不同工艺对芎麻汤成分质量浓度及配比的影响

赵 瑛，刘 琳，黄坤杰，李 蔚，王亚贤，李 伦

(1.哈尔滨商业大学药学院，哈尔滨150076;2.黑龙江中医药大学，哈尔滨150088)

传统中药与现代中药提取的指导思想不同.这使得许多传统中药在制成现代中药制剂过程中制备工艺发生变化[1].工艺变化必定导致有效成分含量和配比的变化，进而影响方剂的功能主治.本文以芎麻汤为模型方剂，分别按传统制备方法和“相似相溶”理论指导下的现代制备方法制备芎麻汤，以其中阿魏酸和天麻素含量及配比变化为指标，研究不同制备工艺对方剂有效成分含量和配比的影响，以期为芎麻汤的新药创制及现代复方中药的质量控制、主效应的确定及配伍规律研究提供科学依据.

1 实验材料

1.1 实验仪器

高效液相色谱仪:Alletch Plus Chromatography HPLC;泵:Alletch 426 Plus Pump;检测器:LINEAR UV IS 201;工作站:N2010;微量进样器:7725i.

1.2 实验药品及试剂

川芎购自哈尔滨世一堂药材公司，经哈尔滨商业大学药学院杨玉山老师鉴定为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎;天麻购自哈尔滨三棵树中药材市场，经哈尔滨商业大学药学院杨玉山鉴定为兰科植物天麻Gastrodia elata BI.的干燥块茎.阿魏酸对照品(购自中国食品药品检验所，0773－200910);天麻素对照品(购自中国药品生物制品检定所，807－200904);色谱纯:HPLC用甲醇、乙腈(色谱纯，美国Dikma公司).

1.3 芎麻汤水煎液的制备

分别准确称取川芎药材20 g，天麻5 g.粉碎为粗粉.分别加入12倍量的蒸馏水浸泡45 min分别置于圆底烧瓶中，水浴加热(温度＜80℃)，至微沸(5～7个气泡/min).保持微沸状态煎煮40 min，4层纱布过滤，收集滤液，滤渣再按上述方法煎煮30 min.4层纱布过滤，收集滤液.合并滤液并浓缩至每毫升药液相当于原药材0.25 g，备用.

1.4 芎麻汤乙醇回流提取液的制备

1.4.1 川芎乙醇回流提取液的制备

准确称取川芎药材20 g，粉碎为粗粉，加入12倍量90%的乙醇，于低于80℃的温度条件下连续回流提取2次，每次提取3 h.8层纱布过滤，收集并合并滤液，减压回收乙醇进行浓缩，浓缩至每毫升药液相当于原药材 0.25 g，备用[2].

1.4.2 天麻乙醇回流提取液的制备

准确称取天麻药材5 g，粉碎为粗粉，加入8倍量10%的乙醇，于低于80℃的温度条件下回流提取3次，每次提取3 h.8层纱布过滤，收集并合并滤液，减压回收乙醇进行浓缩，浓缩至每毫升药液相当于原药材 0.25 g，置于冰箱中备用[3].

1.5 溶液的配制

阿魏酸对照品溶液:精密称定阿魏酸适量，分别置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释定容，摇匀，即得阿魏酸质量浓度为2.0 mg/mL的储备液.分别精密量取标准储备液适量，置于同一个容量瓶中用甲醇稀释成质量浓度分别为 0.025、0.05、0.10、0.20、0.40 mg/mL 的阿魏酸对照品溶液，置于冰箱(－20℃)保存.

天麻素对照品溶液:精密称定天麻素适量，分别置10 mL量瓶中，加水溶解并稀释定容，摇匀，即得天麻素质量浓度为2.0 mg/mL的储备液.分别精密量取标准储备液适量，置于同一个容量瓶中用水稀释成质量浓度分别为 0.10、0.15、0.20、0.25、0.30 mg/mL的天麻素对照品溶液，置于冰箱(－20℃)保存.

2 方法与结果

2.1 色谱分析条件

色谱柱:Symmetry C18柱(4.6 mm ×150 mm，5 μm);阿魏酸流动相:甲醇－1%冰醋酸水溶液(30∶70，V/V);流速:1 mL/min;检测波长:310 nm.天麻素流动相:乙腈 －0.05%磷酸水溶液(1∶99，V/V);流速:1 mL/min;检测波长:220 nm.柱温:室温.

2.2 系统适应性实验

分别取上述制备好的阿魏酸对照品溶液、川芎供试品溶液、天麻素对照品溶液和天麻供试品各20 μL，注入高效液相色谱仪测试.阿魏酸的保留时间为 10.8 min.天麻素的保留时间为 3.073 min，如图1、2所示.理论板数以阿魏酸计不低于5 000，相邻未知色谱峰与阿魏酸色谱峰的分离度大于1.5.

图1 阿魏酸对照品及川芎样品色谱图

图2 阿魏酸对照品及川芎样品色谱图

2.4 线性关系的考察

分别吸取上述对照品溶液20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积.以峰面积值(Y)对质量浓度(X)进行线性回归，得阿魏酸回归方程为:Y=70 380 667.90X+4 431 193.38，R=0.999 9.天麻素回归方程为:Y=61 234 880X+12 202 899.20，R=0.999 9.表明阿魏酸进样质量浓度在0.025～0.4 mg/mL范围内，天麻素进样质量浓度在0.10～0.30 mg/mL范围内，质量浓度与峰面积呈良好的线性关系.

2.6 精密度实验

取同一对照品溶液20 μL，按色谱条件，连续进样5次，结果阿魏酸和天麻素的RSD值分别为0.54%和 0.47%.

2.7 稳定性实验

取同一对照品溶液，于12 h内每间隔2 h测定一次，按色谱条件，分别进样20 μL.测得阿魏酸和天麻素的RSD值分别为2.33%和1.89%，对照品溶液在12 h内稳定.

2.8 重现性实验

取同一批样品5份，按色谱条件，分别各进样20 μL，测得阿魏酸和天麻素的RSD值分别为0.56%和0.62%.

2.9 回收率实验

取已测得质量浓度的样品溶液5份，分别与对照品标准溶液等量混合，依上述方法测定阿魏酸和天麻素的平均回收率分别为99.87%和100.13%，RSD值分别为0.89%和0.91%.

2.10 质量浓度测定

芎麻汤是由川芎和天麻按4∶1的比例组成.本实验对芎麻汤中的川芎、天麻进行单独提取，分别取已制备川芎及天麻水煎液和乙醇回流提取液供试品溶液，按色谱条件，取样20 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，确定阿魏酸及天麻素的峰面积，分别平行测定3次.确定不同工艺芎麻汤中阿魏酸、天麻素的质量浓度及其配比关系.研究结果发现，不同工艺提取的芎麻汤中阿魏酸、天麻素质量浓度发生了逆转性变化.传统水煎液中天麻素质量浓度高于阿魏酸质量浓度，而改用乙醇回流提取后阿魏酸质量浓度高于天麻素质量浓度.见表1.

表1 不同提取工艺对芎麻汤中阿魏酸、天麻素质量浓度及其配比结果

3 讨论

芎麻汤由川芎、天麻两味药组成.其中阿魏酸、天麻素为其主要活性成分.由于阿魏酸与天麻素属于极性不同的两类化合物，按照“相似相溶”原理，分别以90%和10%乙醇提取，阿魏酸和天麻素质量浓度最高，这与芎麻汤的传统水煎煮制法有较大差别[4].亦即其提取工艺发生了较大变化.这种情况普遍存在于传统方剂制成现代中药制剂的过程中[5].本文研究显示，采用不同提取工艺提取芎麻汤，不仅其中主要有效成分质量浓度发生了变化，且配比关系也发生了逆转性变化.

根据方剂学理论，同一处方，随组成药物量的不同，其功效也将发生变化.而药量的变化归根到底是药物所含活性成分的变化.中药的化学成分是方剂发挥疗效的根本，所以这种量和配比关系的变化，势必导致方剂药理作用的变化，甚至形成功能主治不同的新方剂.即可能造成方剂作用谱和/或主效应已发生改变.因此笔者认为，在现代中药的研制过程中(包括经方、时方、验方)，不仅要重视有效成分质量浓度的变化，还应关注各有效成分间的配比关系，并考虑到由此带来的方剂主效应可能发生的变化，不应一概按原方讨论组方原理，确定功能主治.同时医药法规对中药固体制剂质量控制要求除应控制最终剂型中君药主要成份含药量外，也应将君、臣等药有效成分之间的比例关系列入考察范围内.

[1]母景红.浅析传统中药和现代中药的区别与联系[J].中国药物经济学，2013，2:606－607.

[2]程 冀，季宇彬，李文兰，等.均匀设计法优选制备复方天麻滴丸的最佳工艺[J].食品与药品，2009，11(1):18－20.

[3]李文兰，戴 烨，季宇彬，等.高效液相色谱梯度洗脱法同时测定阿魏酸和天麻苷的含量[J].化学与粘合，2007，29(3):212－215.

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[5]孙源源，施 萍.借助中药配方颗粒推进中药国际化的对策研究[J].中草药，2013，44(8):929 －934.