静注人免疫球蛋白(pH4)的稳定性研究

黄军民 梁小明 何淑琴 张丽铃 黄璠

静注人免疫球蛋白(pH4)的稳定性研究

黄军民 梁小明 何淑琴 张丽铃 黄璠

目的 考察静注人免疫球蛋白(pH4)的稳定性。方法 对三批静注人免疫球蛋白(pH4)进行2～8℃条件下为期3年的长期稳定性试验, 对考察的制品依照《中华人民共和国药典》2005年版二部中附录XIX C药物稳定性试验指导原则及《中华人民共和国药典》2010年版二部中附录XIX C原料药及药物制剂稳定性试验指导原则进行检测。结果 在长期稳定性试验过程中, 可见异物, 纯度、pH值、IgG含量、蛋白质含量、分子大小分布等均无明显的变化趋势。结论 静注人免疫球蛋白(pH4)稳定性良好, 在进行3年长期稳定性试验后, 其质量仍符合《中华人民共和国药典》2010年版三部的要求。

静注人免疫球蛋白(pH4)；质量；稳定性

以健康人血浆为原料, 采用先进的生物工程技术或分离技术制备的静注人免疫球蛋白, 是治疗原发性免疫缺乏症、继发性免疫缺陷病和自身免疫性疾病(如川崎病、特发性血小板减少性紫癜)的有效药物, 有着其它药品不可替代的作用［1］。近年来, 随着静注人免疫球蛋白的需求量不断增加,其稳定性也倍受各制药企业及广大用户的关注。本公司生产规格为5% 1.25g/25 ml静注人免疫球蛋白(pH4)的液体剂型已有多年, 原批准的有效期为2年。为确定静注人免疫球蛋白(pH4)的稳定性, 保证制品在最有效情况下使用, 实验中采用长期稳定性试验对其进行了全面质量检测, 以观察制品的各项质量指标的变化情况, 为延长其有效期提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 材料 3批静注人免疫球蛋白(pH4)制品, 为江西博雅生物制药股份有限公司于2009年生产。白喉抗体诊断试剂由中国食品药品检定研究院提供, 抗-HBs标准品由中国食品药品检定研究院提供, 抗-HBs检测试剂盒购买于北京北方生物技术研究所, 其他试剂均为国产分析纯。

1.2 主要仪器 智能放免γ测量仪(SN-695A)购自上海核所日环光电仪器有限公司；高效液相色谱仪购自日本岛津公司；凯氏定氮仪购自 Foss公司；全自动电泳仪(Genios)购于INTERLAB公司；澄明度检测仪购于天津大学精密仪器厂。

1.3 方法

1.3.1 稳定性试验 抽取的3批静注人免疫球蛋白(pH4)制品, 在保存前按照2005版《中国药典》三部标准进行全面质量检测。再取足够量样品置于2～8℃条件下进行为期3年(2009年～2011年)的长期试验。按长期试验 0、3、6、9、12、18、24、36个月试验点对样品进行质量检测。其中第0、12、24和36个月为所有项目全部进行质量检查, 其他试验点为重点项目检测。第0个月的首次全检项目完全参照《中华人民共和国药典》2005年版三部《静注人免疫球蛋白(pH4)》中成品检定的所有检测项目, 第12、24和36个月全检项目完全参照《中华人民共和国药典》2010年版三部《静注人免疫球蛋白(pH4)》中成品检定的所有检测项目。重点检测项目包括外观、可见异物、pH值、IgG含量(因2010版药典中无IgG含量检测项目, 故第12个月将此项检测项目改为蛋白质含量)和无菌检查等5项质量指标。

1.3.2 IgG含量检测 采用紫外-可见分光光度法(见2005版《中国药典》三部附录Ⅺ K)。

1.3.3 蛋白质含量检测 采用凯氏定氮法(见2010版《中国药典》三部附录ⅥB第一法)。结果计算：蛋白质含量(g/L) =(总氮-非蛋白氮)×6.25×10-1。

1.3.4 pH值检测 将待检品蛋白质用生理氯化钠溶液稀释至质量浓度为10 g/L, 第0个月至第9个月检测按2005版《中国药典》三部附录VA方法测定其pH值；第12个月至第36个月检测按2010版《中国药典》三部附录VA方法测定其pH值。

1.3.5 其他项目的检测 外观、可见异物、无菌检查、分子大小分布、PKA、抗-HBs、白喉抗体、抗补体活性、异常毒性检查、热稳定性试验、热原检查等质量指标均采用《中国药典》三部收录的标准分析方法。

2 结果与分析

2.1 重点检测项目的稳定性试验结果 3批静注人免疫球蛋白(pH4)制品在2～8℃条件下保存3年, 重点考察项目中的外观检查、无菌检查、可见异物在长期稳定性试验期间无任何变化, 且均符合《中国药典》的规定要求。用t检验对保存前及保存第36个月检测的pH值、蛋白质含量、IgG含量进行分析, 三批产品的pH值从0个月～36个月保持在4.0～4.2；蛋白质含量保持在55g/L～59g/L；从0个月～9个月3批产品的IgG含量维持在4.9%～5.3%, 3项指标的数据变化无统计学意义(P＞0.05)。因2010版药典中无IgG含量检测项目, 故第12个月将IgG含量检测项目改为蛋白质含量检测,蛋白质含量一般情况下会高于IgG含量0.5%左右。

2.2 首检与末检的结果对比 将0个月时全项检定(首检)结果与2～8℃条件下保存36个月后的检测(末检)结果进行对比, 外观、可见异物、装量、热稳定性、无菌检查、异常毒性检查、热原检查等检测项目无任何变化, 且均符合《中国药典》的规定要求。从表1可知：pH值、PKA含量、抗补体活性这3项指标的数据变化差异无统计学意义, 3批制品的纯度、分子大小分布、每瓶抗-HBs的总效价均有下降的趋势, 而糖含量有微小的上升, 每瓶白喉抗体总效价却有明显的增加, 但仍符合《中国药典》的要求标准。

表1 首次检测与末次检测的结果对比

3 讨论

实验结果显示, 静注人免疫球蛋白(pH4) 具有良好的稳定性, 在进行3年长期稳定性试验后, 其各项质量指标仍符合《中华人民共和国药典》2010年版三部的要求。3批制品的分子大小分布在2～8℃条件下保存3年后均有缓慢的下降趋势, 分析图谱发现, 该下降趋势主要是因为部分单体裂解成小分子杂蛋白所致。第36个月, 制品中的IgG单体及二聚体含量之和为98.2%, 优于药典标准的IgG单体及二聚体含量之和 96%［2］, 因此, 产品在运输及贮存过程符合 2～8℃冷链保藏的要求时, 36个月内制品是安全、有效。

［1］ 周海云.静注人免疫球蛋白的研究与应用.微生物学免疫学进展.2009,37(4):70-73.

［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典.三部.2010版.北京:中国医药科技出版社,2010:233.

Study on the stability of the human immunoglobulin(pH4) for intravenous injection

HUANG Jun-min, LIANG Xiao-ming, HE Shu-qin, et al. Jiangxi Boya Biopharmaceutical Limited by Share Ltd, Fuzhou, 344000, China

Objective Investigate the stability of human immunoglobulin (pH4) for intravenous injection.Methods The three batch of human immunoglobulin(pH4) for intravenous injection were carried on the long term stability test of 3 years in 2～8℃.Tested the inspection product in accordance with the “drug stability test guiding principle” of the Chinese Pharmacopeia(VolumeⅡ, 2005 edition)in appendix XIX C and “stability principle of raw material medicine and drug " of the Chinese Pharmacopeia(VolumeⅡ, 2010 edition)in appendix XIX C.Results In the long term stability of the test process, visible foreign matter, purity, pH value, IgG content, protein content, molecular size distribution have no obvious variation trend.Conclusion Human immunoglobulin (pH4) for intravenous injection has good stability, after 3 years of long term stability test, the quality is still in accordance with the requirements of Chinese Pharmacopeia(VolumeⅢ, 2010 edition).

Human immunoglobulin (pH4) for intravenous injection; Quality; Stability

344000 抚州, 江西博雅生物制药股份有限公司