CK14在低分化非小细胞肺癌中区分鳞癌和腺癌的意义

段楚骁 李梦晨 付圣灵 付向宁

根据世界卫生组织公布的资料，2012年癌症在全球共造成约820万人死亡，其中肺癌的死亡人数在所有癌症中排名第一，约159万。肺癌中约80%为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)。在对NSCLC进行组织学诊断时，应尽可能进一步划分腺分化或鳞分化。因为腺癌常伴有表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)突变，可用表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-tyrosine kinase inhibitors, EGFR-TKI)或培美曲塞(pemetrexed)或贝代美珠(beracigumab)单抗治疗[1-2]。培美曲塞对腺癌的治疗比鳞癌效果更好，而鳞癌患者在接受贝代美珠单抗治疗时，有引起致命大出血的危险。因此对于光镜下无法明确鳞癌和腺癌的患者，应采用免疫组织化学的方法确定其分化倾向[3]。除了临床上常用的CK5/6、P63和TTF-1，本研究显示细胞角蛋白14(cytokeratin,CK14)对于肺鳞癌和腺癌的鉴别也具有较高价值。

国内外关于CK14在NSCLC中的表达及鉴别诊断价值的相关研究极少，文献报道CK14在高增殖活性和淋巴转移倾向的肺鳞癌中有着较高表达，因此CK14可作为肺鳞癌增殖活性和淋巴转移潜能的一个评判指标，并且CK14的阳性程度与Ki67抗原标记指数呈正相关[4]。本研究采用手术切除的低分化NSCLC病理组织标本进行CK14免疫组化检测，以探讨CK14在鳞癌与腺癌鉴别诊断中的意义。

材料与方法

一、一般材料

收集华中科技大学同济医学院附属同济医院胸外科存档的低分化肺鳞状细胞癌和低分化肺腺癌病理标本共40例，其中鳞癌20例，腺癌20例，患者年龄44～78岁，平均57岁；20例腺癌中，男性14例，女性6例，年龄44～78岁，平均58岁；20例鳞癌中，男性19例，女性1例，年龄46～73岁，平均57岁。

二、免疫组织化学染色

采用免疫组化EnVision两步法对标本进行处理。所用CK14抗体为即用型抗体，抗体及免疫组化检测试剂盒均购于福州迈新公司。标本经10%中性福尔马林液固定，常规脱水后经石蜡包埋，5 μm厚连续切片数张，取其中1张做HE染色，用于核实病理学诊断，剩余切片用于免疫组化染色。

三、结果判断

经本院两名经验丰富的病理科医师同时阅片审核。CK14阳性定位于细胞浆，结果判断参考相关文献[5]：肿瘤细胞阳性表达>70%为强阳性表达(++)，阳性表达>5%～10%且<70%为弱阳性表达(+)，阳性表达<5%～10%或未观察到阳性肿瘤细胞为阴性表达(-)。

四、统计学方法

采用SPSS17.0进行统计学分析，所有资料均为计数资料。各组间的频率比较采用行×列表资料Fisher χ2精确检验，P<0.01表示差异有统计学意义。并计算各指标的特异度、敏感度及准确度。

结 果

一、CK14在肺鳞癌中的表达

20例肺鳞癌手术切除标本中CK14强阳性表达者4例，弱阳性表达者9例，阴性表达者7例。CK14在肺鳞癌中的阳性率为65% 。CK14诊断鳞癌灵敏度为65%，特异度为90% ，阳性预测值为86.7%，阴性预测值为72.0%，准确度为77.5%。

二、CK14在肺腺癌中的表达

20例肺腺癌手术切除标本中CK14强阳性表达者0例，弱阳性表达者2例，阴性表达者18例。CK14在肺腺癌中的阳性率为10% 。

三、CK14在肺鳞癌和肺腺癌中阳性表达率的比较

将各组间的频率比较采用行×列表资料Fisher χ2精确检验，Fisher精确检验χ253.976，P<0.01，具有统计学意义。CK14在肺鳞癌的阳性率明显高于在肺腺癌中的阳性率，CK14在肺腺癌和肺鳞癌中的表达差异具有统计学意义。

四、CK14表达阳性率与淋巴结转移度、病理分期、吸烟指数及分化程度的关系

本组所选的40例手术切除标本中，CK14表达阳性率与淋巴结转移度、病理分期、吸烟指数无明显相关性，可能与样本量较小有关。

五、 CK14与其他免疫组化指标P63和TTF-1的关系

40例标本同时进行了P63和TTF-1免疫组化分析，结果见表1；同时进行了相关性分析，结果显示CK14与P63、TTF-1均显著相关(P<0.01)。本次研究显示CK14诊断鳞癌的敏感度为65%，小于P63诊断鳞癌的敏感度95%。CK14诊断鳞癌的特异性为90%高于本研究中P63的80%。

表1 CK14与指标P63及TTF-1相关性统计

讨 论

对于NSCLC患者，高分化的肺鳞癌和肺腺癌并不难鉴别，而低分化鳞癌和腺癌光镜下有时难以区分。鳞癌和腺癌的区分对于传统化疗药物价值不大，但随着新的靶向治疗和联合治疗方案的出现，这就要求有明确的病理组织学分类[6]。免疫组织化学检测是明确NSCLC病理组织分型的一种有效手段[7]，本研究显示CK14是区分低分化肺鳞癌和肺腺癌有效的免疫组化标志物。

CK14是一种相对分子量为50×103的细胞角蛋白，正常情况下表达于复层上皮细胞。已有研究显示CK14阳性表达在食管鳞癌和乳腺导管内乳头状肿瘤中均有明确意义[8-9]。

本研究中40例标本均以HE染色结果作为明确鳞癌腺癌的金标准，结果显示，CK14在肺鳞癌中的阳性率为65%，CK14在肺腺癌中的阳性率为10% 。CK14在肺腺癌和肺鳞癌中的表达差异具有统计学意义，Fisherχ2精确检验为53.976，P<0.01。薛丽燕等[10]的研究显示，CK14在正常肺组织中均呈阴性表达，CK14在肺鳞癌中的阳性表达率为36.7%，在肺腺癌中的阳性表达率为13.3%，其对肺鳞癌诊断的灵敏度为36.7%，特异度为86.7% ，准确度为61.7%。

已有研究表明CK14是肺鳞癌增殖活性的一个指标，CK14阳性表达程度可能与肺鳞癌患者淋巴结转移情况及病理分期相关[2]，但本研究结果并不支持这一观点。对于形态学镜检分型存在不确定性的低分化非小细胞癌患者，可做CK14免疫组化检测以进一步明确诊断，随后可及时予以相对应的合适治疗方案，以提高患者生存率。CK14阳性表达对于肺鳞状细胞癌诊断的灵敏度为65%，特异度为90%，在鳞癌和腺癌的鉴别诊断中具有统计学意义，可用于临床中低分化鳞癌与腺癌的鉴别诊断，辅助临床治疗的实施。本研究显示CK14阳性率与患者吸烟指数、淋巴结转移度以及病理分期等无明显相关性，可能与本研究选取例数较少有关，下一步实验可扩大研究的样本量，进一步探讨CK14在NSCLC中的意义。

参 考 文 献

1 Yang CH, Shih JY, Chen KC, et al. Survival outeolne and pyedictors of gefitinib antitumor activity in east Asian chemonaive patients wits advanced non small cell lung cancer[J]. CANCER, 2006, 107(8): 1873-1882.

2 刘 颖, 魏红艳, 戴献利, 等. 培美曲塞治疗老年肺腺癌临床观察[J]. 实用临床医药杂志, 2011, 15(7)： 91-93.

3 郑 姮, 段楚骁, 付圣灵, 等. 甲状腺转录因子-1, 细胞角蛋白8/18, P63和HMW联合检测对肺鳞癌和肺腺癌鉴别诊断价值[J/CD]. 中华肺部疾病杂志： 电子版, 2014, 7(1): 56-60.

4 Tsubokawa F, Nishisaka T, Takeshima Y, et al. Heterogeneity of expression of cytokeratin subtypes in squamous cell carcinoma of the lung: With special reference to CK14 overexpression in cancer of high-proliferative and lymphogenous metastatic potential[J]. Pathology international, 2002, 52(4): 286-293.

5 Dejmek JS, Dejmek A. The reactivity to CK5/6 antibody in tumor cells from non-small cell lung cancers shed into pleural effusions predicts survival[J]. Oncology reports, 2006, 15(3): 583-587.

6 Schiller JH, Harrington D, Belani CP, et al. Comparison of four chemotherapy regimens for advanced non-small-cell lung cancer [J]. N Engl J Med, 2002, 346(2): 92-98.

7 李 慧, 陈艳乐, 常静侠, 等. 肿瘤标志物在肺癌诊断、病理分型和临床分期中的价值[J/CD]. 中华肺部疾病杂志： 电子版， 2013， 6(2)： 144-148.

8 薛丽燕, 宋咏梅, 童 彤, 等. 成束蛋白、细胞角蛋白14在食管鳞癌中的表达[J]. 中华医学杂志, 2007, 87(35): 2494-2498.

9 Boecker W, Moll R, Dervan P, et al. Usual ductal hyperplasia of the breast is a committed stem (progenitor) cell lesion distinct from atypical ductal hyperplasia and ductal carcinoma in situ[J]. J Pathol, 2002, 198(4): 458-467.

10 薛丽燕, 邹霜梅, 郑 闪, 等. 成束蛋白和细胞角蛋白14在多种肿瘤组织中的表达及其鉴别诊断意义[J]. 中华肿瘤杂志, 2010, 32(11): 838-844.