五个天祝白牦牛群体近交程度分析

张浩

摘要：为了研究天祝白牦牛群体的近交程度，以5个天祝白牦牛群体共计598头牦牛为研究对象，借助FAO推荐的17个微卫星座位对群体的近交程度做了评估，结果在JDL、LZH两个群体检测到了一定程度的近交，但差异不显著（P>0.05），而在其他群体显著（0.01

关键词：牦牛；微卫星DNA；近交分析

中图分类号：S814.8文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2014）05-0007-03

微卫星DNA广泛分布在各种真核生物基因组中，多态性丰富[1，2]，其遵循孟德尔遗传规律，呈共显性遗传[3]，广泛应用于动植物群体遗传多样性的检测、群体遗传结构的评估以及群体内个体的识别、亲权关系的鉴定，也可应用于分析动物群体内近交程度，用于群体内近交系数的计算。天祝白牦牛是中国稀有而珍贵的地方类群。天祝白牦牛保种采用活体保种的方式，公母羊混养，自然交配，无交配记录，为了分析群体内部遗传的多样化水平，同时也为了搞清其内部是否存在近交，对天祝白牦牛的种质资源进行合理评估，本研究借助FAO推荐的17个微卫星座位来研究5个天祝白牦牛群体内的近交程度，以期为白牦牛资源的保护和利用提供理论依据。

1材料与方法

1.1材料

以甘肃省天祝县5个白牦牛群体JDL、JDW、JZMJ、LZH、WYCH为研究对象，样本容量分别为97、111、134、122、134头，共计598头，来研究天祝白牦牛群体近交程度。牦牛经颈静脉采血，-20 ℃冰箱保存备用。

1.2方法

1.2.1基因组DNA提取及检测酚氯仿抽提法[4]提取全基因组DNA，用灭过菌的双蒸水溶解DNA后，通过ND-1000型紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度，0.5%琼脂糖凝胶电泳检测提取的DNA是否降解。检验合格-20 ℃冰箱保存备用。

1.2.2引物信息采用FAO（http：//dad.fao.org/）推荐的17个牦牛微卫星位点，微卫星位点尽量分布在不同的染色体上。引物在生物工程（北京）有限公司合成，采用PAGE方法纯化。微卫星引物信息见表1。

1.2.3PCR扩增及产物检测PCR扩增反应采用15 μl体系：10×Taq Buffer 1.5 μL，dNTP Mixture（10 mmol/L）1.0 μL，上下游引物（10 pmol/mL）各0.2 μL，DNA模板（25 ng/μL）1.0 μL，Taq Polymerase（5 U/μL）0.3 μL，ddH2O补足至15 μL。Taq Buffer、dNTP Mixture以及Taq Polymerase 等购自天根生化科技（北京）有限公司。

PCR扩增程序：95 ℃预变性5 min；95 ℃变性30 s，退火30 s，72 ℃延伸30 s，35个循环；72 ℃复性10 min。PCR产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测。

PCR产物经2% 琼脂糖凝胶检测，以天根生化科技有限公司产DNA Marker Ⅰ为分子量标准，150 V电泳10 min，通过UV-1000型凝胶成像系统查看PCR扩增效果及条带大小，照相保存。

1.2.5统计分析Fstat 2.9.3软件[5]用以计算群体内的近交系数。

2结果与分析

摘要：为了研究天祝白牦牛群体的近交程度，以5个天祝白牦牛群体共计598头牦牛为研究对象，借助FAO推荐的17个微卫星座位对群体的近交程度做了评估，结果在JDL、LZH两个群体检测到了一定程度的近交，但差异不显著（P>0.05），而在其他群体显著（0.01

关键词：牦牛；微卫星DNA；近交分析

中图分类号：S814.8文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2014）05-0007-03

微卫星DNA广泛分布在各种真核生物基因组中，多态性丰富[1，2]，其遵循孟德尔遗传规律，呈共显性遗传[3]，广泛应用于动植物群体遗传多样性的检测、群体遗传结构的评估以及群体内个体的识别、亲权关系的鉴定，也可应用于分析动物群体内近交程度，用于群体内近交系数的计算。天祝白牦牛是中国稀有而珍贵的地方类群。天祝白牦牛保种采用活体保种的方式，公母羊混养，自然交配，无交配记录，为了分析群体内部遗传的多样化水平，同时也为了搞清其内部是否存在近交，对天祝白牦牛的种质资源进行合理评估，本研究借助FAO推荐的17个微卫星座位来研究5个天祝白牦牛群体内的近交程度，以期为白牦牛资源的保护和利用提供理论依据。

1材料与方法

1.1材料

以甘肃省天祝县5个白牦牛群体JDL、JDW、JZMJ、LZH、WYCH为研究对象，样本容量分别为97、111、134、122、134头，共计598头，来研究天祝白牦牛群体近交程度。牦牛经颈静脉采血，-20 ℃冰箱保存备用。

1.2方法

1.2.1基因组DNA提取及检测酚氯仿抽提法[4]提取全基因组DNA，用灭过菌的双蒸水溶解DNA后，通过ND-1000型紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度，0.5%琼脂糖凝胶电泳检测提取的DNA是否降解。检验合格-20 ℃冰箱保存备用。

1.2.2引物信息采用FAO（http：//dad.fao.org/）推荐的17个牦牛微卫星位点，微卫星位点尽量分布在不同的染色体上。引物在生物工程（北京）有限公司合成，采用PAGE方法纯化。微卫星引物信息见表1。

1.2.3PCR扩增及产物检测PCR扩增反应采用15 μl体系：10×Taq Buffer 1.5 μL，dNTP Mixture（10 mmol/L）1.0 μL，上下游引物（10 pmol/mL）各0.2 μL，DNA模板（25 ng/μL）1.0 μL，Taq Polymerase（5 U/μL）0.3 μL，ddH2O补足至15 μL。Taq Buffer、dNTP Mixture以及Taq Polymerase 等购自天根生化科技（北京）有限公司。

PCR扩增程序：95 ℃预变性5 min；95 ℃变性30 s，退火30 s，72 ℃延伸30 s，35个循环；72 ℃复性10 min。PCR产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测。

PCR产物经2% 琼脂糖凝胶检测，以天根生化科技有限公司产DNA Marker Ⅰ为分子量标准，150 V电泳10 min，通过UV-1000型凝胶成像系统查看PCR扩增效果及条带大小，照相保存。

1.2.5统计分析Fstat 2.9.3软件[5]用以计算群体内的近交系数。

2结果与分析

摘要：为了研究天祝白牦牛群体的近交程度，以5个天祝白牦牛群体共计598头牦牛为研究对象，借助FAO推荐的17个微卫星座位对群体的近交程度做了评估，结果在JDL、LZH两个群体检测到了一定程度的近交，但差异不显著（P>0.05），而在其他群体显著（0.01

关键词：牦牛；微卫星DNA；近交分析

中图分类号：S814.8文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2014）05-0007-03

微卫星DNA广泛分布在各种真核生物基因组中，多态性丰富[1，2]，其遵循孟德尔遗传规律，呈共显性遗传[3]，广泛应用于动植物群体遗传多样性的检测、群体遗传结构的评估以及群体内个体的识别、亲权关系的鉴定，也可应用于分析动物群体内近交程度，用于群体内近交系数的计算。天祝白牦牛是中国稀有而珍贵的地方类群。天祝白牦牛保种采用活体保种的方式，公母羊混养，自然交配，无交配记录，为了分析群体内部遗传的多样化水平，同时也为了搞清其内部是否存在近交，对天祝白牦牛的种质资源进行合理评估，本研究借助FAO推荐的17个微卫星座位来研究5个天祝白牦牛群体内的近交程度，以期为白牦牛资源的保护和利用提供理论依据。

1材料与方法

1.1材料

以甘肃省天祝县5个白牦牛群体JDL、JDW、JZMJ、LZH、WYCH为研究对象，样本容量分别为97、111、134、122、134头，共计598头，来研究天祝白牦牛群体近交程度。牦牛经颈静脉采血，-20 ℃冰箱保存备用。

1.2方法

1.2.1基因组DNA提取及检测酚氯仿抽提法[4]提取全基因组DNA，用灭过菌的双蒸水溶解DNA后，通过ND-1000型紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度，0.5%琼脂糖凝胶电泳检测提取的DNA是否降解。检验合格-20 ℃冰箱保存备用。

1.2.2引物信息采用FAO（http：//dad.fao.org/）推荐的17个牦牛微卫星位点，微卫星位点尽量分布在不同的染色体上。引物在生物工程（北京）有限公司合成，采用PAGE方法纯化。微卫星引物信息见表1。

1.2.3PCR扩增及产物检测PCR扩增反应采用15 μl体系：10×Taq Buffer 1.5 μL，dNTP Mixture（10 mmol/L）1.0 μL，上下游引物（10 pmol/mL）各0.2 μL，DNA模板（25 ng/μL）1.0 μL，Taq Polymerase（5 U/μL）0.3 μL，ddH2O补足至15 μL。Taq Buffer、dNTP Mixture以及Taq Polymerase 等购自天根生化科技（北京）有限公司。

PCR扩增程序：95 ℃预变性5 min；95 ℃变性30 s，退火30 s，72 ℃延伸30 s，35个循环；72 ℃复性10 min。PCR产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测。

PCR产物经2% 琼脂糖凝胶检测，以天根生化科技有限公司产DNA Marker Ⅰ为分子量标准，150 V电泳10 min，通过UV-1000型凝胶成像系统查看PCR扩增效果及条带大小，照相保存。

1.2.5统计分析Fstat 2.9.3软件[5]用以计算群体内的近交系数。

2结果与分析