乌司他丁对急性重症胰腺炎大鼠血清TNF-α及IL-1β水平的影响

山西太原西山煤电集团职工总医院 普外科 山西 太原 030053

乌司他丁对急性重症胰腺炎大鼠血清TNF-α及IL-1β水平的影响

张叶锋

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目的：探讨乌司他丁对重症胰腺炎大鼠TNF-α和IL-1β水平的影响。方法胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠制作大鼠SAP模型, wistar大鼠60分为3组， 乌司他丁治疗组，重症胰腺炎(SAP)组，对照(NC)组，每组20只。术后6h对各组大鼠行血清淀粉酶、TNF-α及IL-1β的检测，并取各组大鼠胰腺组织标本行病理学观察。结果乌司他丁治疗组血清淀粉酶、TNF-α及IL-1β较SAP组明显降低，胰腺组织坏死程度减轻(P<0.05)。结论乌司他丁可调节细胞因子水平，改善胰腺组织微循环，减轻全身炎症反应，对SAP有治疗作用。

；乌司他丁；胰腺炎；细胞因子

急性重症胰腺炎(SAP)是一种起病急、进展快、并发症多的急腹症。其发病机制尚未完全明确，但目前随着研究的不断深入，细胞因子及炎症介质在SAP致病中的作用越来越受到人们的关注。乌司他丁是属蛋白酶抑制剂，具有抑制胰蛋白酶等各种胰酶活性的作用，减轻炎症反应。在急性重症胰腺炎时，可以抑制胰腺的分泌，减少胰液的对腹腔脏器的炎症，改善全身微循环障碍，从而达到对急性胰腺炎的治疗作用。本实验主要探讨乌司他丁在SAP时对细胞因子的调节作用。

1.材料与方法

1.1 实验动物及分组：雄性wistar大鼠90只，体重约200g左右。随机分为3组，每组30只。SAP组为A组，对照组(NC)为B组，乌司他丁组为C组。

1.2 主要试剂及仪器：5%牛磺胆酸钠，TNF-α和IL-1β试剂盒。乌司他丁(10万单位)

1.3 实验方法及过程：大鼠术前12h禁食，自由饮水。A组：1%戊巴比妥钠(30mg/kg)进行麻醉，消毒上腹部，正中切口入腹，然后微量输液泵胰胆管逆行以0.1cm/min速度恒速泵入5%牛磺胆酸钠(0.1ml/kg)造模，注射完毕指压穿刺点，查无渗漏，缝合腹壁，关腹前腹腔注射0.5ml生理盐水。B组：仅做剖腹术，轻轻翻动胰腺组织。C组：造模后，乌司他丁5万单位皮下注射。

1.4 术后处理及观察指标：造模6h后各大鼠麻醉后剖腹，腹主动脉取血,迅速离心(2000r/min,4min),取上清液于-20℃冰箱内冷冻，放免法测TNF-α及IL-1β和血清淀粉酶，术后12 h处同时取全部胰腺组织用10%福尔马林固定，石蜡包埋，行HE染色，光镜下观察各组胰腺组织的病理变化，以Kusske等[1]方法将其分级评分，由病理科医师专人完成。

1.5 统计学处理：所有数据应用SPSS15.0统计软件处理，多组间比较采用方差分析、q检验,P﹤0.05为有统计学意义。

2.结果

2.1 检测结果：见表1。

表1 各组大鼠血清淀粉酶、TNF-α及IL-1β的含量和病理学评分

血清淀粉酶、胰腺组织病理评分是反映胰腺组织损伤程度较客观的指标,表1显示：SAP 组各项指标明显高于对照组。乌司他丁组各项指标较低低,但高于对照组(P<0.05)，且TNF-α，IL-1β的数值较SAP 组偏低，但明显高于对照组(P<0.05)。

3.讨论

SAP发病机制目前主要有胰腺微循环障碍，白细胞依赖性全身炎症反应和胰蛋白酶的激活。但近年来，炎症介质学说的提出，使SAP的发展机制从微观上有了进一步的了解，在临床治疗方面有着新的指导意义。在急性重症胰腺炎时，体内各种细胞因子启动，促使全身炎症反应的发生，加快急性胰腺炎的病情发展。主要细胞因子有IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β等。

急性胰腺炎(AP)为胰腺自身消化性疾病，少部分轻症急性胰腺炎发展为SAP，其最终结果是胰腺局部渗出和全身炎症发应的发生，这可能与炎症介质过度释放有关[2]。AP时胰腺腺泡细胞的损伤，引发活性胰酶的释放和单核巨噬细胞的激活，导致循环内单核细胞和中性粒细胞(PMN) 游出、激活，而PMN又刺激破坏性炎症介质的释放，同时各种炎症介质被吸收入血，损伤腹腔脏器组织结构的变化，引起各个脏器功能的不全，从而导致全身炎症反应(S IRS) ，甚至发生多器官功能障碍( MODS) 。

TNF-α又称恶质素, 主要由活化的单核- 巨噬细胞产生, 其通过膜结合受体作用，在天然免疫和特异性免疫之间起桥梁作用, 但又是特异性免疫和炎症反应的重要介质。在调节机体免疫功能和代谢方面有重要作用。SAP与TNF-α水平的关系业已证实, TNF-α是SAP最早升高的炎症介质，SAP发病期间, TNF-α可以刺激IL-6、IL-8大量释放外,还能刺激几乎所有严重败血症中有害物质的产生。 TNF-α的大量的释放是导致SAP的发生重要因素之一，可以引发细胞因子的瀑布效应，其对细胞表面粘附分子有上调作用，并调节细胞的趋化功能及其相互作用，从而使毛细血管通透性增加,血浆外渗，引起各个脏器不同程度的缺血。TNF-α是表现最活跃的细胞因子,其过度的释放对机体具有严重的毒性作用，从而诱发胰腺腺泡细胞的凋亡，加重胰腺组织的坏死。本实验结果也进一步证明 , 在SAP时,与胰腺组织的坏死程度有正相关作用，TNF-α含量变化又与血清淀粉每的活性变化呈平行趋势 。

IL-1β也是最早释放的炎性介质之一，具有强烈的生物学活性。主要由胰腺内浸润的中性粒细胞和巨噬细胞产生, 直接可以诱导TNF-α及的分泌, 并和TNF-α相互作用，具有协同作用，在全身炎症反应过程中，并能诱导内皮细胞和中性粒细胞的表达，加快白细胞在病变胰腺组织的聚集,加快胰腺腺泡细胞凋亡, 促进内毒素产生及肠道细菌移位。在实验中观察到IL-1β随胰腺组织的病变程度的减轻，检测到的数值明显下降，并有统计学意义，说明IL-1β在SAP时，与急性胰腺炎的进展有一定的正相关性，乌司他丁对SAP时，IL-1β的释放有抑制作用。

在SAP 时，TNF -α，IL -1β等细胞因子的大量释放，诱发急性期反应，催化和放大炎性反应，造成腹腔脏器组织细胞的损伤。本实验示：SAP组TNF -α，IL-1β指标明显高于对照组，与Norman等[3]的研究结果符合。而乌司他丁组TNF -α，IL-1β水平较SAP组明显降低，说明乌司他丁在抑制胰蛋白酶等各种胰酶活性的作用，减轻炎症反应的同时可以调节TNF -α，IL -1β的水平。但乌司他丁调节细胞因子(TNF-α、IL-1β)的具体作用机制有待进一步研究。

[1]Kusske AM, Rongione AJ, Ashley SW, et al.Interleukin210 p revents death in lethal necrotizing pancretitis in mice [ J ].Surgery,1996, 120 (2) : 284-288

[2]孙大裕，金忱，钟良，等.大鼠急性胰腺炎时血液流变学和血流动力学改变的意义[J] 中华消化杂志，2004,22：667-670.

[3]Wilson PG，manji M，Neoptolemos JP.Acute pancreatitis as amodel of sepsis [J].Amntimicrob Chemother，2012，41(Suppla)：51-63

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1009-6019(2014)12-0024-01