P53和Ki-67及Survivin在乳腺癌中的表达研究

郭秀芳

·论著·

P53和Ki-67及Survivin在乳腺癌中的表达研究

郭秀芳

目的探讨P53、Ki-67和survivin在乳腺癌组织中的表达及相互关系。方法应用免疫组织化学(S-P)检测35例乳腺浸润癌、28例乳腺导管癌组织中P53、Ki-67和survivin的表达情况。结果乳腺浸润癌组织中P53、Ki-67和survivin的表达阳性率与乳腺浸润癌相比较，差异有统计学意义(P<0.01)。结论P53、Ki-67和survivin在乳腺癌中的表达增高，P53、Ki-67与survivin的表达无相关关系。

乳腺肿瘤；基因；P53；Ki-67；Survivin

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤。Survivin是能抑制细胞凋亡,从而延迟或阻止细胞自杀的蛋白质,属于已知阻碍细胞自杀的蛋白质中之一[1]。Ki-67是癌细胞增殖情况的指标。P53抑癌基因是生物体内一种抑制细胞转变癌细胞的基因。本研究探讨P53、Ki-67和Survivin在乳腺癌组织中的表达及相互关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择邢台市第一医院病理科2008年6月至2010年3月手术切除39例乳腺癌标本，所有标本均经组织病理学确诊，相关临床资料完整，患者手术前均未经任何抗肿瘤治疗，其中原位癌7例，浸润癌32例；平均年龄(46±15)岁。另取同时期手术切除的乳腺导管癌标本24例作为对照，年龄18～73岁，平均年龄(46±15)岁。2组基线资料有均衡性。

1.2 试剂 P53、Ki-67(鼠抗人)单克隆抗体，配套S-P(羊抗鼠)超敏试剂盒，二氨基联苯胺(DAB)显色剂，购自北京中衫生物工程有限公司，survivin(兔抗人)多克隆抗体，配套S-P(羊抗兔)超敏试剂盒，购自北京中衫生物工程有限公司。

1.3 SP法 (1)脱蜡、水化；(2)PBS洗2～3次各5 min；(3)3%H2O2(80%甲醇)滴加在TMA上，室温静置10 min；(4)PBS洗2～3次各5 min；(5)抗原修复；(6)PBS洗2～3次各5 min；(7)滴加正常山羊血清封闭液,室温20 min。甩去多余液体。(8)滴加一抗P53、Ki67、Survivin室温静置1 h或者4℃过夜或者37℃ 1 h。(9)4℃过夜后需在37℃复温45 min。(10)PBS洗3次各5 min；(11)滴加二抗40～50 μl，室温静置，或37℃1 h；(12)Ⅱ抗中可加入0.05%的tween-20。(13)PBS洗3次各5 min；(14)DAB显色5～10 min，在显微镜下掌握染色程度；(15)PBS或自来水冲洗10 min；(16)苏木精复染2 min，盐酸乙醇分化；(17)自来水冲洗10～15 min；(18)脱水、透明、封片、镜检。以已知阳性的乳腺痛切片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判定 免疫组化染色结果的判定采用双肓法，由两位病理医师分别独立阅片，观察10个有代表性的高倍镜视野(×40)计数1 000个细胞，对免疫组化结果进行评怙，两者结果取均值作为最终结果。Ki-67定位表达于细胞核，survivin定位表达于细胞浆，P53在细胞浆和胞桉内均有表达，以细胞浆和(或)细胞核内出现清晰的棕黄色为阳性细胞。P53、survivin阳性细胞比例=(阳性细胞数/细胞总数1 000)×100%。Ki-67增殖指数=(阳性细胞数/细胞总数1 000)×100%。按照survivin P53阳性细胞比例和Ki-67增殖指数对组化结果分为4个等级：≤10%为“-”，11%～25%为“+”，26%～50%为“++”， ≥51%为“+++”[1，2]。

1.5 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，计数资料比较采用χ2检验；相关性分析运行Spearmam相关性检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3种因子阳性表达 在39例乳腺癌组织中，survivin表达阳性为26例，阳性率为66.6%；Ki-67表达阳性为23例，阳性率为58.9%；P53表达阳性为32例，阳性率为82.0%。在24例乳腺导管癌组织中，survivin表达阳性为7例，阳性率为25%；P53表达阳性为4例，阳性率为14.29%；Ki-67表达阳性为3例，阳性率为7.14%。见图1～3。

图1 survivin阳性(免疫组化×40)

图2 Ki⁃67阳性(免疫组化×40)

图3 P53阳性(免疫组化×40)

2.2 Wilcoxon秩和检验 survivin(u=4.52032)、P53(u=5.64412)、Ki-67(u=4.68051)在乳腺浸润癌组织中的表达与乳腺导管癌组织比较差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1 P53和Ki-67及survivin在乳腺浸润癌与乳腺导管癌组织中的表达 例

3 讨论

P53抑癌基因是生物体内一种抑制细胞转变癌细胞的基因。细胞中本来就有致癌基因(oncogene)及抑癌基因的存在，只要一方产生病变而失去平衡，癌症就可能会发生[2]。

人类P53基因定位于17号染色体P13，全长16～20 kb,含有11个外显子，转录2.8kb的mRNA,编码蛋白质为P53，是一种核内磷酸化蛋白。P53是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的基因[3]，过去一直把它当成一种癌基因，直至1989年才知道起癌基因作用的是突变的P53，后来证实野生型的P53是一种抑癌基因。P53基因表达产物P53蛋白由393个氨基酸残基构成，在体内以四聚体的形式存在，半衰期为20～30 min[4，5]。

Ki-67是一种DNA结合蛋白，Ki-67阳性细胞率与生存时间呈显著负相关(r=-0.587，P<0.01)[6]。Ki-67分裂活跃的细胞占肿瘤细胞的比例，这个是低增殖，预后好[6]。Ki-67与乳腺癌尤其是淋巴结转移阴性患者的预后相关，有助于确定是否采用辅助性化学治疗。

Survivin是凋亡抑制蛋白家族(IAP)的重要成员，是凋亡抑制蛋白家族的新成员，Survivin具有肿瘤特异性，只表达于肿瘤和胚胎组织，且与肿瘤细胞的分化增殖及浸润转移密切相关[7]。Survivin 可能主要通过两条途径来抑制细胞凋亡：(1)直接抑制凋亡终末效应酶Caspase-3 和Caspase-7的活性来阻断各种刺激诱导的细胞凋亡过程;(2)Survivin 与周期蛋白激酶CDK4,CDK2相互作用阻断凋亡信号转导通路[8]。

在本研究中，P53、Ki-67和survivin在乳腺癌中的表达显著增高(P<0.05)，这与相关研究，以及三者在其他恶性肿瘤中的表达情况[9,10]相一致。P53、Ki-67和survivin在乳腺癌中的表达明显增高的生物学特点，可以联合应用于相应疾病的鉴别诊断。同时，在作为肿瘤基因治疗的靶点方面，也值得进一步研究。

1 范宇飞，朱严冰，孟继昌，等.survivin、P53蛋白与细胞周期蛋白Dl在乳腺癌巾的表达及相关.临床误诊误治，2010,12:101-103.

2 赵延龙，陈江，姜汉国.survivin、P53基固在甲状腺乳头状癌组织中表达的研究.哈尔滨医科大学学报,2006,40:23-26.

3 邓百凯，陈健，部红梅.Smac和Ki-67在甲状腺癌中的表达和意义.肿瘤防治研究,2008,35:800-802.

4 陈利民，郑建华，王烯冬.P53 Survivin的研究进展.疾病监测与控制杂志,2009，4:243-245.

5 曾永群，陈秋月，李凡彩.CA-125抗原肿瘤抑制蛋白P53,Ki-67抗原及抑癌基因P27蛋白作为卵巢癌病理辅助诊断指标的评价.中国全科医学,2010,13:1877-1879.

6 Dowsett M,Smith IE,Ebbs SR,et al.Prolifealion and apoptosis as markers of benefit in neoodjuvant endocrine therapy of breast Cancer.Clin Cancer Kes,2006，12：1024-1030.

7 王运端，张海娟，刘风军.survivin和环氧合酶-2在卵巢肿瘤中的表达及意义.河北医药，2009,31:2746-2748.

8 李秀娟，廖琪，孙中华，等.Ki67和survivin在卵巢上皮性癌中的表达及意义.中国全科医学,2009,12:1534-1535.

9 Chantalat L,Skonfias DA,Kleman JP,et al.Crystal strncture of human surviving reveals a bow tie-shaped dimmer with two unusnal alpha-heli-cal extensions.Mol Cell，2000,6:183-189.

10 王立芝，薛龙，谭冬梅，等.survivin的研究进展.医学综述，2006，12:1089-1092.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.22.024

054001 河北省邢台市第一医院病理科

R 737.9

A

1002-7386(2014)22-3425-02

2014-04-29)