一株转基因兔源大肠杆菌的分离鉴定与防治

董真　金铎　林家琪　展天松　顾敏　焦库华　王彦红　刘文博

摘要：从扬州大学转基因实验兔中分离到一株革兰氏阴性杆菌，经鉴别培养和生化特性鉴定，确定为大肠杆菌，并进行了药敏试验。药敏试验结果表明，该菌株对氯霉素和卡那霉素等抗生素高度敏感，对复方新诺明和诺氟沙星等抗生素不敏感。

关键词：大肠杆菌；分离；鉴定；防治

中图分类号：S858.291文献标识码：B文章编号：1007-273X（2014）05-0005-02

兔大肠杆菌是大肠杆菌中某些致病性菌株引起的兔感染性疾病的总称。近年来，随着养兔业的发展，兔大肠杆菌病已成为危害养兔业的主要传染病之一。该病是由致病性大肠杆菌及其毒素引起的一种暴发性、死亡率很高的仔兔肠道性传染病[1]。该病一年四季均可发生，阴雨潮湿和秋末春初等气候多变季节多发，多侵害断奶前后幼兔，发病率和死亡率较高，成年兔也有发生[2]。而转基因动物由于饲养条件好，该类疾病未见报道，本文报道扬州大学动物医院就诊的一例转基因兔的大肠杆菌感染，并进行了大肠杆菌分离和鉴定。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1病料来源2014年3月，扬州大学某实验室出现了一只转基因兔异常死亡，死亡前2～3 d表现为腹部臌胀，精神沉郁，食欲减退，粪便细小且两头较尖或成串状，外包透明胶冻状黏液。随后表现为剧烈腹泻，粪便呈稀水样。剖检后发现其喉部和气管有出血点，肺水肿，脾肿大，肠系膜淋巴结水肿，肾脏有点状出血，肠道充气，内有出血点，并伴有水样、胶冻样液体。临床诊断疑为大肠杆菌感染，需进一步进行实验室检测。

1.1.2培养基普通营养琼脂平板、血液琼脂平板、麦康凯平板。

1.1.3生化发酵管葡萄糖、麦芽糖、乳糖、木糖、果糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、硫化氢、尿素。

1.1.4药敏纸片药敏纸片有强力霉素（300 μg/片），庆大霉素（10 μg/片），氯霉素（30 μg/片），链霉素（10 μg/片），痢特灵（300 μg/片），丁胺卡那霉素（30 μg/片），诺氟沙星（10 μg/片），卡那霉素（30 μg/片），复方新诺明（23.75 μg/片）。药敏纸片均购于杭州微生物试剂有限公司，操作方法和判定标准参照公司操作方法与标准。

1.2试验方法

1.2.1分离培养取死亡病兔的心、肝、脾、肺及肾脏内容物，分别划线接种于普通营养琼脂平板、血液琼脂平板、麦康凯平板，37 ℃恒温培养24 h观察并记录结果。将纯化后的细菌涂片，革兰氏染色后镜检。

1.2.2生化鉴定试验将纯化后的菌落接种于各生化发酵管中，37 ℃培养 5～7 d，观察并记录结果。同时按常规实验方法进行IMVIC试验。

1.2.3药敏试验采用纸片琼脂扩散法，将纯化后的细菌以划线方式均匀致密涂布于普通平皿培养基上，取药敏片贴到平皿培养基表面（为了使能准确的观察结果，要将药敏片能有规律的分布于平皿培养基上），将平皿培养基置于37 ℃温箱中培养24 h后，观察并记录结果。

2结果与分析

2.1细菌分离及培养特性

该菌呈短杆状，两端钝圆，革兰氏染色呈阴性。兼性厌氧，在普通营养琼脂平板上表现为乳白色且表面光滑的圆形菌落，菌落边缘整齐，表面和背面一致。在血平板中呈灰白色，表面光滑。在麦康凯平板中呈粉红色。

摘要：从扬州大学转基因实验兔中分离到一株革兰氏阴性杆菌，经鉴别培养和生化特性鉴定，确定为大肠杆菌，并进行了药敏试验。药敏试验结果表明，该菌株对氯霉素和卡那霉素等抗生素高度敏感，对复方新诺明和诺氟沙星等抗生素不敏感。

关键词：大肠杆菌；分离；鉴定；防治

中图分类号：S858.291文献标识码：B文章编号：1007-273X（2014）05-0005-02

兔大肠杆菌是大肠杆菌中某些致病性菌株引起的兔感染性疾病的总称。近年来，随着养兔业的发展，兔大肠杆菌病已成为危害养兔业的主要传染病之一。该病是由致病性大肠杆菌及其毒素引起的一种暴发性、死亡率很高的仔兔肠道性传染病[1]。该病一年四季均可发生，阴雨潮湿和秋末春初等气候多变季节多发，多侵害断奶前后幼兔，发病率和死亡率较高，成年兔也有发生[2]。而转基因动物由于饲养条件好，该类疾病未见报道，本文报道扬州大学动物医院就诊的一例转基因兔的大肠杆菌感染，并进行了大肠杆菌分离和鉴定。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1病料来源2014年3月，扬州大学某实验室出现了一只转基因兔异常死亡，死亡前2～3 d表现为腹部臌胀，精神沉郁，食欲减退，粪便细小且两头较尖或成串状，外包透明胶冻状黏液。随后表现为剧烈腹泻，粪便呈稀水样。剖检后发现其喉部和气管有出血点，肺水肿，脾肿大，肠系膜淋巴结水肿，肾脏有点状出血，肠道充气，内有出血点，并伴有水样、胶冻样液体。临床诊断疑为大肠杆菌感染，需进一步进行实验室检测。

1.1.2培养基普通营养琼脂平板、血液琼脂平板、麦康凯平板。

1.1.3生化发酵管葡萄糖、麦芽糖、乳糖、木糖、果糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、硫化氢、尿素。

1.1.4药敏纸片药敏纸片有强力霉素（300 μg/片），庆大霉素（10 μg/片），氯霉素（30 μg/片），链霉素（10 μg/片），痢特灵（300 μg/片），丁胺卡那霉素（30 μg/片），诺氟沙星（10 μg/片），卡那霉素（30 μg/片），复方新诺明（23.75 μg/片）。药敏纸片均购于杭州微生物试剂有限公司，操作方法和判定标准参照公司操作方法与标准。

1.2试验方法

1.2.1分离培养取死亡病兔的心、肝、脾、肺及肾脏内容物，分别划线接种于普通营养琼脂平板、血液琼脂平板、麦康凯平板，37 ℃恒温培养24 h观察并记录结果。将纯化后的细菌涂片，革兰氏染色后镜检。

1.2.2生化鉴定试验将纯化后的菌落接种于各生化发酵管中，37 ℃培养 5～7 d，观察并记录结果。同时按常规实验方法进行IMVIC试验。

1.2.3药敏试验采用纸片琼脂扩散法，将纯化后的细菌以划线方式均匀致密涂布于普通平皿培养基上，取药敏片贴到平皿培养基表面（为了使能准确的观察结果，要将药敏片能有规律的分布于平皿培养基上），将平皿培养基置于37 ℃温箱中培养24 h后，观察并记录结果。

2结果与分析

2.1细菌分离及培养特性

该菌呈短杆状，两端钝圆，革兰氏染色呈阴性。兼性厌氧，在普通营养琼脂平板上表现为乳白色且表面光滑的圆形菌落，菌落边缘整齐，表面和背面一致。在血平板中呈灰白色，表面光滑。在麦康凯平板中呈粉红色。

摘要：从扬州大学转基因实验兔中分离到一株革兰氏阴性杆菌，经鉴别培养和生化特性鉴定，确定为大肠杆菌，并进行了药敏试验。药敏试验结果表明，该菌株对氯霉素和卡那霉素等抗生素高度敏感，对复方新诺明和诺氟沙星等抗生素不敏感。

关键词：大肠杆菌；分离；鉴定；防治

中图分类号：S858.291文献标识码：B文章编号：1007-273X（2014）05-0005-02

兔大肠杆菌是大肠杆菌中某些致病性菌株引起的兔感染性疾病的总称。近年来，随着养兔业的发展，兔大肠杆菌病已成为危害养兔业的主要传染病之一。该病是由致病性大肠杆菌及其毒素引起的一种暴发性、死亡率很高的仔兔肠道性传染病[1]。该病一年四季均可发生，阴雨潮湿和秋末春初等气候多变季节多发，多侵害断奶前后幼兔，发病率和死亡率较高，成年兔也有发生[2]。而转基因动物由于饲养条件好，该类疾病未见报道，本文报道扬州大学动物医院就诊的一例转基因兔的大肠杆菌感染，并进行了大肠杆菌分离和鉴定。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1病料来源2014年3月，扬州大学某实验室出现了一只转基因兔异常死亡，死亡前2～3 d表现为腹部臌胀，精神沉郁，食欲减退，粪便细小且两头较尖或成串状，外包透明胶冻状黏液。随后表现为剧烈腹泻，粪便呈稀水样。剖检后发现其喉部和气管有出血点，肺水肿，脾肿大，肠系膜淋巴结水肿，肾脏有点状出血，肠道充气，内有出血点，并伴有水样、胶冻样液体。临床诊断疑为大肠杆菌感染，需进一步进行实验室检测。

1.1.2培养基普通营养琼脂平板、血液琼脂平板、麦康凯平板。

1.1.3生化发酵管葡萄糖、麦芽糖、乳糖、木糖、果糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、硫化氢、尿素。

1.1.4药敏纸片药敏纸片有强力霉素（300 μg/片），庆大霉素（10 μg/片），氯霉素（30 μg/片），链霉素（10 μg/片），痢特灵（300 μg/片），丁胺卡那霉素（30 μg/片），诺氟沙星（10 μg/片），卡那霉素（30 μg/片），复方新诺明（23.75 μg/片）。药敏纸片均购于杭州微生物试剂有限公司，操作方法和判定标准参照公司操作方法与标准。

1.2试验方法

1.2.1分离培养取死亡病兔的心、肝、脾、肺及肾脏内容物，分别划线接种于普通营养琼脂平板、血液琼脂平板、麦康凯平板，37 ℃恒温培养24 h观察并记录结果。将纯化后的细菌涂片，革兰氏染色后镜检。

1.2.2生化鉴定试验将纯化后的菌落接种于各生化发酵管中，37 ℃培养 5～7 d，观察并记录结果。同时按常规实验方法进行IMVIC试验。

1.2.3药敏试验采用纸片琼脂扩散法，将纯化后的细菌以划线方式均匀致密涂布于普通平皿培养基上，取药敏片贴到平皿培养基表面（为了使能准确的观察结果，要将药敏片能有规律的分布于平皿培养基上），将平皿培养基置于37 ℃温箱中培养24 h后，观察并记录结果。

2结果与分析

2.1细菌分离及培养特性

该菌呈短杆状，两端钝圆，革兰氏染色呈阴性。兼性厌氧，在普通营养琼脂平板上表现为乳白色且表面光滑的圆形菌落，菌落边缘整齐，表面和背面一致。在血平板中呈灰白色，表面光滑。在麦康凯平板中呈粉红色。