HPLC法测定辽源七厘散中大黄酸、大黄素、大黄酚的含量

哈尔滨三乐生物工程有限公司，黑龙江 哈尔滨 150000

HPLC法测定辽源七厘散中大黄酸、大黄素、大黄酚的含量

张德志

哈尔滨三乐生物工程有限公司，黑龙江 哈尔滨 150000

目的为进一步控制辽源七厘散质量，建立该药中大黄酸、大黄素、大黄酚的含量测定方法。方法以Luan-C18 (150mm×4.6mm，5μm)为色谱柱，柱温：35℃；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(80:20)洗脱；检测波长：254nm；进样量10μl。结果该方法检测大黄酸、大黄素、大黄酚线性关系良好，相关系数均在98.5%以上，辽源七厘散中含量大黄酸、大黄素、大黄酚的平均含量分别为1.258、1.319 、4.297 mg/g。结论该方法专属性好，准确度高，可用于评价辽源七厘散的质量。

辽源七厘散；大黄酸；大黄素；大黄酚；HPLC

辽源七厘散收载于部颁标准中药成方制剂第六册[1]，由血竭、红花、大黄、儿茶、降香等10余种中药配制而成。具有舒筋活血、散瘀止痛之功效，用于跌打损伤、瘀血内停、扭腰岔气、红肿作痛的治疗。大黄含有蒽醌类有效成分，本文采用水解的方法，采用HPLC法同时测定大黄酸、大黄素、大黄酚的含量，方法稳定可靠，可作为该制剂的的质量控制方法应用生产的质量控制，提高药品质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津高效液相色谱仪(LC-20AT泵，SPDM20A检测器，SIL-20A自动进样器，LC-Solu-tion色谱工作站)。

1.2 试药 大黄酸对照品(批号110757-201206，中国药品生物制品检定所)；大黄素对照品(批号110756-201210，中国药品生物制品检定所)；大黄酚对照品(批号110796-201015，中国药品生物制品检定所)；辽源七厘散(批号：20120506、20120610、20120803，哈尔滨三乐生物工程有限公司制药厂)；甲醇为色谱纯；水为纯化水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 将大黄酸、大黄素、大黄酚对照品精密称取适量，配制成分别含大黄酸、大黄素、大黄酚32μg/ml混合对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备 将辽源七厘散称取0.8 g放入锥形瓶中，加甲醇25ml加热回流2h，冷却后用甲醇补足到回流前质量。离心过滤后精密量取滤液10ml放入烧瓶中，加热待溶剂发干后加80ml/L盐酸溶液10ml，经2min超声后加三氯甲烷10ml回流1h，冷却后置入分液漏斗中，取三氯甲烷层，剩余酸液层再用10ml三氯甲烷振摇提取合并三氯甲烷液，将三氯甲烷回收后的残渣用甲醇溶解用10ml量瓶定容，过滤后的溶液待测。

2.3 阴性样品溶液的制备 按照辽源七厘散制备工艺，将去除大黄的其余中药粉碎，然后按照“2.2项”的方法制备阴性样品溶液。

2.4 色谱条件 色谱柱：Luan-C18 (150mm×4.6 mm，5μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(80:20); 测波长：254 nm；进样量：10μl；柱温35℃，理论塔板数以大黄酸峰计算不低于3000。检测三种标准品，色谱峰分离良好。

阴性对照组

混合对照品组(1大黄酸，2大黄素，3大黄酚)

供试样品组(1大黄酸，2大黄素，3大黄酚)

2.5 线性关系考察 精密吸取2.1项下对照品溶液按上述色谱条件分别进样2、4、6、8、10、20μl，记录色谱图。以对照品质量X为横坐标，峰面积y为纵坐标，绘制标准曲线并进行大黄酸、大黄素、大黄酚回归计算，

y=2.66×103X-2.09×103(r=0.9999，n=6)；y=2.68×103X-2.13×103(r=0.9999，n=6) ；y=3.16×103X-1.79×103(r=0.9999，n=6)。结果表明，大黄酸、大黄素、大黄酚质量分别在72.32～1389.7、65.34～1256.1、69.88～1501.6 ng内呈良好线性关系。

2.6 精密度实验 将对照品溶液按上述方法重复检测6次，计算大黄酸、大黄素、大黄酚色谱峰面积的RSD分别为0.29%，0.30%，0.21%。

2.7 稳定性实验 将混合对照品溶液配置后的0、1、2、4、6、12 h后按上述条件测定，大黄酸、大黄素、大黄酚色谱峰面积的RSD分别为0.71%，0.68%，0.79%，表明试验所配置对照品溶液在12h内稳定。

2.8 回收率实验 将三种对照品加入不含大黄的阴性样品中，进行回收率测定分析，计算大黄酸、大黄素、大黄酚平均回收率分别为98.5%，99.4%，98.7%。

2.9 含量测定 按上述条件及提取方法对样品溶液进行测定，计算其含量，结果见表1。

表1 辽源七厘散含量测定结果(mg/g)

3 讨论

辽源七厘散为治疗跌打损伤的中成药，文献报道了该药中红花、大黄、血竭、冰片、儿茶、骨碎补等药味的薄层鉴别，并对红花黄色素A的含量进行了HPLC法测定[2-3]。为了进一步控制和提高辽源七厘散的质量，本文对提取条件进行了摸索，证实甲醇回流-加酸水解-萃取的方法较甲醇、酸水解和超声提取等方法处理样品，提取充分、对大黄有效成分的干扰小。波长扫描发现，三种检测物质在254nm时均能检测并且干扰较少；甲醇-0.1%磷酸溶液作为流动相较单纯甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸溶液、甲醇-醋酸溶液分流三种检测物质较好杂峰较少[4-6]。应用上述条件测定辽源七厘散中含量大黄酸、大黄素、大黄酚含量，其含量平均分别为1.258、1.319、4.297 mg/g。可用于辽源七厘散的生产质量控制。

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会．中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂(第六册)[S]．1993：51．

[2] 赵晓霞，张清波，李慧勇，等．辽源七厘散质量标准研究[J].中国药品标准，2009，10(3)：196-199．

[3] 王立刚，王成凯．辽源七厘散的薄层色谱鉴别[J]．中国健康月刊·B版，2010，11:213-215．

[4] 吴袭．高效液相色谱法测定通经甘露丸中大黄酸、大黄素及大黄酚含量[J]．药物鉴定，2010，19(13)：32-33．

[5] 何素琴，欧阳吉德，肖琳．HPLC法测定胆石通胶囊中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的含量[J]．西北药学杂志，2011，26(3)：180-182．

[6] 祝忠民，卢晓荣．HPLC法同时测定三黄片中4种成分的含量[J]．西北药学杂志，2008，23(5)：300-301．

R284.1

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1007-8517(2014)14-0006-02

2014.05.27)