北五味子多糖对高脂血症大鼠肝损伤的影响

吴金滢 赵允龙 李 贺 高晓旭 陈建光 王春梅

(北华大学药学院，吉林 吉林 132013)

脂质代谢紊乱是非酒精性脂肪肝病(NAFLD)发病的关键因素〔1，2〕。寻找降脂保肝的新药具有非常重要的意义。北五味子、具有敛肺滋阴、生津止泻、宁心安神等功效，被列入国家药典和保健食品可用原料的名单，但到目前为止均以复方制剂入药，以单味药入药还没有得到很好的开发和应用〔3〕。五味子含有多糖、木脂素等活性成分〔4〕。现代药理学研究表明五味子多糖(SCP)具有提高免疫力、保护肝脏、调节血脂代谢、降低血糖、减肥、抗氧化、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤等作用〔5～8〕。对五味子及其有效成分在保护肝脏的研究中，仅见有防治化学性及酒精性肝损伤等作用进行研究，但其对高脂血症引起的NAFLD是否具有防治作用。尚未见报道。本研究采用高脂饮食诱导肝损伤大鼠模型，观察SCP对高脂血症引起的NAFLD的保护作用。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1动物及饲料 健康清洁级雄性Wistar大鼠，体重180～200 g，由吉林大学实验动物中心提供(许可证编号：2008-0005)。普通饲料成分及其热量：脂肪5%，碳水化合物53%，蛋白质23%，包括纤维素及水分在内的其他成分占19%，总热量为25 kJ/kg；高脂饲料成分及其热量：胆固醇2%，胆酸钠0.5%，丙硫氧嘧啶0.2%，脂肪22%，碳水化合物48%，蛋白质20%，包括纤维素及水分在内的其他成分占7.3%，总热量为48.3 kJ/kg。大鼠采取分笼饲养，并维持12 h∶12 h昼夜循环，每日喂食，自由采食、饮水。

1.1.2药品与试剂 SCP由北华大学林学院食品科学与工程实验室优选新品种，首先通过超临界CO2流体萃取，将北五味子中水溶性成分和脂溶性成分分离，然后利用超声波产生的强烈震动、高加速度、强烈空化效应及搅拌作用，经超声波预处理40 min进行浸提，再经酶法与三氯乙酸结合脱蛋白得SCP，提取率为77.6%，纯度可达50%〔9,10〕；胆固醇(批号201110)，胆酸钠(批号201111)，氨基甲酸乙酯(批号T20101026)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)试剂盒(批号110607-1)，甘油三酯(TG)试剂盒(批号20111031)，总胆固醇(TC)试剂盒(批号20111102)，谷丙转氨酶(ALT)试剂盒(批号20120410)，谷草转氨酶试(AST)剂盒(批号20120412)。

1.1.3仪器 Infinite M200TECAN酶标仪，瑞士TECAN集团公司；JY92-IID超声波细胞粉碎仪/粉碎机，宁波新生生物科技股份有限公司；ESJ110-4B电子分析天平，沈阳龙腾电子有限公司；MH-2微量振荡器，海门市其林贝尔仪器制造有限公司；GL-20G-Ⅱ飞鸽牌离心机，上海安亭科学仪器厂；RM2126石蜡切片机，德国Leica公司；OLympus Bx50光学显微镜，日本OLympus公司。

1.2方法

1.2.1高脂血症大鼠模型的建立及分组 32只Wistar雄性大鼠，随机分出正常对照组和正常SCP干预组各8只，以普通饲料喂养，其余16只用于建立高脂血症大鼠模型，高脂饲料喂养。4 w后，禁食12 h，大鼠尾静脉采血，检测TC和TG。确定高脂血症模型成功。将制备成功的高脂血症大鼠16只随机分为高脂血症模型组和SCP治疗组各8只。药物处理组每日以SCP 50 mg/kg，连续灌胃12 w，正常对照组和模型组给予等体积溶媒灌胃12 w。

1.2.2血脂和血清转氨酶检测 治疗结束后，大鼠禁食12～16 h，乌拉坦(100 mg/kg)腹腔注射麻醉，腹主动脉取血并处死动物。大鼠约取血4～5 ml/只，分离血清，分装入EP管，-70℃冻存待测。TC、TG、LDL-C、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、ALT及AST采用酶学方法检测，具体方法参照试剂盒说明书。

1.2.3肝脂质检测 提取肝脏脂质，取200 mg肝组织，放入冰冷的生理盐水中漂洗，去除残留血液，滤纸拭干，准确称重，并迅速用手术刀片切碎，置于离心管中，按氯仿/甲醇=2∶1(V/V)混合，先加入3倍体积的甲醇，13 000 r/min电动匀浆10 s/次，间隔30 s，连续3～5次，在冰水中进行，再加入6倍体积的氯仿，漩涡混合器上混匀，制备成10%的肝组织匀浆。将匀浆液置恒温振荡器中不断振荡抽提24 h后，小心抽取下相脂质层10 μl。采用酶学方法检测肝脏组织中TC和TG，具体操作方法严格按照试剂盒说明书。

1.2.4肝脏病理学检测 大鼠取血后，小心分离肝脏与周围组织，在相同部位取肝左叶组织块，冷生理盐水冲洗后，置入10%甲醛溶液固定后，0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)浸泡过夜，常规梯度酒精脱水，石蜡包埋，制成4 μm石蜡切片。经二甲苯脱蜡及梯度乙醇复水后，行苏木素-伊红(HE)染色，再进行梯度乙醇脱水，脱水后将组织切片中的乙醇用二甲苯置换出来。最后滴加中性树胶封片，显微镜下观察、拍照。

2 结 果

2.1各组大鼠血脂的比较 与正常对照组比较，模型组血清中TC、TG和LDL-C水平显著增高(P<0.01)，HDL-C水平无明显变化。SCP治疗12 w，显著降低了模型组血清TC、TG和LDL-C水平(P<0.05)，而对正常大鼠血脂没有明显影响。见表1。

表1 各组大鼠血脂的比较

2.2各组大鼠肝脂质的比较 与正常对照组比较，模型组肝组织中TC和TG水平显著增高(P< 0.01)。SCP治疗12 w，显著降低了模型组肝组织中TC和TG水平(P< 0.01)，而对正常大鼠肝脂质脂没有明显影响。见表2。

2.3各组大鼠血清转氨酶的比较 与正常对照组比较，模型组血清中ALT和AST水平显著增高(P< 0.01)，SCP治疗12 w，显著降低了模型组血清ALT和AST水平(P< 0.05)，而对正常大鼠肝功能没有明显影响。见表2。

表2 各组大鼠肝脏脂质及血清转氨酶的比较

2.4各组大鼠肝病理学的比较 正常组大鼠肝小叶结构完整，肝细胞形态呈圆形，核位于中央，胞浆染色均匀呈粉色，小叶周边汇管区结构正常；模型组大鼠肝小叶结构紊乱，小叶中央静脉扩张，小叶内可见肝细胞脂肪变性，出现以大泡性脂肪变性为主的混合性脂肪变性，肝细胞体积增大，胞浆内可见脂肪空泡，小叶内可见肝细胞点状坏死；SCP治疗组与模型组相比肝小叶结构基本正常，小叶内肝细胞脂肪变性明显减轻，偶可见肝细胞点状坏死。见图1。

图1 各组大鼠肝脏病理形态的比较(HE染色,×100)

3 讨 论

近年来植物多糖以其优良的调节血脂、降血糖、调节免疫力、抗氧化等功效而备受关注。五味子是我国传统保肝药，多与其他药物合用临床用于防治化学性及酒精性肝损伤〔11〕。依据“二次打击学说”，“初次打击”是指过多的脂肪在肝脏的堆积，而脂肪沉积于肝细胞其最主要的机制为进入肝细胞的脂肪酸(FFA)过多。肝脏线粒体氧化途径不能满足FFA的代谢，过量的FFA转化为TG储存于肝细胞质中，导致肝内TG的堆积。当肝细胞内TG合成的速度过快,肝内合成的极低密度脂蛋白(VLDL)不能运出肝脏清除时，则肝内TG蓄积达到一定程度，就会形成脂肪肝〔12〕。有研究〔13〕表明，高脂饮食喂养的大鼠血清和肝脏脂质的含量会同步增高。本实验研究结果与之相符，并说明SCP对高脂饮食诱导的大鼠血脂及肝脂质代谢紊乱具有良好的改善作用。

血脂升高，肝中脂肪来源过多，肝功能障碍，肝合成释放脂蛋白的功能降低及氧化脂肪酸的能力减弱；合成磷脂原料减少则影响脂蛋白的形成和输出，从而发生肝功能异常。ALT和AST均为非特异性细胞内功能酶，当肝细胞坏死、细胞膜损伤时，由于肝细胞膜通透性增高，细胞内转氨酶血液外漏，使血清ALT和AST活性增高，因此能敏感地反映肝细胞损伤与否及损伤的程度〔14〕。本研究结果显示，SCP治疗有很好的保护肝功能、逆转肝功能异常的作用。此外，也说明SCP治疗在改善大鼠肝功能的同时也明显减轻了高脂血症大鼠肝脏脂肪变性。

综上,SCP表现出良好的降脂保肝作用,将为SCP防治NAFLD提供理论依据。

4 参考文献

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