不同季节和气候条件对种公牛精液品质的影响的研究

徐峥嵘，贺奋义

（甘肃省动物疫病预防控制中心，甘肃 兰州 730000）

气候环境因素对种公牛精液品质的影响不可低估，我国西北较南方气温偏低，种公牛适宜在环境温度较低的环境下生产，但在相对较高或较低的温度条件下对种公牛的生产是极为不利的［1］，据报道夏季高温环境下，热应激会引起公牛睾丸变性、性欲减退［2］，原精活力、精子密度、活精子百分数、顶体完整率均处于最低水平，极显著低于春、秋、冬非热应激季节，精子畸形率在热应激期处于最高水平，极显著高于非热应激期［3］。本实验通过最冷和最热季节对比进行分析研究，试验如下：

1 材料与方法

1.1 试验地点、动物和时间

从甘肃省家畜繁育中心种公牛站随机选取5头种公牛。试验时间为2011年1月～2012年10月，2011年、2012年年均最高温度为都在7月，最低温度在1月。武威地区2011年～2012年月平均气温曲线图：

1.2 试验设计

图1 温度变化曲线图

随机从甘肃省家畜繁育中心种公牛站抽取5头牛进行试验。2011、2012年7月的平均温度为25℃、24.6℃，1月温度为－11.2℃、－9.5℃，4月温度为12℃、13.2℃，9月份温度为14.4℃、16℃。将4月份或9月份分生产数据作为对照组，本试验选取2011年4月份为对照组，2011年1月和7月份的生产数据作为试验组一和试验组二进行分析研究。

1.3 内容和方法

1.3.1 精液的采集 所用的器械事先要进行冲洗，消毒；玻璃器皿洗净后送入干燥箱（160℃，30min），假阴道和其他器械等用75%酒精棉球擦拭消毒，假阴道安装好套上保护套，消毒后的假阴道只能使用一次。假阴道内注水温度在40℃左右，注水量约在300ml，恒温箱内温度控制在40℃～42℃，采精时的内胎温度保持在38℃～40℃之间［4］，内胎温度可根据不同的牛做适当的调整，最高不可超过43℃。润滑剂均匀涂抹在假阴道内胎的前2／3，润滑剂用白凡士林与液态石蜡油按1∶1比例调制［5］。假阴道的内胎压力（采精前从假阴道活塞孔打气）以假阴道口呈三角形为宜。台牛要健壮、性情温顺、无疫病，外阴、臀部清洗干净。公牛采精时采取引诱、被爬跨、反复空爬等方法刺激公牛兴奋［6］。还可更换采精地点，更换台牛等方法增加种公牛的兴奋度［7］。采精场地应保持安静，地面清洁并铺设防滑垫，以免公牛采精时滑倒。当公牛性欲旺盛时采精，采精员右手持假阴道，站在公牛右后方，当公牛起跳，前肢爬上台牛后迅速向前托着公牛包皮，右手持假阴道与台牛成40度角，假阴道口斜向下方，左右手配合将公牛阴茎自然地引入假阴道内，公牛向前一冲即完成射精动作，待公牛前肢落地，缓慢地把假阴道脱出［8］。打开活塞放气，小心取下集精管，迅速转移至精液检测室进行检测。

1.3.2 精液的检查 先对所采得的精液进行感官评定，新鲜精液应呈乳白稍带黄色或奶油色不透明液体，杂质太多的精液要废弃，精液呈现红的颜色，常常是生殖道出血，而呈现绿色通常是生殖道或副性腺某些部分感染化脓所致。褐色的精液多由陈旧的血液或粪便污染引起［9］。取一滴原精液加盖玻片后在400倍的恒温（37℃）可视显微镜下观察呈直线运动精子的百分数，活率≥65%可进行稀释封装（GB 4143－2008）。精液密度的测定目前常用精子密度测定仪（法国MIV公司生产），密度测定仪根据分光光度计测定原理和计算功能，能迅速测定出每毫升精液中精子密度，并且可以提供相关的数据如应加的稀释液量、可封装细管量等［10］。

1.3.3 精液的稀释 目前普遍采用的是进口稀释液（德国minitube公司生产），一步稀释法，认为对精液冷冻后活力影响不大［11］。将稀释液按照1∶4的比例进行稀释，加稀释液要缓慢、轻轻摇匀，稀释液温度与精液温度要等温。凡是精液一降温、平衡，其温度不允许再回升［12］。

1.3.4 精液的分装 使用细管精液分装机（法国IMV卡苏公司生产），是一套在完成灌装与封口后即可进行喷墨印字的一体化设备，工作程序在尽可能不被外界污染的情况下完成，对细管精液卫生质量保证极为有利［13］。细管的容量为0.25mL。

1.3.5 精液的平衡 平衡是稀释后精子在降温和在低温下的一个适应过程，是精细胞重建离子平衡变化的过程［14］，这个过程是必须的，不能省略。将分装完毕的细管精液码放在平衡架上，放入4℃的平衡柜中降温平衡。平衡的时间一般为2h～4h。

1.3.6 精液的冷冻 精子冷冻采用精液冷冻仪（法国IMV卡苏公司生产），是由计算机控制的全自动冷冻容器，其理论依据是在冷冻降温的过程中，因为精细胞内的冰晶的形成，使细胞内外发生一系列的物理变化［15］，不同程度损害精细胞，因此需要这个降温冷冻必须快速越过冰晶危险区域（－0℃～－60℃）进入玻璃化状态（－130℃以下）［16］这时可是一种非结晶的固态，其性质更接近于液态使精细胞免受冰结晶冻害。公牛精液冷冻过程降温如表1［17］：

表1 精液冷冻过程一览表

2 结果与分析

2.1 不同月份种公牛精子质量参数比较

根据试验设计要求，5头种公牛采精后，对精液量等精子质量品质评价和随机抽取细管冻精活率进行检查，检查结果如下，2011年1月采精检测表（表2），2011年4月采精检测表（表3）2011年7月采精检测记录表，详见表4。

表2 2011年1月采精检测表

表3 2011年4月采精检测表

表4 2011年7月采精检测记录表

图2

表5 不同季节种公牛精液评定

2.2 数据分析

应用excel计算平均值和标准差，用SPSS13.0统计分析软件对各项指标进行一维方差分析。试验按照牛冷冻精液生产规则进行生产，由上表可以看出，在环境温度在－11.2℃时5头种公牛的精液量平均为5.7mL，原精活率66.8%，精液密度13.3亿／mL，冻后活率37.4%，生产冻精数为275.8剂，精子畸形率17.8%。当环境温度在25℃时5头种公牛的平均精液量为5.88mL，原精活率67.2%，精液密度16.64亿／mL，冻后活率33.8%，生产冻精数143.4剂，精子畸形率23%。对照组即在环境温度12℃时精液量为6.6mL，原精活率73.2%，精液密度16.92亿／mL，冻后活率41.8%，生产冻精数404.4剂，精子畸形率12.6%。按照国标（GB 4143－2008）牛冷冻精液要求原精活率≥65%，精子密度≥6×108个／mL，冻后精子畸形率≤18%，冻后活率≥35%。精液量之间差异显著（P＜0.05），原精活率之间差异显著（P＜0.05），精子畸形率之间差异显著（P＜0.05）。

3 小结与讨论

环境温度过高或者过低都会影响精液品质，种公牛在适宜的温度下生产的精液品质也会更加优良，种公牛在温度较高的条件下生产精液品质比在低温条件下还要差，种公牛最适宜的生产温度为12℃～16℃，温度越高（7月份的日最高温度达到42℃）对种公牛的精液品质影响越大，使种公牛的精液量下降，密度降低，精子畸形率明显升高，精子的复苏率也有较大的影响，所以有条件的情况下，可以对种公牛采取，淋浴将温或加装降温设备，比如空调等，采精时可安排在早晚比较凉爽的时间进行，过于极端的天气种公牛的下丘脑分泌促性腺激素释放激素减少，使垂体分泌的促卵泡素、促黄体素减少，睾丸分泌的雄性激素下降，使种公牛出现繁殖机能下降，甚至导致不育。此外，环境影响的直接作用于睾丸，影响睾丸的支持细胞和精子发生过程，造成可恢复性或永久性的生殖障碍。所以对环境的调控可极大提高种公牛的生产性能及精液的品质，相反在低温环境下，对牛舍或采精厅可采取供暖和保温等措施，保证种公牛在适宜温度下生产，使优秀的种公牛的优良基因能更大限度的发挥，增加黄牛改良的进程。

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