HPLC法测定复方三维亚油酸胶丸Ⅰ中维生素C、B6的含量

河北省邯郸市食品药品检验中心，河北 邯郸 056002

HPLC法测定复方三维亚油酸胶丸Ⅰ中维生素C、B6的含量

刘艳丽

河北省邯郸市食品药品检验中心，河北 邯郸 056002

目的建立测定复方三维亚油酸胶丸Ⅰ中维生素C、B6含量的高效液相色谱法。方法采用色谱柱：Sunfire C18(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：0.04%戊烷磺酸钠溶液(pH=2.5)-甲醇(85∶15)；流速：1.0ml·min-1；检测波长：291 nm，柱温：30℃。结果维生素C在0.1255mg·ml-1～3.7650 mg·ml-1范围内线性关系良好(r=0.9995)，平均回收率为99.3%，RSD为1.48%(n=9)；维生素B6在0.0106mg·ml-1～0.3180 mg·ml-1范围内线性关系良好(r=0.9992)，平均回收率为100.6%，RSD为0.90%(n=9)。结论该方法简便、快捷，能更好地控制该产品的质量。

复方三维亚油酸胶丸Ⅰ；维生素C；维生素B6；HPLC

复方三维亚油酸胶丸Ⅰ是一种降血脂药，曾用名脉通胶囊， 由亚油酸、维生素B6、维生素C、维生素E、肌醇、大豆磷脂、甲基橙皮苷七种成分组成，用于治疗和预防动脉粥样硬化、降低血脂等症。收载于国家药品标准化学药品地标升国标第四册[1]，但该标准对维生素C和维生素B6仅有简单的理化定性鉴别方法，没有制定含量定量测定方法。查阅文献资料也没有同时测定复方三维亚油酸胶丸Ⅰ中维生素C、B6的含量报道。本文摸索出适合同时测定复方三维亚油酸胶丸Ⅰ中维生素C、B6含量的高效液相方法，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters e2695高效液相色谱仪(美国)，Empower色谱工作站，waters 2498型紫外检测器，XS105型电子天平(瑞士梅特勒)。戊烷磺酸钠为分析纯；甲醇为色谱纯；水为一级纯化水；其余试剂均为分析纯。维生素C(批号:100425-200702)、维生素B6(批号:110116-200502)由中国药品生物制品检定所提供。复方三维亚油酸胶丸Ⅰ(批号：13040821，神威药业集团有限公司；批号：120314，华北制药康欣药业有限公司；批号：120601，天津中央药业有限公司；批号：130217，青岛双鲸药业有限公司；批号：20130301，秦皇岛百慧制药厂)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Sunfire C18(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：0.04%戊烷磺酸钠溶液(pH=2.5)-甲醇(85 ∶15)；流速：1.0ml/min；检测波长：291 nm，柱温：30℃；进样量10μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 分别精密称取维生素C对照品0.12550g与维生素B6对照品0.01060g，置100ml量瓶中，加0.03mol/L磷酸二氢钠溶液(pH为2.5)适量，振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 取20粒内容物，混合均匀，精密称取约2g，置100ml量瓶中，加0.03mol/L磷酸二氢钠溶液(pH2.5)适量，超声20min使充分溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液[2、3]。

2.2.3 阴性样品溶液 按处方比例制备不含维生素C、B6的阴性样品，按“2.2.2”供试品溶液项下的方法制备阴性样品溶液。

2.3 方法专属性考察 分别精密量取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10μl，注入液相色谱仪。在上述色谱条件下，供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间一致，而阴性样品在相同的保留时间内无色谱峰，表明处方中其他成分对维生素C、B6的测定干扰不明显，该方法专属性强。

2.4 线性关系考察 分别精密量取“2.2.1”项下的对照品溶液1、2、5、10、20、30μl，注入液相色谱仪进行测定，以峰面积A对浓度C(mg·ml-1)进行线性回归，维生素C的回归方程为A=2E+06C-26906(r=0.9995)，结果表明维生素C在0.1255～3.7650 mg·ml-1范围内线性关系良好；维生素B6的回归方程为A=4E+07C-204542(r=0.9992)，结果表明维生素B6在0.0106～0.3180 mg·ml-1范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密量取对照品溶液10μl，重复进样5次，按上述色谱条件测定维生素C、B6的峰面积，RSD分别为0.2%、0.3%。

2.6 重复性试验 取同一批样品6份，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件分别进样测定，计算样品中含维生素C、B6的含量(mg.g-1)，其RSD为1.52%、1.04%。

2.7 稳定性试验 取对照品溶液按上述色谱条件分别于0、1、2、3、4、5、12、24h进样测定，维生素C、B6的峰面积的RSD分别为0.4%、0.7%，结果表明溶液在24h稳定。

2.8 样品测定 取5批复方三维亚油酸胶丸Ⅰ，按 “2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件，精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μl进样测定，按外标法以峰面积计算含量，结果见表1。

表1 样品测定结果(n=5)

3 讨论

3.1 波长的选择 取一定浓度的维生素C、B6溶液于200～400nm波长处扫描，维生素C于242nm波长处有最大吸收，维生素B6于291nm波长处有最大吸收，然而处方中两者所占比例为12.5∶1，如果选择双波长的话，在各自最大波长处测得的信号响应值，维生素C的峰值远远大于维生素B6的峰值，得不到满意的图谱，后采用291nm作为测定波长，结果满意。

3.2 提取条件的选择 复方三维亚油酸胶丸Ⅰ主要成分亚油酸为脂溶性成分，不易溶于水，而维生素C、维生素B6为水溶性成分，易溶于水，在酸性溶液中较稳定，采用0.03mol/L磷酸二氢钠溶液(pH2.5)超声20min，加速两者的充分溶解，易于提取完全。

[1]国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准(第4册)[S]．2002：141-142．

[2]索志荣，郑建斌，朱小红．复方三维亚油酸胶丸Ⅰ中甲基橙皮苷和维生素C的HPLC分析[J]．药物分析杂志，2005，25(9)：1012-1014．

[3]冯国．HPLC法测定二维亚铁颗粒(Ⅱ)中维生素C、维生素B6含量[J]．中国药师，2013，16(1)：84-86．

刘艳丽，女，副主任药师，主要从事药品检验。E-mail：liu_yl12345@sohu.com

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1007-8517(2014)14-0008-02

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