花生壳醇提物镇咳、祛痰及平喘作用研究

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1.保山中医药高等专科学校，云南 保山 678000；2.大理学院药学与化学学院，云南 大理 671000

花生壳醇提物镇咳、祛痰及平喘作用研究

赵健荣1郭美仙2刘晓波2*

1.保山中医药高等专科学校，云南 保山 678000；2.大理学院药学与化学学院，云南 大理 671000

对花生壳醇提物和木犀草素进行镇咳、祛痰及平喘作用的比较研究。方法：浓氨水引咳法、小鼠酚红祛痰法、豚鼠离体气管条法，观察花生壳醇提物和木犀草素的镇咳、祛痰及平喘作用。结果：花生壳醇提物能延长小鼠咳嗽潜伏期和减少咳嗽次数，而木犀草素无明显作用；花生壳醇提物及木犀草素能明显增加小鼠呼吸道酚红的排泌量；花生壳醇提物对乙酰胆碱及磷酸组胺致痉的豚鼠离体气管平滑肌有明显的解痉作用，且作用优于木犀草素。结论：花生壳醇提物有明显的镇咳、祛痰及平喘作用。

花生壳醇提物；木犀草素；镇咳；祛痰；平喘

花生壳(Peanut hull)是豆科一年生草本植物花生(Arachis hypogeae L.)的干燥果壳，我国有丰富的资源。花生壳在民间做中草药，可治疗哮喘、痰多、高血压等，其标准收载于1996年版《云南省药品标准》[1]。花生壳的有效成分是以木犀草素(luteolin)为主的黄酮类化合物，现代研究表明，花生壳中黄酮具有降脂减肥、抗自由基、抗氧化、抑菌、抗病毒等作用[2]。但并未见花生壳有镇咳、祛痰及平喘作用的报道，为此本文对花生壳和木犀草素的镇咳、祛痰及平喘作用进行实验研究。

1 材料与仪器

1.1 动物 KM小鼠，清洁级，体重18～22 g，雌雄各半，由昆明医科大学实验动物中心提供，合格证：SCXK(滇)2011-0004。豚鼠，普通级，体重300～400 g，雌雄各半。

1.2 药品与试剂 花生壳(云南大理宾川县)；木犀草素(中国生物制品检定所，批号：111520-200201)；氯化乙酰胆碱(Ach，上海爱思试剂有限公司，批号：20061130)；磷酸组胺(上海丽珠东风生物技术有限公司，批号060518)；咳必清片(苏州医药集团有限公司，批号：061011)；氯化铵片(上海医药有限公司信谊制药总厂，批号：070129)；氨茶碱片(吉林敖东延边药业股份有限公司，批号：060911)；苯酚红(北京市朝阳区旭东化工厂产品，批号：990669)；浓氨水(上海试剂一厂综合经营公司产品，浓度28%，AR级，批号：20020327)。

1.3 仪器 ZTW-40型真空提取浓缩机(天津三延精密机械有限公司)；RE-52-99旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；MP120-1电子天平(上海第二天平仪器厂)；420-AI超声雾化器(上海鱼跃医疗设备有限公司总经销)；756MC紫外分光光度计(上海精密仪器科学有限公司)；HW-400 恒温平滑肌槽；BL-420E+生物机能实验系统(四川成都泰盟科技有限公司)。

2 实验方法

2.1 药物的提取[3]取鲜花生，洗净去仁，经阴干去除水分，粉碎，用ZTW-40 型真空提取浓缩机，75%乙醇溶液65℃减压提取3 次，每次1.5 h，提取液合并后至旋转蒸发仪浓缩成浸膏。经比色法测得总黄酮含量3.81%，用时浸膏分别配成相当于生药材3.9%，7.8%，15.6%的混悬液备用，相当于总黄酮给药量的低(30 mg/kg)、中(60 mg/kg)、高(120 mg/kg)剂量。

2.2 镇咳作用 参照文献[4-5]。昆明种小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，14%氨水定量超声雾化5 s，记录小鼠从接受喷雾开始至出现咳嗽的时间，以及2 min 内的咳嗽次数，咳嗽标准为，腹肌收缩，同时张大嘴，喷雾2 min内不咳嗽者舍弃。合格小鼠于两天后随机分7组，每组12 只，雌雄各半。低、中、高剂量花生壳醇提物组，木犀草素组(120 mg/kg)，CMC-Na组(100 mg/kg)，咳必清组(20 mg/kg)，N.S.对照组。前四组均用0.5% CMC-Na 溶液配成混悬液，各组均i.g.给予20 ml/kg的相应试剂，连续5 d，每天1次，于末次给药后30 min，将小鼠放入1000 ml烧杯中，开启超声雾化器，均匀地向容器中产生氨气5 s，观察小鼠咳嗽动作，记录潜伏期及2 min内咳嗽的次数。

2.3 祛痰作用

2.3.1 测定酚红最大吸收峰 参照文献[6]，在100 ml容量瓶内用5%NaHCO3溶液精确配制浓度为1 mg/ml 的酚红母液，再稀释成0.01、0.1、0.3、0.5、0.7、1、3、5、10 μg/ml溶液，分装于9个10 ml容量瓶内。任取两管溶液，以未知浓度的酚红0管作对照，用756型紫外分光光度计在波长420～570 nm范围内进行波长扫描。结果酚红在546 nm 处有最大吸收峰。

2.3.2 绘制酚红标准曲线 将上述配制的酚红溶液分别在546 nm波长处测光密度值，结果各管酚红含量与光密度之间的直线相关有极显著意义(相关系数r=0.9999，p<0.001)，各数据及线性方程如表1。

表1 酚红标准曲线方程

2.3.3 对小鼠呼吸道酚红排泌量的影响 参照文献[6-8]，取体重18～22 g 小鼠84只，随机分7组，每组12只，雌雄各半。低、中、高剂量花生壳醇提物组，木犀草素组(120 mg/kg)、CMC-Na组(100 mg/kg)、氯化铵组(120 mg/kg)、N.S.对照组。前四组均用0.5% CMC-Na 溶液配成混悬液，各组均i.g.给予20 ml/kg的相应试剂，连续5 d，每天1次。实验前小鼠禁食不禁水8～12 h，第3天小鼠给药30 min 后，i.p.酚红溶液0.5 ml/只，30 min 后脱椎处死，解剖分离出气管，剥去气管周围组织，剪下自甲状软骨至气管分支处的一段气管，用0.5 ml 5%NaHCO3冲洗3次于10 ml离心管中，再加2 ml 5% NaHCO3冲洗管壁，离心5 min，取上清液，用756型分光光度计与546 nm处测吸光度A值，据回归方程求出浓度(μg/ml)，数据t检验。

2.4 平喘作用 参考文献[6-9]，取豚鼠24只，体重300～400g，雌雄各半，用木棰猛击豚鼠头部致死，迅速切开颈部皮肤，分离气管。从甲状软骨下至气管下端分叉处将整段气管剪下，放入盛有营养液的培养皿中(营养液预先用氧气饱和)，仔细剔除气管周围的结缔组织，将气管剪成宽2～3 mm，长4 cm的螺旋条，一段气管制成2～3个螺旋条，在气管条一端用缝针穿一根线，将其固定于通气钩上，小心放入药液筒内，用氧气球与HW-400恒温平滑肌槽(37±0.1℃恒温)的氧气输入口连接，调节恒温平滑肌槽气量调节阀，保持每分钟通入40～60个气泡，另一端用铁钩连于换能器上，调节其前负荷在2.0 g左右，让气管在营养液中平衡90 min，用BL-420E+生物机能实验系统记录一段正常曲线，然后加入磷酸组胺(60 μg/ml)或Ach(30 μg/ml)，当气管平滑肌张力升到最高点时，在各个标本中分别加入以下药液：N.S.、氨茶碱、CMC-Na、木犀草素、低、中、高剂量花生壳醇提物。观察比较各组标本给药后3 min内曲线下降幅度，并按下式求出其解痉百分率：

解痉百分率(%)=[(给药前张力-给药后张力)÷(给药后张力-前负荷张力)]×100%

3 结果及结论

3.1 花生壳醇提物的镇咳作用 由表2可知，低、中、高剂量花生壳醇提物组及咳必清组对浓氨水引起的小鼠咳嗽有明显的镇咳作用，并能明显延长潜伏期及减少咳嗽次数，但木犀草素组并没有明显的镇咳作用。

表2 花生壳醇提物对小鼠浓氨水所致咳嗽的影响±s，n=12)

与N.S.组比较*P<0.05,**P<0.01；与咳必清组比较#P<0.05，##P<0.01.

3.2 花生壳醇提物的祛痰作用 由表3可知，中、高剂量花生壳醇提物组及木犀草素组能明显增加小鼠呼吸道酚红的排泌量，显示有较好的排痰作用，且高剂量作用强于木犀草素。

表3 花生壳醇提物对小鼠呼吸道酚红排泌量的影响

与N.S.组比较*P<0.05,**P<0.01；与咳必清组比较#P<0.05，##P<0.01.

3.3 花生壳醇提物的平喘作用 由表4可知，花生壳醇提物低、中、高剂量及木犀草素组能使组胺及Ach致痉的豚鼠气管螺旋条平滑肌松弛，并随剂量的增加而增强。高剂量组与氨茶碱组相当，木犀草素组比低剂量组作用强，中、高剂量作用明显强于木犀草素组。

4 讨论

我国是花生生产大国，年产花生壳近4000 kt，占花生果重的30%左右。这些花生壳除了少部分被用作饲料和燃料外，大部分被扔掉，造成资源的极大浪费。花生壳的有效成分是以木犀草素为主的黄酮类化合物，其中木犀草素含量约为0.3%[10]。木犀草素为白毛夏枯草或青兰的有效成分，属弱酸性四羟基黄酮化合物，具有抗炎、抗过敏和免疫调节作用[11]。Das M等[12]研究木犀草素对卵白蛋白致敏小鼠哮喘的作用，指出低剂量木犀草素在致敏过程中和致敏后都能显著减轻哮喘的症状，减轻支气管收缩和气道高反应性。本实验结果也表明，木犀草素能使组胺及乙酰胆碱致痉的豚鼠气管螺旋条平滑肌松弛；并能明显促进小鼠气管腺体的分泌。结果还表明花生壳醇提物比木犀草素作用更明显，且花生壳醇提物能明显延长氨水引起小鼠咳嗽的潜伏期及减少咳嗽次数，具有良好的镇咳、祛痰、平喘作用，为临床治疗肺部疾病提供了药理实验依据。

表4 花生壳醇提物对豚鼠离体气管条的影响±s,n=8)

与氨茶碱比较*P<0.05,**P<0.01；组胺终浓度(3 μg/ml)，乙酰胆碱终浓度(1.5 μg/ml).

花生壳醇提物的镇咳、祛痰、平喘药理作用比木犀草素效果更佳，可能由于花生壳醇提物中含有某些其它具有镇咳、祛痰、平喘药理作用的成分，致使其作用增强；也可能是多种成分综合作用的结果，这也是本实验的目标所在。但是花生壳醇提物中总黄酮的镇咳、祛痰及平喘作用是否比花生壳总醇提物更强或相当，则有待通过进一步实验来证明。

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Antitussive,expectorantandanti-asthmaticeffectoftheethanolextractfrompeanuthull

ZHAO Jian-rong1,GUO Mei-xian2,LIU Xiao-bo2*

1.Baoshan college of traditional Chinese medicine baoshan,China,678000;2.College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali 671000,China.

To observe the effects of relieving cough, removing the phlegm and calming panting of Lute Olin and the ethanol extract from peanut hull. Methods: The effects of relieving cough, removing the phlegm and calming panting of Lute Olin and the ethanol extract from peanut hull were researched by the method of strong aqua leading to cough, the method of phenol red expectorant in mice, the method of trachea in vitro of guinea pigs. Results: The ethanol extract from peanut hull could prolong cough incubation period and decrease the numbers of cough in mice, but the Lute Olin has no obvious effect; Lute Olin and the ethanol extract from peanut hull can significantly increase the amount of phenol red in respiratory of mice; the ethanol extract from peanut hull have a obvious spasmolysis effects on the isolated tracheal smooth muscle’s spasm induced by acetylcholine and histamine phosphate and the effect is better than that of Lute Olin. Conclusion: The ethanol extract from peanut hull has obvious effects of relieving cough, removing the phlegm and calming panting.

Ethanol extract from peanut hull;Lute Olin;Relieve cough;Remove phlegm;Calm pant

赵健荣(1978-)，女，白族，讲师，保山中医药高等专科学校。E-mail:1454563266@qq.com

刘晓波(1972-)，男，苗族，副教授，从事中药药理学研究。E-mail:yndlxb@126.com

R285

A

1007-8517(2014)10-0011-03

2014.02.12)