EphA2在胃癌中的表达及临床病理学意义

金响国 孙向东 胡 凯 李兴江 张丽艳 许景伟 王莹颖

(齐齐哈尔医学院第一附属医院普外一科，黑龙江 齐齐哈尔 161041)

胃癌是消化系统常见的肿瘤之一，其转移及复发是引起患者死亡的主要原因，也是影响预后的主要因素。近来研究表明作为酪氨酸激酶受体家族重要成员之一的促红细胞生成素产生肝细胞受体 A2 家族成员(EphA2 )在调节肿瘤细胞生长、转移及血管形成过程中发挥重要的作用〔1，2〕。EphA2是最早被分离出来的Eph亚家族成员，在多种肿瘤组织中有高表达〔2〕。有关EphA2表达与胃癌发生发展关系的研究较少。本文采用免疫组化SP法检测EphA2在胃癌组织中的表达，旨在探讨其在胃癌组织中表达的临床病理学意义，为胃癌的临床治疗提供基础理论依据。

1 资料和方法

1.1标本来源 收集本院病理中心2009年1月1日至2010年12月31日胃腺癌手术标本60例，其中女24例，男36例，年龄50～62岁，中位年龄55岁，术前患者均未接受放化疗。高分化胃腺癌23例(高分化管状腺癌16例、高分化乳头状腺癌7例)，中低分化腺癌37例(中分化管状腺癌18例、中分化乳头状腺癌5例、低分化黏液腺癌10例、腺鳞癌3例、神经内分泌肿瘤1例)。浸润深度：早期胃癌(癌组织局限胃壁黏膜层及黏膜下层)10例；进展期胃癌(癌组织浸润到黏膜下层)50例；有淋巴结转移42例，无淋巴结转移18例；有血道转移13例，无血道转移47例。肿瘤直径<4 cm 26例，肿瘤直径≥4 cm 34例。根据国际抗癌联盟(IUCC)胃癌TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期23例，Ⅲ～Ⅳ期37例。

1.2主要试剂 兔抗EphA2多克隆抗体(SC-924，Santa Cruz)，通用型SP免疫组化试剂盒(SP-9000)及二氨基联苯胺(DAB，ZLI-9031)均购北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3免疫组织化学检测 胃癌及癌旁胃组织(距肿瘤边缘>5 cm的组织标本)经石蜡包埋后5 μm连续切片，常规脱蜡、水化、抗原修复。SP免疫组织化学染色方法按试剂盒说明书进行，兔抗EphA2 稀释比例为1∶200。磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作阴性对照。已知阳性的乳腺癌组织切片作为阳性对照。

1.4结果判断标准 EphA2蛋白主要表达于细胞质中，以细胞质内出现黄的颗粒为阳性细胞。结果判定〔3〕：染色强度计分浅黄色计1分，棕黄色计2分，黄褐色或棕褐色计3分。染色阳性细胞百分率计分<25%计0分，26%～50%计1分，51%～75%计2分，>75%计3分。染色强度的计分乘以阳性细胞率计分≥3为阳性表达，计分<3分者为阴性表达。

1.5统计学处理 应用SPSS13.0软件进行分析，组间差异之间采用χ2检验。

2 结 果

2.1EphA2胃癌组织及癌旁组中的表达 EphA2在胃癌组织中的阳性表达率为76.7%(46/60)，主要表达于癌细胞的细胞质中，呈棕黄色颗粒状。EphA2在癌旁胃组织中的阳性表达率为48.3%(29/60)。EphA2在胃癌组织中的阳性表达率高于癌旁胃组织(χ2=10.276，<0.01)。见图1。

图1 胃癌组织中EphA2阳性表达(×200)

2.2EphA2蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系 EphA2在中低分化胃癌组织中的阳性表达率高于高分化胃癌组织(P<0.05)；在早期胃癌组织中的阳性表达低于进展期胃癌组织(P<0.05)；在有淋巴结转移组胃癌组织中表达高于无淋巴结转移组(P<0.05)；在TNM分期中Ⅰ～Ⅱ期表达的阳性率低于Ⅲ～Ⅳ期(P<0.05)。EphA2的阳性表达与患者年龄、性别、肿瘤直径及是否有血道转移无关(P>0.05)。见表1。

表1 EphA2表达与胃癌临床病理学特征的关系〔n(%)〕

3 讨 论

Eph家族是已知受体酪氨酸激酶家族(RTK) 中最大的亚家族，为膜结合型糖蛋白，与配体结合后其构象发生改变，形成受体-配体复合物，激活胞质内酪氨酸激酶，启动下游不同信号通路，从而引起一系列生物学效应，参与胚胎发育、血管发生、细胞生长、分化、迁移及肿瘤形成等过程〔1，2〕。

EphA2基因是第一个被筛选出来的Eph亚家族成员，定位染色体1p36.1，编码分子量为130 kD的蛋白。EphA2 与其配体结合，启动细胞内不同信号传导通路，发挥不同作用〔2，4～7〕。EphA2广泛表达于人类多种肿瘤细胞和肿瘤组织中，如肺癌、胃癌和结肠癌中〔4～7〕。本研究说明EphA2在胃癌组织中的高表达与胃癌的发生有着密切的关系，EphA2表达增高与其蛋白稳定性增加、降解减少有关；EphA2表达增加促进细胞的恶性转化〔8〕及细胞增殖〔9〕参与肿瘤的发生及发展。本研究结果与袁伟杰〔5，6〕等的研究结果基本一致，认为EphA2的高表达与胃癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期密切相关，说明EphA2蛋白的表达增加在胃癌的恶性进展中发挥了重要作用。已有研究显示，EphA2蛋白具有促进肿瘤侵袭的作用。EphA2受体与其配体结合发挥作用，如结合血管内皮生长因子(VEGF)促进肿瘤血管生成、通过调节钙黏蛋白及黏着斑激酶等影响肿瘤细胞间的黏附或肿瘤细胞与细胞外基质的黏附，促进肿瘤细胞的迁移和侵袭〔9〕，进而促进肿瘤的发展。针对EphA2的靶向治疗研究也取得一定进展〔10〕。

综上所述，EphA2的高表达与胃癌的发展、浸润密切相关，在临床上检测EphA2的表达能作为判断胃癌恶性程度的指标之一。EphA2有望成为胃癌基因治疗的一个新靶点，对其结构和功能的进一步研究将为胃癌的治疗开辟新思路。

4 参考文献

1Lindberg RA，Hunter T.cDNA cloning and characterization of eck，an epithelial cell receptor protein-tyrosine kinase in the eph/elk family of protein kinase〔J〕.Mol Cell Biol，1990；10(12)：6316-24.

2Zhou N，Zhao WD，Liu，DX，etal.Inactivation of EphA2 promotes tight junction formation and impairs angiogenesis in brain endothelial cells〔J〕.Microvasc Res，2011；82(2)：113-21.

3王明涛，王绍清.胃癌组织VEGF表达和MVD与临床病理因素相关性分析〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2012;19(14)：1078-81.

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5袁伟杰，陈志康，伍绍斌，等.EphA2和E-cadherin在胃癌中的表达及其意义〔J〕.中国普通外科杂志，2008；17(4)：397-9.

6Nakamura R，Kataoka H，Sato N，etal.EPHA2/EFNA1 expression in human gastric cancer〔J〕.Cancer Sci，2005；96(1)：42-7.

7蒋 萍，李景和，罗庚求，等.大肠癌组织中EphA2，VEGF和MMP9蛋白的表达及其相关性研究〔J〕.中国普通外科杂志，2007；16(7)：696-9.

8Zantek ND，Asimi M，Fedor-Chaiken M，etal.E-cadherin regulates the function of the EphA2 receptor tyrosine kinase〔J〕.Cell Growth Differ，1999；10(9)：629-38.

9刘 辉，郭建文，刘江惠，等.胃癌组织中EphA2基因的表达及其与细胞凋亡、增殖的关系〔J〕.中国老年学杂志，2010；30(3)：293-6.

10方艳伟，邱文娜，耿少梅.EphA2-ephrinA1与恶性肿瘤发生的关系及靶向治疗潜能探讨〔J〕.肿瘤防治研究，2012；39(6)：750-3.