控制疾病进展［1－2］。近年来，国内外对于中医药治疗艾滋病进行了多方面探索，中医药在改善临床症状、减轻病痛、延缓病情进展、维护免疫功能的稳定、减轻西医联合抗病毒治疗药物的毒副作用等方面展现出较大的优势［3］，但其机制多不明了。

外周血CD4细胞的绝对值对于HIV感染状况、临床分期、预测机会性感染的可能性和治疗效果的评价具有极其重要的作用［4］。本研究结果显示，经过益艾康胶囊干预6个月后，患者CD4＋T淋巴细胞绝对值上升，与干预前相比，差异有统计学意义（P＜0.05），并且与对照组相比CD4＋T的百分率显著提高，提示HIV感染无症状期服用益艾康胶囊可以明显稳定或减缓CD4＋T淋巴细胞的下降幅度，促进免疫功能重建，同时通过抑制病毒复制或其他作用途径，降低或稳定病毒载量。

外周循环CD4＋T细胞主要有两类：幼稚细胞（CD45RA＋T）和记忆细胞（CD45RO＋T），HIV感染后，无论是未经抗原刺激的幼稚细胞，还是接触过抗原刺激的记忆细胞都不断减少［5］。本研究结果显示，益艾康胶囊干预后，CD45RA＋T细胞和CD45RO＋T百分比与对照组相比均显著升高（P＜0.05）。同时观察到CD4＋CD28＋T和CD4＋CD95＋T的比例均较对照组升高（P＜0.05）。CD28和CD95分别是T细胞表面的共刺激分子和细胞凋亡分子，与CD25分子一样，能在一定程度上反映CD4＋T细胞的活化、凋亡及其功能状态［6－7］，说明活化T细胞下降幅度减缓，提示益艾康胶囊干预能提高CD4＋T细胞的输出和促进其活化，有助于恢复HIV感染者的免疫功能，有利于免疫重建。

CD8＋T淋巴细胞是特异性细胞免疫的效应细胞，能通过特异性识别病毒感染的靶细胞，并对其产生杀伤作用，是机体内直接杀伤 HIV病毒的主要免疫细胞［8］。CD8＋CD38＋T细胞是一群激活的亚群，在HIV感染时能发生扩增，是评价HIV感染者免疫激活的又一指标［9］，本研究显示益艾康干预6个月后，CD8＋T细胞百分比减少的同时，CD8＋CD38＋T细胞百分比也下降，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05），提示通过益艾康胶囊干预可以使HIV感染者异常的免疫激活得到抑制。

［1］彭勃，李华伟.中医药治疗获得性免疫缺陷综合征的思路和切入点［J］.中医杂志，2006，47（6）：412－414.

［2］郭会军，王丹妮，刘学伟.中医药治疗艾滋病应重视对无症状HIV感染期的早期干预［J］.上海中医药杂志，2006，40（7）：17－18.

［3］李勇，王阶，林洪生，等.中医“治未病”思想在艾滋病早期免疫重建中的作用［J］.辽宁中医杂志，2010，37（11）：2117－2119.

［4］Phillips AN，Lundgren JD.The CD4lymphocyte count and risk of clinical progression［J］.Current Opinion in HIV ＆AIDS，2006，1（1）：43－49.

［5］Srinivasula S，Lempicki RA，Adelsberger JW，et al.Differential effects of HIV viral load and CD4counts on proliferation of naive and memory CD4and CD8Tlymphocytes［J］.Blood，2011，118：262－270.

［6］Choi BS，Park YK，Lee JS，et al.The CD28／HLA－DR expressions on CD4＋T but not CD8＋T cells are significant predictors for progression to AIDS［J］.Clin Exp Immunol，2002，127（1）：137－144.

［7］Krueger A，Fas SC，Baumann S，et al.The role of CD95in the regulation of peripheral T－cell apoptosis［J］.Immunol Rev，2003，193：58－69.

［8］McDermott AB，Koup RA.CD8＋T cells in preventing HIV infection and disease［J］.AIDS，2012，26（10）：1281－1292.

［9］Glencross DK，Janossy G，Coetzee IM，et al.CD8／CD38 activation yields important clinial information of effective antiretroviral therapy findings from the first year of the CIPRA－SA cohort［J］.Cytometry，2008，74（1）：131－140.