中药冬瓜皮的质量控制研究

★ 王一涵 侯晓琳 董雪莲

(长春中医药大学 吉林 长春 130117)

冬瓜皮为葫芦科植物冬瓜Benincasehispida(Thumb.)Cogn.的干燥外层果皮，削取外层果皮，晒干得。冬瓜皮含有多糖类、蜡类、树脂类、挥发性物质(如E-2-己烯醛、正己醛、甲酸正己醇酯等)、三萜类化合物(如乙酸异多花独尾草烯醇酯、粘霉烯醇等)、胆甾醇衍生物、有机酸、烟酸、胡萝卜素等成分[1]。其味甘、性寒，归脾、小肠经，具有利尿消肿的功效，用于水肿胀满，小便不利，暑热口渴，小便短赤[2]。尽管冬瓜皮药用历史悠久，但有关于冬瓜皮的文献报道较少，关于其科学严谨的质量控制方法很少，在《中国药典》2010版也仅仅收录了其性状、显微鉴别等内容，所以有必要对其质量控制方法进行进一步研究，以控制其质量。本文主要建立了冬瓜皮薄层色谱鉴别法及多糖含量测定方法，以控制冬瓜皮质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器与试剂

紫外分光光度计(型号：TU-1810PC)，葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定研究院，批号：110833-200904，供含量测定)。所用试剂均为分析纯。

1.2 药材与提取物

1.2.1 药材 冬瓜皮饮片经长春中医药大学药学院翁丽丽教授鉴定，符合《中国药典》2010年版一部106页冬瓜皮项下的标准。

1.2.2 提取物 取冬瓜皮药材600g，分别加入16，13，13倍量水(第一次先浸泡1h)，煎煮3次，每次1 h，滤过，合并滤液，干燥，粉成细粉，备用。

2 鉴别

取冬瓜皮水煎提取物2g，加甲醇30mL，超声处理(功率250W，频率40kHz)30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。取冬瓜皮药材2g，加甲醇30mL，超声处理(功率250W，频率40kHz)30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5～10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇试液,待挥干后,在105°C下加热显色。供试品色谱中，在与药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，如图1。

图1 冬瓜皮薄层色谱图

3 多糖含量测定方法[3,4]

3.1 对照品溶液的制备 精密称定葡萄糖对照品5mg，置50mL量瓶中，加水溶解，定容至50mL，摇匀，即得对照品浓溶液(每1mL含葡萄糖0.1mg)。

3.2 供试品溶液的制备 取水煎提取物0.5g，精密称定，置于50mL锥形瓶中，加入水40mL，密塞，超声处理30min，取出放冷，定容至50mL，滤过，取滤液1mL，置于50mL容量瓶中，用水定容，得供试品溶液。

3.3 测定波长的选择 (1) 葡萄糖标准品的波长扫描 精密量取上述葡萄糖对照品溶液0.5mL，再精密加入0.5mL的水置于具塞试管中，加入1mL 5%苯酚，摇匀后迅速加入5mL浓硫酸，混匀，于沸水浴加热20min后取出，放入冷水浴中，冷却15min。然后于400～600nm进行扫描，测定最大吸收波长。

(2)冬瓜皮样品波长扫描 取供试品溶液1mL，置于具塞试管中，同葡萄糖对照品方法显色。然后于400～600nm进行扫描，测定最大吸收波长。

结果葡萄糖标准品和冬瓜皮供试品均在490nm处有最大吸收，故选择490为检测波长。

3.4 线性关系考察 精密吸取葡萄糖对照品溶液0.1 ,0.2 ,0.4 ,0.6 ,0.8 ,1.0mL分别置于10mL容量瓶中，加水至2 mL，再取1mL置于具塞试管中，加入1mL 5%苯酚，摇匀后迅速加入5mL浓硫酸，混匀，于沸水浴加热20min后，取出，放入冷水浴中，冷却15min。在490nm处测量吸光度，并绘制标准曲线，计算回归方程：Y=0.00898X-0.0233，r=0.9998，说明多糖在10.08～100.80μg/mL范围内呈良好的线性关系。

3.5 精密度试验 精密量取葡萄糖对照品溶液1mL，依 “3.4”项下方法显色，连续测定6次，记录吸光度A值，并计算RSD%。RSD值为0.268%，结果表明仪器、方法的精密度良好。

3.6 稳定性试验 精密称取冬瓜皮水煎提取物约0.5g，按照供试品溶液的方法制备；精密吸取1.5mL供试品溶液置于具塞试管中，依 “3.4”项下方法显色。以相应试剂为空白，在490nm处测定吸光度，并分别记录时间为0,5，10,15,20,25,30min的吸光度，并计算RSD%。同样吸取对照品溶液1mL，依法测定，计算RSD%。结果：标准品的RSD值0.114%，供试品RSD值为0.106%，说明对照品溶液和样品溶液在30min之内稳定性良好。

3.7 重现性试验 精密称取冬瓜皮水煎提取物约0.5g，称取6份，按供试品溶液制备方法处理样品；精密吸取供试品溶液1mL置具塞试管中，依 “3.4”项下方法显色。在490nm处测量吸光度，并计算含量，考察重现性。结果，RSD值为0.93%，重现性良好。

3.8 加样回收率试验 精密称取冬瓜皮水煎提取物(总多糖含量为245.76mg/g)0.5g，平行称定6份，照供试品方法制备。取0.4mL溶液置具塞试管中，再加入0.4mL浓度为0.100 8mg/mL的葡萄糖标准品置于具塞锥形瓶中，在加入0.2mL的水，依 “3.4”项下方法显色。在490nm处测量吸光度值，并计算加样回收率，结果见表1。结果表明：回收率良好，方法可行。

表1 加样回收率试验

4 讨论

4.1 冬瓜皮主要有效成分为冬瓜多糖，通过对多糖含量测定方法进行对比筛选，最终确定采用苯酚-硫酸法进行多糖的含量测定，该方法操作简便，灵敏度高，科学稳定，可作为冬瓜皮含量控制的有效方法。

4.2 冬瓜皮用药历史悠久，但其薄层色谱鉴别方法文献至今未有报道。本实验通过大量条件摸索，首次确定了冬瓜皮薄层色谱鉴别条件，该方法稳定可行，专属性强，弥补了冬瓜皮在薄层色谱鉴别上的空白，在以后的应用中可作为制剂等的薄层鉴别方法。

4.3 本文建立了冬瓜皮薄层色谱鉴别法及多糖含量测定方法，首次建立了科学严谨的冬瓜皮质量控制方法，弥补了冬瓜皮质量控制方面的空白，具有较高的学术价值，同时对于今后规范药用冬瓜皮质量具有深远意义。

[1]车双辉,杜琪林.冬瓜中活性成分的提取分离研究[J]. 食品研究与开发，2004，25(1)：104-105.

[2]邓居林.冬瓜饮加减治疗糖尿病21例[J]. 中医药学刊，2003，21(6)：898-899.

[3]徐翠莲,杜林洳,樊素芳,等．多糖的提取、分离纯化及分析鉴定方法研究[J]. 河南科学，2009，27(12)：1 524-1 529.

[4]王新琪 ，蔡广知 ，韩 梅 ,等．冬瓜皮多糖提取工艺研究[J]. 吉林农业大学学报，2010，32(1)：54-57,61.