pcIL-18-MAGE-1基因疫苗免疫荷瘤小鼠抑瘤作用

齐亚灵 王伟群 杨广民 陈玉强 王景霞 王淑英 李 尧 方艳秋

(佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154002)

pcIL-18/MAGE-1共表达基因疫苗免疫C57BL/6J小鼠可以提高其免疫功能〔1〕。用脂质体介导方法，将MAGE-1基因转染Hepal-6细胞，获得稳定表达MAGE-1基因的Hepal-6-MAGE-1细胞〔2〕。本实验观察pcIL-18-MAGE-1疫苗对MAGE-1(+)及MAGE-1(-)荷瘤小鼠成瘤情况及生存情况的影响。

1 材料和方法

1.1材料 质粒pcDNA3、pcIL-18-pcMAGE-1、肝癌细胞株Hepal-6以及稳定表达Hepal-6-MAGE-1细胞株为吉林省人民医院肿瘤生物治疗中心提供。清洁级雌性C57BL/6J小鼠60只(中国医学科学院实验动物研究所)，体重(20±2)g，自由食水，无菌动物室饲养。IMDM 细胞培养液、胎牛血清(武汉博士德公司)。HF240二氧化碳培养箱(上海斯高勒生物科技有限公司)，游标卡尺。

1.2实验分组 小鼠随机分为6组各10只，见表1。

1.3免疫方法及模型制作 取100 μg质粒(0.4 ml 3%氢氧化铝胶)，小鼠大腿内侧肌群肌注。每隔10 d注射1次，共3次。阴性对照组与空白对照组分别注射等量pcDNA3与生理盐水，末次注射7 d后，每只鼠取2×106个/0.1 ml对数生长期Hepal-6-MAGE-1细胞，接种于C57BL/6J小鼠腰肋部皮下，制作MAGE-1(+)荷瘤鼠；取对数生长期Hepa1-6细胞，按照相同的量与部位接种于C57BL/6J小鼠，制作MAGE-1(-)荷瘤鼠。

表1 实验分组及免疫药物

1.4检测指标 成瘤时间即最早扪及皮下结节时间(肿瘤直径达3 mm时，可扪及皮下结节)；肿瘤体积：每3天测量肿瘤的最大直径a及最大横径b，共计测量6次，V=π/6×a×b2；肿瘤生长速率：K=(InVt-InV0)/t〔3〕；荷瘤小鼠生存时间；HE染色法检测瘤体病理结构。

1.5统计学分析 使用SPSS19.0软件进行单因素方差分析和t检验。

2 结 果

2.1各组荷瘤小鼠成瘤情况 见表2。E组和F组成瘤后肿瘤体积、肿瘤生长速率差异不显著(P>0.05)。与B组比较，A组肿瘤生长速率较低(P<0.05)，形成肿瘤时间较长(P<0.05)，成瘤率较低(P<0.05)。A组生存时间虽然比B组长，但差异不显著(P>0.05)。A组和B组分别较C、E组与D、F组抑瘤效果显著(P<0.05)。

表2 各组荷瘤小鼠肿瘤生长相关指标±s,n=10)

2.2荷瘤小鼠瘤体病理结构 肿瘤外观呈卵圆形，质软，A、B组未发现中央组织坏死。C、E、D、F组裸鼠自然死亡后解剖可见中央组织坏死，HE染色见肿瘤细胞大小不一，排列欠规则，多见病理性核分裂，血管丰富，间有少许淋巴细胞浸润。见图1。

图1 各组小鼠成瘤情况(HE，×10)

3 讨 论

MAGE-1基因、蛋白在多种恶性肿瘤组织中高表达，而在正常组织中不表达特性，表明MAGE可以作为抗原特异性抗肿瘤生物治疗的靶点〔4〕。本文说明用两种方法制作的荷瘤小鼠肿瘤生长相关指标一致，可以进行后续实验。pcIL-18-pcMAGE-1基因疫苗对肿瘤的生成、生长起到一定抑制作用。针对MAGE-1基因，可以有效防治肿瘤的发生发展〔5〕。

4 参考文献

1时 阳，杨广民，李首庆，等.MAGE-1与IL-18共表达DNA疫苗的构建与体外表达〔J〕. 中国老年学杂志，2007；27(19)：1865-8.

2杨广民，齐亚灵，李首庆，等.pcDNA3-MAGE-1真核表达载体的构建及其在Hepa1-6细胞中的稳定表达〔J〕.吉林大学学报(医学版)，2010；36(1):49-53.

3毕允力，高解春，姚 明.肾母细胞瘤裸鼠移植瘤模型的建立及其生物学特性〔J〕.中华小儿外科杂志，2000；21(2): 115-8.

4梁 爽，王晓华，赵艳明，等.直肠癌中肿瘤/睾丸抗原相关基因的表达〔J〕. 中国实验诊断学，2011；15(1)：91-3.

5陈雪华，刘炳亚，张冬青，等.MAGE-1、MAGE-3基因在胃癌和胃活检组织中的表达及意义〔J〕. 细胞与分子免疫学杂志，2004；20(3)：310-3.