HPLC法测定胃健宁胶囊中和厚朴酚及厚朴酚的含量

叶锦雄，刘柳毅

(1.广州市东升医院，广东 广州 510140;2.广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006)

胃健宁胶囊由厚朴、木香、砂仁、佛手、香附(醋制)、大腹皮等药组成。厚朴是处方中的君药，故对厚朴中的和厚朴酚与厚朴酚进行含量测定，现将结果报道如下:

1 仪器与试药

1.1 仪器 日本岛津:SPD－10A检测器、LC－10AT泵、N2000色谱工作站，AUW120D电子天平。

1.2 试剂 乙腈(分析纯，批号:20121204，江苏强盛化工有限公司);甲醇(分析纯，批号:20120102，天津市百世化工有限公司)。厚朴酚对照品(批号:110729－201210，中国药品生物制品检定所);和厚朴酚对照品(批号:110756－201210，中国药品生物制品检定所)。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称取和厚朴酚对照品10 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为A液;另精密称取厚朴酚对照品10 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为B液。分别精密吸取A液和B液各1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2 供试品溶液的制备 取胃健宁胶囊20粒，除去囊壳，研细，取粉末约4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入氯仿50 mL，密塞，称定重量，超声处理1.5 h，称定重量，用氯仿补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移到5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 缺厚朴阴性溶液制备 取不含厚朴的全部处方药材，按胃健宁胶囊工艺及上述供试品溶液的方法制备阴性对照液。

3 测定法

3.1 色谱条件 色谱柱:Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相:乙腈 －水 －冰醋酸(60∶40∶1)(V∶V∶V)，流速:1.000 mL·min－1，检测波长:294 nm，进样量:10 μL。

3.2 色谱条件与系统适用性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，注入色谱仪，测定，记录色谱图，结果见图1～3。由图可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，有相同保留时间的色谱峰，阴性试验无干扰。保留时间:厚朴酚峰约17 min，和厚朴酚峰约7 min，分离度大于1.5，阴性对照溶液无干扰。

图1 对照品色谱图

图2 供试品色谱图

图3 阴性对照品色谱图

3.3 线性实验 精密吸取厚朴酚及和厚朴酚对照品液各 1、2、4、8、16 μL，注入色谱仪，记录色谱图，以峰面积积分值(Y)对对照品量(X)进行处理，和厚朴酚回归方程Y=6.45×105X－4.56×103，r=0.9996(n=5);厚朴酚回归方程Y=1.40×106X－1.67×103，r=0.9998(n=5)。结果表明，和厚朴酚在0.02～0.32 μg范围内线性关系良好;厚朴酚在0.0196～0.3136 μg范围内线性关系良好。

3.4 精密度试验 精密进样同一对照品溶液20 μL，连续测定5次，厚朴酚的平均峰面积为62997.93，RSD为1.61%，和厚朴酚的平均峰面积为61100.9024，RSD为1.10%，结果表明该方法的精密度良好。

3.5 稳定性试验 取样品适量，照含量测定项下方法测定，于配制后0、2、4、8、12 h，分别取样测定其含量。和厚朴酚的RSD为0.88% ，厚朴酚的RSD为1.96%，结果表明被测溶液的稳定性良好。

3.6 重复性试验 取样品6份，按含量测定项下方法分别测定，6份样品实验和厚朴酚的峰面积平均的RSD为2.6%，厚朴酚的峰面积平均值的RSD为2.1%。结果表明重复性良好。

3.7 加样回收率试验 取重复性试验的同一批号(120406)样品20粒，除去外壳，研细，取粉末约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入一定量的和厚朴酚对照品及厚朴酚对照品，按供试品溶液的制备方法共制备3份，每份测定3次，计算回收率。和厚朴酚的平均回收率为96.58%，RSD为1.78%，厚朴酚的平均回收率为97.29%，RSD为1.39%，结果表明，含量回收率良好，见表1。

表1 胃健宁胶囊中和厚朴酚及厚朴酚的加样回收率试验结果(n=9)

续表1:

3.8 样品含量测定 取3批样品(批号:120406、120408、120410)，照“2.2”项下的方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪测定，结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=3)

由3批样品含量测定的结果可知，和厚朴酚及厚朴酚的重量平均值为每粒3.49 μg，考虑到生产中药材质量、制剂生产、贮藏等因素影响，暂定其制剂中和厚朴酚及厚朴酚含量不得低于每粒3 μg。

4 讨论

参照《中国药典》2010年版(一部)厚朴的含量测定方法［1］选择流动相甲醇 － 水(78∶22)进样，结果阴性对照有干扰。参考相关文献［2～6］采用流动相为乙腈－水－冰醋酸(60∶40∶1)进样，试验结果表明，在此条件下和厚朴酚、厚朴酚的保留时间适宜，与相邻的色谱峰可保持良好的分离度，适合对和厚朴酚、厚朴酚的含量测定。

制备供试品溶液采用甲醇提取样品时干扰较多，最后确定用三氯甲烷提取蒸干，残渣用甲醇溶解，分离效果较好。该方法结果准确可靠，重现性好，可用于胃健宁胶囊中和厚朴酚及厚朴酚的含量测定。本研究的不足之处就是待测成分含量较低，所得结果相对误差偏大。由于处方组成药材较多，各种成分含量均较低，且干扰成分多，但该方法对本复方中药制剂的质量控制仍具有重要意义。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:235.

［2］孟蕾蕾，李梦，王国平.HPLC法测定藿香正气胶囊中厚朴酚与和厚朴酚的含量［J］.齐鲁药事，2007，26(8):466－467.

［3］魏刚.高效液相色谱法测定藿香正气丸中厚朴酚与和厚朴酚的含量［J］.湖北中医杂志，2011，33(2):70－71.

［4］魏蓉，项菲.高效液相色谱法测定舒肝快胃丸中厚朴酚与和厚朴酚的含量［J］.中南药学，2011，9(11):847.850.

［5］高辉，王雪萍.厚朴温中丸中厚朴酚与和厚朴酚含量测定的研究［J］.中华中医药学刊，2008，26(2):425－426.

［6］赵彩霞，闫辉.麻仁丸中厚朴酚与和厚朴酚测定方法的研究［J］.湖南中医药大学学报，2012，32(6):15－17.