蛇床子干乳剂的制备与稳定性考察

姜霁洺，杨 婧，邱金双，王艳宏，李永吉，王 锐

(黑龙江中医药大学药学院，哈尔滨150040)

中药蛇床子为伞形植物蛇床(Cnidium monnieri L.Cusson)的干燥成熟果实，始载于《神农草经》，列为上品 ，味辛 、苦 ，性温，具散寒、祛风、燥湿、杀虫、止痒和壮阳等功能.常用作治疗以阴道炎为主的妇科疾病.其主要有效成分为总香豆素和挥发油类[1].近年来已将其制成乳剂涂抹于患处，用以治疗滴虫阴道炎类妇科疾病.已有文献表明，蛇床子乳剂抑制滴虫生长的最低药物质量浓度为0.15 ～0.62 g/L，抑虫效果较好[2].但由于乳剂的分散相易合并或破裂，出现分层、絮凝等现象，而且乳剂的辅料易发生分解和氧化，不适合长期保存和使用[3].故将液态乳剂制成干乳剂，可改善乳剂的不稳定性，延长保质时间.

为改善蛇床子中脂溶性成分制成的O/W型乳剂的诸多不稳定因素.采用冷冻干燥法制成干乳，进行稳定性试验，以考察是否达到中国药典以及新药稳定性试验的要求.

1 试剂与仪器

蛇床子(购自哈药集团世一堂中药饮片有限责任公司，经鉴定符合《中国药典》(2010年版)规定);蛇床子素对照品(中国药品生物制品检定所，批号:201004);甲醇(美国迪马公司);活性炭(国药集团化学试剂有限公司);液体石蜡(天津东天化工制剂有限公司);泊洛沙姆407(上海运宏化工制剂有限公司);剪切式乳匀机(JRJ－300－I上海标本模型厂制造)、高压乳匀机(GRJ－2宁波新芝生物科技有限公司);2695型高效液相色谱仪，2996型检测器，Empower工作站;美国 Waters公司;冷冻干燥机(VirTis Benchtop 2K);药物稳定性检查仪(WD－B天津药典标准仪器厂);药品强光照射试验箱(SHH－200 GD重庆市永生试验仪器厂);M电子天平(JD500－3G，东莞永旭电子有限公司)电热套(KDM，鄄城现代实验仪器有限公司);真空干燥箱(DIF－6090上海恒源科学仪器有限公司);布氏漏斗(FA2004，东莞市全科化玻仪器有限公司);旋转蒸发仪(R206B，上海申生科技有限公司).

2 蛇床子干乳剂的测定

2.1 色谱条件

色谱柱 Diamonsil C18(5 μm，250 mm × 4.6 mm);流动相:甲醇－水(80∶20);柱温:30℃;流速:1.0 mL/min;测定波长:323 nm.

2.2 标准曲线的制备

精密称取蛇床子素对照品适量，置50 mL容量瓶中，用甲醇定容并制成质量浓度为20 μg/mL对照品储备液.分别精密吸取上述对照品储备液1、3、5、10、15、25 mL，置25 mL 容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22 μm 微孔滤膜过滤.精密吸取上述续滤液各20 μL，依次注入高效液相色谱仪，测得峰面积.以峰面积(A)为纵坐标，其质量浓度(C)为横坐标，得蛇床子素线性回归方程:A=32 999C －4 632.7，R2=0.999 4，表明蛇床子素在质量浓度0.8 ～20.0 μg/mL 范围内有良好的线性关系，见图1、2.

图1 蛇床子素标准品峰

图2 蛇床子素样品峰

2.3 精密度试验

精密吸取蛇床子干乳剂供试品溶液20 μL，在上述色谱条件下重复进样6次，RSD为1.45%，.结果表明精密度较好.

2.4 稳定性试验

精密吸取蛇床子干乳剂供试品溶液20 μL，在0、6、12、18、24 h 进行测定，RSD 为0.64%.结果表明对照品溶液在24 h内稳定.

2.5 回收率试验

精密称取的蛇床子素对照品溶液0.5、1.0、1.5 mL，加入到已知质量浓度的蛇床子提取物溶液中，在上述色谱条件下进行测定.结果测得蛇床子素的平均回收率为99.86%，RSD为1.59%.结果表明该方法的准确性高，符合测定要求.

2.6 供试品的制备

称取蛇床子干乳剂20 mg，溶于10倍量注射用水中，振荡，使其复溶为蛇床子乳剂.置50 mL量瓶中甲醇定容，超声15 min破乳，使乳剂呈透明液体，静置15 min直至冷却，再用甲醇补充至刻度.再将其在5 000 r/min下离心5 min.取上清液，用0.22 μm 微孔滤膜过滤，即得供试品溶液[4].

3 蛇床子干乳剂的制备

精密称取经超声提取的蛇床子提取物5.00 g，加至大豆油20 mL，水浴加热，搅拌均匀.倾入溶有3 g PEG400的300 mL蒸馏水中.置于剪切式乳匀机搅拌15 min，形成初乳，向其加入蒸馏水1 L进行稀释，将稀释的初乳倾入高压乳匀机中，乳化3次，乳化压力为150 kPa，即得蛇床子O/W型乳剂.向所制乳剂中加入10%的蔗糖作为冻干保护剂，溶解均匀后，经0.45 μm微孔滤膜过滤，置西林瓶中灭菌，放入冷冻干燥机中冷冻干燥，即得蛇床子干乳剂[5].

4 稳定性试验

根据2010版中国药典[6]，对蛇床子干乳剂的3批供试品进行稳定性考察，以确定各稳定因素对蛇床子干乳剂的影响程度.同时根据新药稳定性试验的要求，确定其有效期.

4.1 高温试验

分别称取蛇床子干乳剂3份，每份1.00 g，置于药物稳定性检查仪中，温度为60℃，相对湿度为55%于0、3、5、10 d 观察干乳剂外观，复溶性，称重并测其质量分数.见表1.

表1 蛇床子干乳剂高温试验

由表1可见，样品质量、溶解度、质量分数均无较大差异，第10天颜色稍有加深，说明高温对蛇床子干乳剂无较大影响.

4.2 高湿试验

分别称取蛇床子干乳剂3份，每份1.00 g，置于药物稳定性检查仪中，温度为25℃，相对湿度为95%，于0、3、5、10 天观察干乳剂外观，复溶性，称重并测其质量分数.

由表2可知，蛇床子干乳剂外观形状、质量和溶解度均无较大变化，其质量分数变化也不明显，吸湿率分别为 0.79%、0.85%、0.86%，吸湿性较低.

表2 蛇床子干乳剂高湿试验

4.3 强光照试验

分别称取蛇床子干乳剂3份，每份1.00 g，置强光照射试验箱中，于照度为4 000 lx下放置10 d，于第 0、1、3、5、10 天取样检测，同时记录样品的外观变化，结果见表3.

表3 蛇床子干乳剂强光照试验

由表3可知，蛇床子干乳剂外观有明显改变，且长时间强光照射可使表面出现渗油现象，质量减少较多，质量分数变化稍大，说明其在强光照条件下不稳定，需避光保存.

4.4 有效期考察

采用初匀速法预测有效期[7]，将蛇床子干乳剂按供试品溶液进行处理，测定初质量浓度后，分成 7 组，分别置于 60、65、70、75、80、85、90 ℃恒温水浴锅中，分别加热 11、10、9、8、7、6、5 h，立即取出，迅速冷却，终止分解，用水稀释，测定，结果见表4.

表4 蛇床子干乳剂有效期考察结果

蛇床子的回归方程:lgV0=17.643－6 773.4/T，R2=0.991，按蛇床子室温(25℃)推算贮存期为2.10 a，因此可将蛇床子干乳剂室温的贮存期定为2 a.

5 讨论

在影响因素的高温、高湿试验中，蛇床子干乳剂均呈黄绿色，只在第10天稍微有变化，质量、溶解度、质量分数均较平稳，由此可见干乳剂中辅料可保护蛇床子提取物不受高温、高湿影响，保持良好的稳定性.但在强光照试验中，干乳剂颜色明显加深，指标含量明显降低，质量、溶解度也有较大改变.说明蛇床子干乳剂易受强光影响，其有效成分随之分解，使质量分数降低.

干乳剂辅料将蛇床子提取物包裹其中，降低其药物的不稳定性.根据中药新药稳定性试验要求，应达到1.5 a的室温保存时间，经有效期考察试验可推算本剂型多于2 a，符合标准.应在避光阴凉处保存，具体时间仍需将样品在室温下进行长期试验考察.

蛇床子中脂溶性成分多数为总香豆素类，主要成分为蛇床子素，并以此作为指标进行考察.在多批干乳剂中，指标物含量无明显差异，说明工艺较稳定成熟.而且干乳溶于少量水中便可形成初乳，在没有改变使用蛇床子乳剂这个初衷的前提下，使剂型的稳定性和贮存更加完善.这将为蛇床子药物大量生产并广泛应用于临床提供基础.

[1]曹 晖，蔡金娜，刘玉萍，等.蛇床子地理分布与叶绿体matK基因序列的相关性分析[J].中国药学杂志，2001，36(6):373－376.

[2]杨 婧，姜霁洺，王 锐.蛇床子乳剂的制备及体外抗阴道滴虫考察[J].中国实验方剂学杂志，2012，18(23):31－33.

[3]张小丽，王 鸿.药物干乳剂的研究进展[J].中国药业，2008，17(20):62 －63.

[4]朱爱军，王周丽，贝永燕，等.蛇床子素β－环糊精包合物分散片的制备及大鼠体内药动学研究[J].中成药，2012，34(10):1890－1890.

[5]贾东明，朱校勇.美洛昔康干乳的制备及其稳定性考察[J].中国医院药学杂志，2008，28(20):1793－1795.

[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业社，2010:199.

[7]柏干荣，韦 宏.氟哌酸滴眼液稳定性的研究[J].中国医院药学杂志，1993，13(5):196－198.