益母颗粒的质量标准研究

昆明中药厂有限公司，云南 昆明 650228

益母颗粒的质量标准研究

朱敏杨彩春孙蓉*

昆明中药厂有限公司，云南 昆明 650228

目的建立益母颗粒的质量标准。方法采用TLC法对制剂中川芎、当归进行鉴别；用HPLC-ELSD法测定制剂中盐酸水苏碱的含量，采用丙基酰胺键合硅胶柱(AGT Venusil HILIC 柱；4.6×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%冰醋酸(81：19)，流速为1.0ml/min，柱温为25℃，ELSD参数：雾化气体流速2.8L/min，漂移管温度105℃。结果定性鉴别方法能检出当归、川芎，且薄层色谱中阴性无干扰，专属性强；盐酸水苏碱在1.2～6.0μg范围内的自然对数值与峰面积的自然对数值呈良好线性关系，r=0.9994，平均回收率为102.37%，RSD为2.01%。结论该方法简便、准确，重复性好，可用于益母颗粒的质量控制。

益母颗粒；盐酸水苏碱；当归；川芎； HPLC；TLC；质量标准

益母颗粒的处方来源于部颁中药成方制剂第九册(标准号：WS3-B-1812-94)[1]，由益母草、川芎等4味药组成，具有活血调经、行气止痛的功效，用于气滞血瘀，月经不调，痛经，产后淤血腹痛。原标准无定性鉴别和定量检测项，为了更好地控制其质量，本文建立了川芎、当归的薄层色谱鉴别方法，并采用HPLC-ELSD法对益母草中盐酸水苏碱进行含量测定。经试验证明，该方法简便快捷，专属性强，可用于益母颗粒的质量控制。

1 仪器与试剂

高效液相色谱仪(美国Agilent 1200液相色谱仪系统)；Alltech(奥泰)2000增强型(2000ES)ELSD；安捷伦35900E型数模转换器；SK3300LHC超声机(上海科导超声仪器有限公司)。

盐酸水苏碱(批号：110712-201010)、当归对照药材(批号：120927-200411)、川芎对照药材(批号：120918-200406)均购自中国药品生物制品检定所；益母颗粒(昆明中药厂有限公司生产，规格：3g/袋，批号：111111、120401、120402、120403)；乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 当归、川芎的鉴别 取益母颗粒10g，研碎，加乙酸乙酯40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。取当归、川芎对照药材各0.2g，各加乙酸乙酯10ml，同法制成对照药材溶液。另取缺当归阴性样品、缺川芎阴性样品、缺当归和川芎的双阴性对照样品各10g，同供试品制备方法制得阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录 Ⅵ B)试验，吸取供试品溶液10～15μl，对照药材溶液5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(9:1)为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，且缺当归、川芎的双阴性对照样品无干扰。结果见附图1。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：丙基酰胺键合硅胶柱(AGT Venusil HILIC 柱，4.6×250mm，5μm)；流动相：乙腈-0.2%冰醋酸(81∶19)；柱温：25℃；流速：1.0ml/min；ELSD参数：雾化气体流速2.8L/min，漂移管温度105℃。进样量：对照品溶液5μl、10μl，供试品溶液10μl。理论板数以盐酸水苏碱峰计算应不低于3000。

2.2.2 对照品溶液的制备 取盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1ml含0.3mg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 取益母颗粒适量，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率180W，频率35kHz)1.5小时，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 专属性试验 取处方中除益母草外的其他药材，按处方剂量及制法和工艺要求制备缺益母草的阴性样品，照含量测定项下供试品溶液的制备方法制成阴性对照样品溶液。

分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl，在色谱条件下进行测定，结果显示，阴性对照溶液中色谱峰对盐酸水苏碱含量测定无干扰。

2.2.5 线性关系考察 分别精密吸取上述盐酸水苏碱对照品溶液2、4、6、8、10μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积的自然对数为纵坐标，以进样量的自然对数为横坐标作线性回归，绘制标准曲线，得回归方程： Y=1.6726X+6.8279(r=0.9994)，结果表明，盐酸水苏碱在1.2～6.0μg范围内的自然对数值与峰面积的自然对数值呈良好线性关系。

2.2.6 精密度试验 分别精密吸取同一盐酸水苏碱对照品溶液各10?l，按测定方法重复进样8次，测定峰面积值。RSD为0.98%。

2.2.7 稳定性试验 取同一供试品(批号：111111)溶液，分别于0h、2h、4h、8h、12h各进样10μl，按上述色谱条件进行测定，结果5次盐酸水苏碱峰面积值的RSD=2.615%，表明供试品溶液在10小时内稳定。

2.2.8 重复性试验 取批号为111111的益母颗粒6份，按供试品制备方法，平行制备6份，依法测定盐酸水苏碱含量，盐酸水苏碱含量分别为4.3067、4.3476、4.5227、4.5422、4.5366、4.5686mg·g,平均值为4.4707mg·g，RSD为2.53%(n=6)。

2.2.9 加样回收率试验 取已知含量的益母颗粒(批号：111111，盐酸水苏碱含量：4.4707mg/g)样品6份，每份约0.5g，精密称定，分别精密加入盐酸水苏碱对照品，按2.2.3项下的方法制备供试品溶液，测定盐酸水苏碱含量，计算回收率，结果(见表1)表明，本法有良好的回收率。

表1 加样回收率试验结果

2.2.10 样品测定 取3个批号的益母颗粒样品，分别按2.2.3项下方法制备供试品溶液，测定盐酸水苏碱含量，结果见表2。

表2 益母颗粒盐酸水苏碱含量测定结果

3 讨论

3.1 当归、川芎的薄层鉴别，曾参照《中国药典》项下当归、川芎[2]的鉴别方法试验，经过试验比较，提取溶剂选用乙酸乙酯比选用乙醚提取的效果好，斑点更清晰。从安全、环保方面考虑，药典方法中的展开剂正己烷-乙酸乙酯(4:1)调整为毒性较小环己烷-乙酸乙酯(9∶1)点板，效果好且缺当归、川芎的阴性没有干扰，专属性强，特征斑点明显，故采用。

3.2 曾进行木香薄层鉴别试验，采用石油醚(60～90℃)、乙酸乙酯、乙醇等不同提取溶剂提取制备供试品；以石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯(9:1)、环己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至显色清楚。试验结果：对照药材色谱显一蓝色主斑点，供试品色谱中均未检视到与对照药材相应的蓝色主斑点。

3.3 曾参照文献[3]，选择高效液相法-紫外检测器进行盐酸水苏碱的含量测定研究，测定波长：192nm，流速：1.000ml/min，柱温：25℃，流动相曾试过：乙腈-水(90∶10)、甲醇-水(90∶10)、乙腈-0.2%乙酸(80∶20)、乙腈-0.2%冰醋酸(80∶20)，结果采用乙腈-0.2冰醋酸(80∶20)分离度较好，但由于重复性试验结果较差(RSD=5.7%)，故未采用。

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会．中华人民共和国卫生部药品标准：中药成方制剂第九册[S]．北京：中华人民共和国卫生部药典委员会，1994：157．

[2] 国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京：中国医药科技出版社，2010．

[3] 李政海，苏作林，廖展苇，等．HPLC法测定益母草颗粒(无蔗糖型)中盐酸水苏碱的含量 [J]．中国医药导报，2011，8(26)：70-72．

朱敏，男，工程师，研究方向：中药质量控制。E-mail:darkuyzhu@sina.com。

孙蓉，女，高级工程师，研究方向：中药制剂工艺及质量控制。E-mail:sunrong09@hotmail.com。

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1007-8517(2014)05-0023-02

2013.12.20)