石家庄市女性HPV感染情况分析

孙晓慧 赵敏英 蔺惠兰 刘俊霞

·调查研究·

石家庄市女性HPV感染情况分析

孙晓慧 赵敏英 蔺惠兰 刘俊霞

目的研究石家庄市女性宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒(HPV)的感染状况及其特点。方法采用核酸分子快速导流杂交技术对石家庄市2 234例女性患者的宫颈脱落细胞进行HPV基因型检测。结果所测标本中HPV阳性检出率为36.3%(812/2 234)，21种基因型均被检出，其中高危型651例，低危型161例。HPV高危型中，阳性率最高的是HPV16型，其他主要基因型依次是HPV52、58、53、18、66、68、31、33、39型；低危型主要为6、11、81(CP8304)型；单一HPV基因型感染的阳性率为17.1%(381/2 234)，多重HPV基因型感染的阳性率为12.1%(270/2 234)。结论石家庄市女性宫颈脱落细胞HPV感染率为36.3%，HPV 16、52、58型是主要的感染基因型。

人乳头瘤病毒；核酸分子杂交技术；基因型；石家庄

宫颈癌是我国女性最常见的恶性肿瘤之一，近年来宫颈癌的防治研究中认为高危型人乳头瘤病毒(HPV)持续感染是宫颈癌发生的主要危险因素[1，2]。因此，HPV检测也成为宫颈癌筛查的必不可少的方法。核酸分子快速导流杂交技术通过寡核苷酸探针杂交可检出15种高危型别HPV DNA，包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68，及6种低危型别HPV DNA，分别是HPV6、11、81(CP8304)、42、43、44。该技术建立在基因芯片和核酸杂交技术基础之上，结果具有较高的可信性。因此，本研究通过核酸分子快速导流技术对石家庄市女性宫颈脱落细胞进行HPV基因分型检测，分析石家庄市女性HPV的感染状况及分布特点，探讨HPV筛查在宫颈病变防治中的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2011年5月至2013年8月来我院妇科门诊就诊，有性生活史，自愿接受宫颈脱落细胞HPV感染分型筛查的2 234例女性患者的宫颈脱落细胞标本进行HPV基因型别检测，年龄18～78岁，中位年龄33岁，受检者均来自石家庄市及周边地区。

1.2 仪器及试剂 核酸分子快速杂交基因分型检测系统，包括PTC-200(MJ Reasearch)PCR扩增仪，HybriMax核酸分子快速导流杂交仪，基因组抽提试剂盒、PCR扩增试剂盒及杂交试剂盒，由凯普生物科技有限公司生产；高速离心机由白洋公司生产；超净工作台由苏州净工生产。

1.3 方法 (1) 宫颈脱落细胞的采集：先用棉拭子将阴道及宫颈口过多的分泌物轻轻擦拭干净，再用宫颈刷采集宫颈脱落细胞，然后将其放入含专用细胞保存液的试管中，4℃保存。 (2) HPV DNA的提取 吸取800 μl细胞悬液标本，14 000 r/min离心5 min后，弃上清，留取沉淀。按基因组抽提试剂盒说明书提取HPVDNA。(3)PCR扩增：反应体系25 μl，其中提取的DNA模板为1 μl，每一批同时扩增HPV18型阳性对照和阴性对照各一份。反应条件为95℃ 9 min，95℃ 20 s，55℃ 30 s，72℃ 30 s扩增40个循环，72℃ 延伸5 min。(4) 导流杂交：在HybriMax核酸分子快速导流杂交仪上进行导流杂交，杂交仪及杂交液45℃预热，在杂交平台上放入标记21种HPV基因型寡核苷酸探针的低密度基因芯片：将扩增产物95℃变性5 min，冰浴2 min后，加入检测孔内进行导流杂交，具体操作按照杂交试剂盒说明书进行。(5) 结果判断：阳性点为蓝紫色圆点，其他为阴性。每张芯片上均有PCR反应质控点和杂交显色质控点各1个以进行质控。

2 结果

2.1 HPV DNA基因分型检测结果 2 234例患者标本中共检出812例阳性，阳性检出率为36.3%， 且21种基因型别均被检测到；其中高危型别651例，占阳性标本总数的80.2%，低危型别161例，占总阳性标本总数的19.8%。

2.2 HPV DNA基因型别分布

2.2.1 高危型HPV主要基因型别阳性率：高危型别中阳性率最高的是HPV16(9.0%，200/2 234)，其他主要型别依次是52(5.7%)、58(5.1%)、53(2.7%)、18(2.5%)、66(2.1%)、68(2.0%)、31(2.0%)、33(2.0%)、39(2.0%)型。见表1，图1。

表1 高危型HPV主要基因型别阳性率

图1 高危型HPV主要基因型别在阳性标本中的阳性率

2.2.2 高危型HPV单一、多重感染阳性率：单一HPV高危型别感染的阳性率为21.6%(483/2 234)，多重HPV基因型别感染的阳性率为13.8%(309/2 234)，其中二重感染161例，和三重感染148例，四重感染12例，五重感染5例，还有七重感染3例。见表2。

表2 高危型HPV单一、多重感染阳性率

3 讨论

宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，是威胁女性健康甚至导致女性病死的主要疾病[1]。近年来宫颈癌的发病率和病死率逐年上升且呈现地区增长趋势。HPV是引发宫颈癌的主要致病因子，有近20种HPV基因亚型与宫颈癌的发生密切相关[2]。在普通人群中HPV感染较为普遍，且HPV感染具有很强的地域差异，不同国家与地区HPV感染分型的流行病学分布不同[3]。

本研究对石家庄市2 234例妇科门诊患者进行筛查，以了解石家庄市女性HPV的感染状况及分布特点，为宫颈病变的防治提供依据，早期预防宫颈癌的发生。研究结果显示，HPV21种基因型全部被检出，石家庄市HPV总阳性率为36.3%，低于北京地区[4]的57.1%，高于呼和浩特地区[5]13.04%及西藏地区[6]9.19%，与浙江省台州地区[7]35.08%结果相近。本研究结果显示HPV16型是石家庄市女性最常见的HPV基因亚型，其次为HPV52、58型，与国内其他地区研究结果基本一致，而与欧美人群中分布的HPV18型位于第二位的结果存在差异[8]，由此推测中国女性人群中HPV基因型别分布与欧美女性人群相比可能存在一定的地域特性。本研究中HPV53、18型阳性率较高，仅次于HPV52、58型，与其他研究结果有所不同，这可能与选取的筛查人群为妇科门诊就诊患者及研究样本数偏少有关。

本研究结果显示HPV基因亚型单一感染率为59.5%(483/812)，多重感染率为40.5%(309/812)，与北京地区44.35%的结果相一致。在多重感染中，二重感染和三重感染占极大比例，还检出了罕见的3例七重感染，与其他研究中多重感染以二重感染为主不同，且很少有七重感染病例的报道，表明HPV多重感染存在人群和地区差异。对于HPV感染的基因型数目与宫颈病变发生的相关性这一问题，目前争议颇多。有学者认为HPV多重感染增加了其持续感染的危险性，而高危型HPV的持续感染是宫颈癌发生的主要危险因素，因此，多重感染可增加宫颈病变的发生[9]。也有学者认为HPV多重感染各亚型之间存在竞争关系，相对于HPV单一感染而言，对宫颈细胞的侵害小，更易清除，因此不易导致宫颈癌的发生[10]。但另有研究发现[11]，HPV单一感染和多重感染的清除率无显著差异，对某些特殊亚型如HPV16型的感染清除率较低，易导致其持续性感染，发生宫颈病变，甚至最终导致宫颈癌。

目前，大量的研究中，尚无对石家庄地区女性人群HPV感染情况的流行病学调查。因此，本研究对石家庄市2 234例妇科门诊患者进行HPV感染筛查，对于石家庄市女性宫颈癌的早期防治提供了依据。

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9 Mori S,Nakao S,Kukimoto I,et al.Biased amplification of human papillomavirus DNA in specimens containing multiple human papillomavirus types by PCR with consensus primers.Cancer Sci,2011,102:1223-1227.

10 Matsumoto K,Oki A,Furuta R,et al.Predicting the progression of cervical precursor lesions by human papillomavirus genotyping: a prospective cohort study.Int J Cancer,2011,128:2898-2910.

11 Kazunari Kondo,Asami Uenoyama,Ryo Kitagawa,et al.Genotype Distribution of Human Papillomaviruses in Japanese Women with Abnormal Cervical Cytology.Open Virol J,2012,6:277-283.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.06.049

项目来源：石家庄市科技指导计划项目(编号：12146803)

050011 河北省石家庄市第一医院

刘俊霞，050011 河北省石家庄市第一医院；

E-mail：20309337@qq.com

R 173

A

1002-7386(2014)06-0913-03

2013-10-17)