红景天中含红景天苷量的测定

郑 玥，凌雪宇，刘文亮，裴福成

(哈药集团中药二厂，哈尔滨 150078)

红景天为景天科植物大花红景天(Rhodiola crenulata H.Ohba)的干燥根和根茎[1].红景天的主要药效成分为红景天苷及其苷元酪醇、没食子酸及其苷类、黄酮类、草质素及其苷类等.在我国，红景天主要分布在西藏、四川、云南、新疆、青海、陕西等省份高山地区[2].红景天素有“高原人参”，“雪山仙草”等美称，具有滋补强壮、抗缺氧、抗疲劳、抗辐射、延缓衰老、抗癌等作用[3].红景天的有效成分为红景天，本实验采用梯度洗脱的方法，能准确测定出红景天中含红景天苷的量[4-6]，分离度好.

1 仪器与试药

Agilent1100系列高效液相色谱仪(UVW检测器，四元泵，自动进样)，KQ-1000B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，METTLER AE240电子天平.

红景天(大花红景天 产地：西藏)，红景天苷对照品(批号：110818-201005，中国药品生物制品检验所)；乙腈，磷酸均为色谱纯，水为纯化水.

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为BDS HYPERSIL-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为A：乙腈；B：0.03%磷酸；流速1.0 mL/min.梯度程序见表1.检测波长275 nm；柱温30 ℃；进样量为10 μL.

表1 梯度程序

2.2 对照品溶液的制备

取红景天苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.5 mg的溶液，即得.

2.3 供试品溶液的制备

取红景天药材粉末0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50%甲醇10 mL，密塞，精密称定，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得.

对照品和供试品溶液谱图见图1.(A为对照品溶液；B为供试品溶液).

图1 红景天苷对照品与红景天供试品溶液色谱图

2.4 线性关系的考察

精密吸取对照品溶液2.5、 5.0、7.5、10、12.5、15、17.5、20 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积.以进样量为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，作标准曲线(见图2)，计算回归方程为Y=351.88X-8.1071，r=0.999 9，结果显示进样量在1.25 ～10 μg范围内有良好的线性关系.

图2 线性关系曲线

2.5 精密度试验

精密称取红景天药材粉末，按照供试品溶液制备方法配制，并于上述色谱条件下，连续进样6次，记录色谱峰面积.结果表明，红景天苷峰面积RSD值为0.49%，说明此方法精密度良好.

2.6 重复性试验

精密称取红景天药材粉末，按照供试品溶液制备方法配制6份供试品溶液，并于上述色谱条件下，分别进行测定，记录色谱峰面积.结果表明，红景天苷峰面积RSD值为1.17%，说明此方法重复性良好.

2.7 稳定性试验

精密称取红景天药材粉末，按照上述供试品溶液配制方法配制供试品溶液，并于上述色谱条件下，分别于0，2，4，8，12，24 h进行测定，记录色谱峰面积. 结果表明，红景天苷峰面积RSD值为0.96%，说明供试品溶液在24 h内稳定性良好.

2.8 加样回收率试验

精密量取已知含量的供试品溶液9份，每份1 mL，分别精密加入3种不同浓度的对照品溶液，按照上述供试品溶液配制方法配制供试品溶液，并于上述色谱条件下，分别进行测定，记录色谱峰面积，计算平均回收率，结果见表2.

表2 加样回收率结果

2.9 样品测定

分别称取红景天药材粉末三份，按照上述供试品溶液配制方法配制供试品溶液，并于上述色谱条件下，进行测定，计算红景天苷含量，结果见表3.

表3 红景天中红景天苷百分含量结果

3 讨 论

3.1 流动相的选择

试验考察了甲醇-水，乙腈-水，乙腈-0.03%磷酸溶液系统，前两种分离效果不好，红景天苷不能与其他成分完全分离开来，最后选择乙腈-0.03%磷酸溶液系统. 试验发现，在乙腈-0.03%磷酸溶液梯度洗脱的情况下，红景天苷能与其他组分达到基线分离，不受其他杂质干扰.

3.2 色谱柱的选择

试验考察了YMC-C18、Thermo-C18、BDS-C18色谱柱，结果发现，在YMC-C18和Thermo-C18中，红景天苷与其杂质组分不能达到较好的分离效果，无法保证其定量准确性；只有在BDS-C18上，红景天苷既能得到对称的峰形，又能与杂质实现较好的分离.

3.3 供试品溶液配制的考察

试验考察了红景天苷的提取溶剂，即精密称取红景天苷对照品适量共3份，分别以纯甲醇、50%甲醇水、水作为提取溶剂，进行溶解并稀释定容于10 mL容量瓶中，分别超声30 min后，按上述色谱条件进行分析，结果发现红景天苷在50%甲醇中的含量大于在其他两种提取溶剂时，说明其在50%甲醇中提取的效果最好.

本文采用 HPLC 梯度洗脱的方法测定红景天中含红景天苷的量，该法重复性好，准确度高，该方法准确可靠、分离度好，可用于红景天的质量评价.

参考文献：

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[M]. 北京: 化学工业出版社, 2010: 144.

[2] 贾国夫. 红景天的研究概况及展望[J]. 四川草原, 1997(3): 38-40.

[3] 王家明, 闫继平, 王盛虔. 红景天的药理作用研究进展[J]. 中医药学报, 2003,31(4):57-59.

[4] 杨晓艳, 芦启琴, 娄灯吉, 等. HPLC法同时测定红景天中红景天苷、酪醇和没食子酸[J]. 分析试验室, 2009, 5(28): 57-60.

[5] 袁 瑜,张 良, 李玉锋. 红景天活性成分及药理作用[J]. 食品与药品, 2007, 9(05A): 54-57.

[6] 王 昊，季宇彬，汲晨锋.红景天苷对运动疲劳大鼠神经递质影响研究[J].哈尔滨商业大学学报：自然科学版，2011，27(1)：1-4.