抗炎止血软膏中没食子酸含量的测定*

★ 陈浩 何小女 徐欢 张莉艳

(1.江西省中医院 南昌330006；2.江西中医药大学 南昌330004)

肛肠疾病术后伤口疼痛、出血等并发症是临床上一大常见难题。笔者在《新疆中草药单方验方选编》基础上研发出的复方止血消炎软膏可用于保护术后肛肠患者创面及黏膜，减轻术后肛肠疾病疼痛及出血，减轻肛门坠胀及排便，作为肛肠外科手术后的局部用药临床效果良好。本文对处方中五倍子中的成分没食子酸的含量进行了测定，为该药的质量标准的制定提供了科学依据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 电子天平BS 124S(北京赛多利斯仪器)，超声波清洗器DL360B(上海之信仪器有限公司)，微型植物试样粉碎机KN-500型(长沙康宁电子科技有限公司)，恒温鼓风干燥箱DHG-9070A 型(海精宏实验设备有限公司)。

1.2 试剂 对照品：没食子酸(110831-201204中国药品生物制品检定所)，色谱甲醇：西陇化工股份有限公司(130106)，水为超纯水，其余实验所用化学试剂均为分析纯试剂。

1.3 色谱条件 仪器：安捷伦1260，色谱柱：C-18安捷伦液相色谱柱4.6mm×150mm，流动相：甲醇∶ 0.1%磷酸(5∶95)，检测波长：270nm，流速：1mL/分，柱温：25℃。

2 含量的测定[1-5]

2.1 没食子酸对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品17mg于100mL量瓶中，加适量50%甲醇使溶解定容至刻度，摇匀，超声10分钟，过微孔滤头于小瓶，即得储备液。

2.2 供试品溶液的制备 称取抗炎止血软膏10g于研钵中研匀，精密称取0.4g于圆底烧瓶中，精密加入4mol/L盐酸溶液50mL，称定重量，水浴加热3.5小时，放冷，补重，滤过。精密量取续滤液5mL，置50mL量瓶中，加50%的甲醇稀释至刻度，摇匀，超声10分钟，过微孔滤头，取续滤液，即得供试品溶液。精密吸取没食子酸对照品适量，加50%的甲醇制成每1mL含102μg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 线性关系的考察 精密取储备液1、2、3、5、7mL，溶解于5个10mL量瓶中，取50%甲醇稀释至刻度，摇匀，超声10分钟，以储备液及稀释的5个浓度的没食子酸溶液建立标准曲线，每次进样量10μL，以对照品进样量为横坐标X，峰面积为纵坐标Y绘制标准曲线，求得回归方程：Y=197 35X-5.808 3r=0.999 1(n=6)。结果表明：没食子酸在进样量0.17-1.7μg范围内，进样量与峰面积呈良好线性关系。

2.4 阴性干扰试验 取阴性样品适量，按2.2供试品方法制成阴性对照溶液。按照上述色谱条件，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL注入色谱仪中，记录色谱图(见下图1-3)。结果表明：在与没食子酸对照品色谱相应的位置上无色谱峰出现，方中其他组分对测定结果无影响。

图1 没食子酸对照品

图2 抗炎止血软膏样品

图3 抗炎止血软膏阴性样品

2.5 精密度试验 精密吸取2.2项的对照品溶液连续进样6次，每次进样10μL，测得精密度RSD% =1.87%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性考察 取同一批号样品6份，按供试品溶液制备方法制备的样品溶液，各进样10μL记录峰面积，结果RSD%为1.33%，说明本方法重复性良好。

2.7 稳定性实验 精密吸取同一份供试品溶液10uL分别于0、1、3、5、7、10小时注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积积分值，结果其RSD为1.42%。实验结果表明供试品溶液在10小时内测定稳定性良好。

2.8 回收率实验 精密称取已知含量的同批抗炎止血软膏样品各0.2g，分别在6份样品中加入没食子酸标准品14.96mg，按“供试品溶液的制备”法处理，按设定的方法测定，平均回收率为99.6%，RSD为1.66%，结果良好。

2.9 样品测定 取本品3批样品(20121115、20121219、20130103)，按2.2供试品方法制备溶液，按含量测定方法测定，用外标法计算供试品没食子酸的含量，结果分别为71.85mg/g、71.68mg/g、71.10mg/g。

3 讨论

取样品在200-350 nm波长范围内进行扫描，在270 nm处有最大吸收，故选择270 nm为检测波长。在供试品取样中软膏研细的均匀度决定着样品含量测定的精确性，样品在盐酸水浴中提取性质稳定且高效液相测定中无阴性干扰。通过实验研究，本文建立了抗炎止血软膏中没食子酸含量的HPLC测定法。该方法简单并具有良好的准确性与重现性，有利于药品质量控制的下一步完善。

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