JNK和STAT3蛋白在宫颈病变组织中的表达及临床意义

陈 滢 程艳香

宫颈癌(cervical cancer,CC)是最常见的妇科恶性肿瘤之一，在全球妇女恶性肿瘤中居第二位。全球每年约有20万妇女死于此病，其中5.3万发生在中国。早发现、早治疗可使CC患者的生存率明显提高。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun n-terminal kinase，JNK)信号通路在细胞分化、细胞凋亡、应激反应以及多种人类疾病的发生与发展中起着至关重要的作用。信号转导及转录活化因子3(signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)与肿瘤血管生成、免疫抑制及肿瘤侵袭和转移有关，并通过多途径影响肿瘤的发生、发展。本研究采用免疫组化SABC法,检测了CC组织和宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织中JNK和、STAT3蛋白的表达情况，旨在阐明CC与宫颈癌前病变的发病机制奠定实验基础，同时为临床预测子宫颈癌前病变的发展提供客观依据。

1 材料与方法

1.1 临床资料

选择广州军区武汉总医院妇产科和武汉大学人民医院妇产科2005年1月-2008年12月确诊的105例CIN患者，年龄22～65岁，中位年龄38岁，其中CINⅠ38例、CINⅡ33例、CIN Ⅲ34例；CC患者66例，年龄21～76岁，≤35岁11例，>35岁55例，中位年龄47岁，病理类型鳞状细胞癌56例、腺癌8例、腺鳞癌2例。组织学分化：低分化23例、中分化33例、高分化10例。按2009年国际妇产科联盟(FIGO)临床分期标准：Ⅰ期19例、Ⅱ期31例、Ⅲ期13例、Ⅳ期3例。手术或影像学检查证实有淋巴结转移21例。上述患者术前均未行放疗、化疗或激素治疗，且留取病变组织经病理专家确诊。同时选取10例正常宫颈组织作为对照(NCE)。

1.2 JNK、STAT3蛋白表达的检测

采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白—生物素—过氧化物酶(SABC)法。实验步骤按试剂盒要求进行(试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司)：切片染色后经梯度乙醇脱水干燥，二甲苯透明，中性树脂封固，显微镜下观察，以细胞质、细胞核内或细胞膜上出现棕黄色颗粒为阳性标志。JNK蛋白表达于细胞质或细胞核，STAT3蛋白主要表达于细胞质或细胞膜(细胞核少见)。根据文献[1]以半定量方法判定染色结果，每张切片光镜下(400×)观察10个视野，每个视野计数100个细胞，共计1 000个细胞，阳性细胞数<5%为0分、5%～25%为1分、26%～50%为2分、>50%为3分；细胞质、细胞核或细胞膜无色为0分、浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。上述两项分值的乘积1～3分判为阳性，<1分判为阴性。

1.3 统计学方法

应用SPSS 13.0统计软件分析数据，组间率的比较采用χ2检验；相关关系的分析采用Spearman相关分析法，P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3种组织中JNK、STAT3蛋白表达情况

JNK、STAT3蛋白在NCE、CIN及CC组织中阳性表达率均呈逐渐增高趋势，两两比较均有显著差异，见表1。

表1 3种组织中JNK、STAT3蛋白阳性表达率比较(例，%)

注：与NCE组织相比，* 为P<0.05；#为P<0.001；与CIN组织相比，△为P<0.001。

2.2 JNK、STAT3蛋白表达与CC临床病理参数的关系

JNK、STAT3蛋白表达与CC患者年龄、临床分期、淋巴结转移均无关(P>0.05)，但与肿瘤组织学分化有关(P<0.005，χ2值分别为12.08、12.61)，见表2。

表2 JNK、STAT3蛋白表达与宫颈癌CC临床病理特征参数的关系(例，%)

3 讨论

3.1 JNK蛋白在宫颈癌前病变、CC组织中的表达及临床意义

JNK家族是1990年被发现的促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)超家族成员之一，属于进化上保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。大量实验显示，JNK 信号通路在细胞分化、细胞凋亡、应激反应及多种人类疾病的发生与发展中起至关重要的作用。

有学者[2]研究显示，JNK1在胃癌组织中的高表达率为45.16%、低表达率为54.84%。JNK2在胃癌组织中的高表达率为46.77%、低表达率为53.23%。高、中分化胃癌组织中的JNK1、JNK2表达水平显著高于低分化胃癌组织，且两者均与淋巴结转移有关，而与患者年龄、性别、肿块大小及PTNM分期无关。

本研究结果显示，CIN和CC组织中JNK蛋白阳性表达率均显著高于NCE组织，提示JNK异常表达可能参与了子宫颈癌前病变、CC的发生及发展，并支持CIN与CC为同一疾病的连续病变的学说。本研究还显示，CC组织中JNK蛋白表达与肿瘤组织学分级有关(在分化差的CC组织中的阳性表达率明显高于分化好的组织)，而与患者年龄、临床分期、盆腔淋巴结转移无关，提示JNK蛋白过表达可能与CC预后不良有关。因此，JNK有可能成为判断CC预后的一个重要参考指标。

3.2 STAT3蛋白在宫颈癌前病变、CC组织中的表达及临床意义

STAT3是Shuai等[3]于1993年在研究γ-干扰素诱导的细胞基因表达中首次发现的重要信号分子。研究发现，人类多种肿瘤中可检测到STAT表达，如头颈部鳞状细胞癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、多发性骨髓瘤、白血病等[4-9]。Yang等[10]应用免疫组化方法对56例CIN患者病变组织中STAT3和Ki-67蛋白的表达进行了研究，结果发现p-STAT3染色主要位于核内，在CIN Ⅲ组织中阳性表达率为76.92%、在CINⅠ/Ⅱ中阳性表达率为13.33%，两者比较差异有统计学意义(P<0.001)，表明p-SATA3异常表达与CIN分级和细胞增殖有关，并可能作为评价CC预后的一个新指标。Yang等[11]进一步分析了STAT3和Ki-67表达与CIN的关系，发现高级别CIN和CC组织中STAT3的表达水平明显高于正常宫颈组织和CINⅠ组织。

本研究结果显示，STAT3蛋白在NCE、CIN及CC组织中的阳性表达率呈逐渐增高趋势，两两比较均有显著差异。提示STAT3蛋白异常表达在宫颈病变发生与进展中发挥重要作用。本研究还显示，STAT3蛋白表达与CC组织学分级有关，但与患者年龄、临床分期、淋巴结转移等临床病理特征无关。因此，STAT3蛋白异常表达有可能作为判断CC预后不良的一个客观指标。

综上所述，JNK、STAT3蛋白在CIN及CC组织中的表达增强，与CC发生、发展及分化有关；检测两者表达可作为判断CC患者预后不良的一项客观指标及指导个体化治疗的依据。

[1] Kyrikis JM，Avruch J.Mammalian mitogen-activated protein kinasesis transduction pathways activated by stress and inflammation〔J〕.Physiol Rev,2001，81(2):807-869.

[2] 王 进,曾 祥,胡伟民,等.IGF-1R、EGFR、VEGF、HER2在胃癌组织中的表达及与其预后的关系〔J〕.实用癌症杂志,2012,27(5):468-471,485.

[3] Shuai K， Stark GR， Kerr IM， et al.A single phosphotyrosine residue of STAT91 required for gene activation by interferon gamma〔J〕.Science,1993,261(5129):1744-1746.

[4] Song JI,Rubin-Grandis J.STAT signaling in head and neck cancer〔J〕.Oncogene,2000,19(21):2489-2495.

[5] Weber-Nordt RM,Egen C,Wehinger J,et al.Constitutive activation of STAT proteins in primary lymphoid and myeloid leukemia cells and in Epstein-Barr virus(EBV)-related lymphoma cell line〔J〕.Blood,1996,88(3):809-816.

[6] Zushi S,Shinomura Y,Kiyohara T,et al.STAT3 mediates the survival signal in oncogenesis-transfected intestinal epithelial cells〔J〕.Int J Cancer,l998,78(3):326-330.

[7] Gareia R,Bowman TL,Niu G,et al.Constitutive activation of STAT3 by the Src and JAK tyrosine kinases participates in growth regulation of human breast carcinoma cells〔J〕.Oncogene,2001,20(20):2499-2513.

[8] Toyonaga T,Nakanl K,Nagano M,et al.Blockade of constitutively activated Janus kinase/signal transducer and activator of transcription-3 pathway inhibits growth of humanpancreatic cancer〔J〕.Cancer Lett,2003,201(1):107-116.

[9] Buettner R,Mora LB,Jove R.Activated STAT signaling in human tumors provides novelmolecular targets for therapeutic intervention〔J〕.Clin Cancer Res,2002,8(4):945-954.

[10] Yang SF,Yuan SS,Yeh YT,et al.The role of p-STAT3(ser727)revealed by its association with Ki-67 in cervical intraepithelial neoplasia〔J〕.Gynecol Oncol,2005,98(3):446-452.

[11] Yang SF,Yuan SS,Yeh YT,et al.Positive association between STAT3 and Ki-67 in cervical intraepithelial neoplasia〔J〕.Kaohsiung J Med Sci,2006,22(11):539-546.