黄芪多糖对小鼠益智和低氧/复氧损伤的保护作用

王振富 钟 灵 肖本见 杨付明

(湖北民族学院医学院，湖北 恩施 445000)

黄芪主要含有多糖、皂苷、黄酮、氨基酸及微量元素等有效成分〔1〕。临床常用于防治免疫功能紊乱性疾病、心脑血管疾病、促智、延缓衰老和抗肿瘤等多种疾病,疗效确切且副作用较少〔2〕。黄芪提取物(EA) 是从黄芪中提取的有效部位群,主要包括黄芪总苷(AST ) 和黄芪多糖(APS)。本实验通过建立苯异丙腺苷(PIA)致小鼠学习记忆障碍模型；复制低氧/复氧损伤模型，采用碱醇提取法提取黄芪多糖，进一步研究黄芪多糖对小鼠益智和低氧/复氧损伤的保护作用及其机制。

1 材料与方法

1.1主要试剂和仪器 苯异丙腺苷(PIA)购自美国Sigma公司；活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)试剂盒(南京建成生物工程研究所)；WFZ- UV2000紫外可见分光光度计(尤尼科上海仪器有限公司)，TJ270-30A 红外分光光度计(天津光学仪器厂) ，TGL-16G 高速台式离心机(上海安亭仪器厂) ，DL-50型超级恒温器，F-160型药物粉碎机(北京市永光明医疗仪器厂)，RE52-3旋转蒸发器(上海沪西分析仪器厂)。

1.2APS提取物的制备 参照田洛等〔3〕采用碱醇提取黄芪多糖。准确称取黄芪饮片，用5%乙醇与黄芪药材按10∶1的量，在pH12(碳酸钠调节)、温度90℃的条件下提取2次，每次1.5 h，过滤，合并滤液，浓缩沉糖。冷冻干燥保存。实验前以纯水为溶剂配制不同浓度样品,4℃ 低温保存,备用。

1.3益智实验动物分组、造模及处理〔4〕昆明种小鼠，体重25～30 g，由湖北民族学院实验动物中心提供。将40只小鼠随机分为4组，每组10只(雌雄各5只)：PIA组，APS低剂量组，APS高剂量组和生理盐水组。APS低、高剂量组分别灌胃50、150 mg/kg，PIA组、生理盐水组灌胃等量生理盐水，连续给药5 d。末次给药1 h后，PIA组和APS低剂量组、APS高剂量组分别腹腔注射PIA1 mg/kg。15 min 后将小鼠放入跳台仪进行训练,适应环境3 min,随后即在铜条上加36 V 交流电,训练时间为5 min。24 h 后,将小鼠放置橡皮塞上,并通电,进行3 min 测试,记录潜伏期(小鼠停留在橡皮塞上到第1次跳下的时间) 及错误(小鼠在橡皮塞上用前足向下触铜条或从橡皮塞跳下铜条) 次数。

1.4低氧/复氧损伤模型及处理 昆明种小鼠30 只,随机分为3组,每组10只(雌雄各5只)： APS低剂量组，APS高剂量组和生理盐水组。APS低剂量组，APS高剂量组分别灌胃50、150 mg/kg,生理盐水组灌胃等量生理盐水,自由摄食饮水,连续给药5 w,实验日将小鼠放入钠石灰瓶(150 ml 广口瓶,10 g钠石灰) 中,每瓶放小鼠1只,塞紧瓶塞,8 min 后取出,自由呼吸8 min后处理小鼠断头取血,放入带盖的肝素化试管中,立即盖紧,按试剂盒说明书检测全血ROS、CAT、SOD和MDA 各项指标。

2 结 果

2.1APS益智作用 与生理盐水组比较，PIA组小鼠出现明显学习记忆障碍(P<0.01)；与PIA组比较，APS低、高剂量可减弱PIA所致小鼠学习记忆障碍的影响(P<0.01)，见表1。

2.2APS对小鼠低氧/复氧损伤保护作用 与生理盐水组比较，APS低、高剂量组均能升高SOD 、CAT活力，降低ROS、MDA含量(P<0.01)，见表2。

表1 APS对PIA所致小鼠学习记忆障碍的影响

表2 APS对小鼠SOD、CAT、ROS、MDA的影响

3 讨 论

所谓自由基(又称游离基),就是具有未配对的原子、原子团、分子或离子叫自由基。自由基的化学性质活泼,有极强的氧化反应能力,可使各种生物膜的不饱和脂肪酸发生过氧化,形成过氧化脂质〔5〕,这些产物具有一定毒性,能使蛋白质分子内和分子间发生交联,发生去氢、加成、裂解等反应,从而引起DNA的双螺旋交联出现错误或无法分裂,一些酶的活性改变,影响细胞的代谢。过量的氧自由基可引起神经元细胞的损伤,使脑内总RNA和蛋白质含量下降,脑内神经元密度降低,造成动物学习记忆能力下降及机体的衰老〔6〕。许多中草药是强有力的抗氧化剂,适当补充外源性抗氧化物质,可提高机体抗氧化系统的活力,降低过氧化质子含量,从而起到抗衰老作用〔7〕。研究表明，中药党参对PIA致小鼠学习记忆障碍有明显的益智作用〔8〕。本实验结果显示：APS具有提高小鼠学习记忆能力，类似党参的作用。其可能机制为对抗PIA的作用或直接清除自由基。复制小鼠低氧/复氧损伤模型试验结果显示：低氧/ 复氧损伤会产生大量活性氧，胞膜脂质过氧化而导致细胞损伤，产生代谢产物MDA。同时抗氧化酶的活性也有不同程度降低。APS能显著提高SOD、CAT活性和降低ROS、MDA含量，提示APS可通过提高机体抗氧化能力和直接清除自由基等方面发挥其对低氧/复氧损伤的保护作用。

4 参考文献

1曲敬波，齐建祥，崔传芳，等.甘草对老年大鼠SOD、CAT、GSH-Px、LPO影响的实验研究〔J〕.中国医学写作杂志，2005；12(1) :10.

2陈聪颖，陆 阳，陈泽乃.内蒙黄芪的研究概况〔J〕.中草药，2001；32(6):567-9.

3田 洛，宣依昉，范荣军，等.醇碱提取法提取黄芪多糖〔J〕.吉林大学学报(理学版)，2006；44(4):652-7.

4魏 伟，吴希美，李元建.药理实验方法学〔M〕.第4版.北京：人民卫生出版社，2010:663.

5李义奎，王钦茂.中药药理实验方法学〔M〕.上海: 上海科学技术出版社，1989:202.

6毕 敏，尹 政.核桃仁提取物抗脑衰老作用的实验研究〔J〕.现代中药研究与实践，2006；20(3):35.

7杨 辉，程清洲，许 彬，等.竹节参多糖抗脑衰老作用的实验研究 〔J〕.时珍国医国药，2009；20(9)：2311-2.

8肖本见，陈国栋，兰宗平.富硒板党地上部分对小鼠益智和低氧/复氧损伤的保护作用的研究〔J〕.中药材，2005；28(8)：688-90.