畜禽血液采集及血清分离技术

刘 艳

(甘肃省张掖市甘州区动物疫病预防控制中心，734000)

近年来各级畜牧兽医部门，每年都需要对畜禽进行血样采集及血清分离工作，如血常规检查、血片制作、猪附红细胞体病检测、小反刍兽疫抗体检测、病原学检查，尤其是一年数次的口蹄疫、禽流感和新城疫等抗体（免疫抗体、感染抗体）监测及范围广泛的布鲁氏杆菌病检疫监测等。在工作中发现，由于采集方法错误，血样保存环境不当，导致技术人员在采血及分离血清时，时常有失败现象发生，如溶血、分离不出血清、血清如胶冻样物质以及腐败等情况发生，从而反复采血而引起养殖场户的反感、不配合甚至拒绝，也造成人财物的浪费，为此，笔者依据从事多年的血样采集和血清工作经验，在畜禽采血和分离血清技术方面的一些做法与大家探讨。

1 材料与方法

1.1 供试材料

保定用牛缰绳、麻绳、牛鼻钳，医用镊子、止血钳、医用胶贴、医用止血带、剪毛剪，70 %～75 %酒精、5 %～10 %碘酊、灭菌干棉球，消毒18#、16#、12#及9#针头，采血管或洁净干燥的青霉素瓶、一次性静脉采血真空管及针头一次性注射器，工作服、帽、口罩、一次性手套、胶鞋、鞋套，采血登记表、记录用笔、玻璃铅笔及冷藏箱、消毒液（用于工作人员及器械消毒）。

1.2 采血方法

1.2.1 牛颈静脉采血法：穿戴好工作服、帽、口罩、胶鞋及手套等，用缰绳保定好牛，如牛跳动不安，需要夹上牛鼻钳；采血部位：其解剖位置为牛颈静脉沟；采血部位先用剪毛剪剪毛后，用10 %碘酊棉球消毒，再以75 %酒精棉球脱碘消毒；如在颈部左侧采血（以左侧为例），用左手的食指、中指及无名指（或半握拳）压住采血部位稍下（向心）端的颈静脉，使静脉回流受阻，静脉怒张，这时用右手拇指、食指及中指持紧消毒后并干燥的18#针头，用飞针方式扎入颈静脉（如用真空采血方法，因针头尖锐且较细，轻轻即可刺入颈静脉，当针头后方见血后，应迅速将连接针头的另一端插入真空管），血液便可从针头流出（或滴出），接血时采血管应稍倾斜，使血液沿管壁徐徐流入采血管中，切勿使血液直接滴入采血管底部，以免产生气泡和因红细胞破裂而引起溶血。一般采集5 mL 血样即可，然后迅速拔出针头，立即用75 %酒精棉球按压止血5 s 左右，再用10 %碘酊消毒伤口。采血完毕后，将采血管平放或斜置，待血液完全凝固后再放入冷藏箱。

1.2.2 牛尾中静脉采血法：牛尾静脉位于牛尾腹侧面的中心线皮下位置，因离尾根大约20 cm 处静脉较粗且较浅，所以此处为采血最佳部位。助手将牛牵好，采血者左手托起牛尾巴，右手对采血部位消毒后，持带有5 号针头的一次性注射器，右手食指控制针头深度，由下向上垂直刺入牛尾腹侧中心线位置约0.5 cm 见有回血即可抽血，一般采用5 mL 即可，拔出采血针，用酒精棉球压一下针孔防出血。

1.2.3 羊的血液采集方法：人骑在羊的肩胛部，两腿稍用力，使羊站立，两手握住羊头，轻轻使羊头弯于一侧并使下颚上抬，以便于采血者在另一侧操作；采血部位是：羊的颈静脉；采血部位剪毛消毒后，用12#针头，轻轻刺入颈静脉即可，也可用较为方便的真空采血法。羊也可采用侧卧保定的方法。其它与牛的颈静脉采血方法相同。

1.2.4 猪的耳缘静脉采血方法：如果是体型较大的公（母）猪及大中猪的采血，将结实的麻绳系个活扣，套在猪的上颚犬齿上，将麻绳的另一头系紧于圈门的钢筋（或其它较为牢固的物体）上，绳子拴短一些，使猪的头颈部与水平面呈30 度以上角度，以减少猪的活动范围；助手用止血带扎紧（或用手握紧）猪耳根部并帮助保定，采血者挑选怒张较好的耳缘静脉，经剪毛消毒后，用真空采血针头（或12#针头）刺入血管后，用医用胶贴固定针头，以防猪晃动导致针头移位；如是小猪，可采用一人抱于怀中的保定方法；无论大小猪，也可侧卧保定进行；其它与牛的颈静脉采血相同。

1.2.5 猪的前腔静脉采血方法：因猪体格不同，前腔静脉的血管粗细及深浅也不同，所以，使用针头的规格是不一样的；体型较大的公（母）猪，宜选用16～18#、长度为50 mm 针头；30 kg 以上的中大猪，选用12～16#、长度40 mm 针头为宜；10 kg～30 kg小猪，可选用9～12#、长度25 mm 针头；10 kg 以下仔猪，用9#、长度20 mm 针头。保定方法与猪耳缘静脉采法相同（也可采用侧卧保定方式）；采血的解剖部位是：胸骨柄、胸头肌与胸骨舌骨肌的起始部位所形成的凹陷部。猪的前腔静脉，越向头部，静脉分布越浅表，但随着分支增多，也逐渐变细；而越是向心端血管越粗，但分布越深。因此，采血部位的选择要适当，小猪的采血部位应向向心端近一些为好，而公（母）猪及中大猪血管较粗大，可稍靠前一些。20 kg 以下的小猪在两前肢与气管交汇处采血为宜，体型较大的公母猪及20 kg 以上中大猪，可选在颈部最低凹处采血较好；术部常规剪毛消毒后, 采血者手持一次性注射器（或真空采血器），垂直稍偏向胸腔方向刺入（大中猪，注射器与头部呈120°左右进针），同时做抽吸动作，调整进针深度,见有回血即慢慢抽吸，采足需要的血量后，用灭菌棉球紧压针孔处，迅速拔出针头，压迫5 s 左右，防止出血，再用碘酊消毒伤口，其它与牛的颈静脉采血相同。

1.2.6 禽翅静脉采血法：将禽侧卧于消毒后的塑料布上，助手的一只手抓紧禽的后脚骨部分，另一只手压在禽的背部将其保定好，采血者左手握紧（或止血带扎住）鸡翅根部，使禽翅静脉怒张，用真空采血针头轻轻刺入，当采出血时，要注意扶好针头，以免刺穿血管；如用一次性注射器抽血方式，应掌握吸取速度，速度过快会将翅静脉吸扁而不能采出血；其它与牛颈静脉采血相同。

1.2.7 禽心脏采血法：如禽已处于频死期或认为有必要时，可进行心脏采血。禽采用右侧卧方式保定（左侧向上）；采血部位是：禽胸骨脊前端与背部下凹陷处连线的中点；常规消毒后，根据禽的大小，选用12～18#、长度为5 cm 的针头，用一次性注射器或真空采血管采血，针头垂直或稍向前方进针2 cm～3 cm，抽吸便可采出血液。

1.2.8 犬的采血方法：犬的采血安全很重要，首要是防止犬咬伤人。用质量好、直径1 cm 左右的钢筋，焊一个尺寸放大了的、似牛鼻钳样式的保定钳；焊接规格为：前端的圆弧张开到最大时，直径约30 cm 左右，合拢后呈长约25 cm、宽约10 cm 的椭圆形，后面的力臂部分长度不小于1.2 m，保定钳整体长度应不小于1.5 m（以保持人与犬之间的安全距离），在保定钳的圆弧部分套上塑料胶管（以减少对犬的伤害）；保定犬时，应在犬主人的配合下，夹在犬第2 颈椎处的颈部，用力将犬压在地上（尤其是保定较为凶猛的犬时要用力，但需注意力度和方法，防止犬窒息），保定员及犬主按住躯体及前后肢（或用绳子拴住）；采血部位是：犬的颈静脉或后肢胫部下1/3 外侧浅表皮下的隐静脉，经常规剪毛消毒后采血即可。

1.3 血样保存及血清分离技术

将采集的血样趁未凝固前平放或斜置，以增加血清析出面，严禁晃动采血管，以防溶血；待血液完全凝固后，将采血管置于冷藏箱内，冬季置于较为温暖的地方，切忌冻结；夏季置于阴凉处，以防腐败。

采集的血液凝固后,在室温下12 h 内即可析出血清，在炎热的夏季，3 h～6 h 即可充分析出血清，此时应及时将血清移出，以防腐败及因晃动采血管等因素而造成溶血现象；有时血清析出量少或未析出血清的，可把凝固后12 h 以上的全血，置于离心机内，离心分离血清（3000 r/min，离心时间为2 min），使血清析出，待血清析出后，用移液器小心（移液头尖端部勿触及凝血块，以防影响血清质量）将血清移入另一洁净、干燥、无菌试管中。分离后得到的血清，应尽快送到实验室进行检测，如果不需要尽快检测血清需要尽快冷冻保存。

1.4 常见不良“采血法”导致的结果

1.4.1 不剪毛、不消毒导致皮毛上的杂物及病原微生物等污染针头、掉入采血容器，影响血清质量，造成动物发生感染，而造成养殖户的损失。

1.4.2 用自来水煮沸消毒的针头不经干燥、不用力甩净针头内的水、或不用灭菌生理盐水冲洗，因为水与血液是不相容的，采集的血液很容易出现溶血现象。

1.4.3 用1 个针头采多头只畜禽导致血清质量差及溶血，也会造成畜禽间病菌交叉感染，导致畜禽感染患病。

1.4.4 用酒精浸泡后的针头直接采血容易造成溶血。

1.4.5 个别人员专业技术素质差，采不出血就用采血管直接在出血的皮肤处接、或未剪毛时在毛尖上接血，更有甚者，将畜禽屠宰后用采血管接，这时的组织液、各种杂物随同血液进入采血管，这样的血液含有大量的微生物、杂质等，会导致血液受到污染，发生溶血，分离出的血清呈胶冻样，这样的“血清”是不能用的。

2 讨论与分析

2.1 采血人员要合理分工如采血员、保定员、记录员、器械递送员等，不要慌乱，不可漏采和重复采，注意人畜安全。

2.2 采血时间应在早晨喂饲前或停食(但要保证充足的饮水)后6 h 进行，以免出现血清混浊等质量问题。

2.3 使用一次性注射器、连试管式的真空采血器，避免因器械消毒不严，操作人员直接接触动物血液，导致受到病原微生物感染，使人畜患病。

2.4 在采血和分离血清时做到①采血针头和采血管洁净、干燥、无菌；②采血过程中确保人畜安全；③采血时按“畜（禽）采血登记表”逐一详细登记；④采血时必须无菌操作，不溶血、无污染、无腐败；⑤做到表、号、血、畜四统一，以防混淆。

2.5 牛尾中静脉采血法的优点是对牛应激反应微小，牛不需要特殊的保定, 此种操作方法相对比较安全，不影响乳牛的产奶量；操作简便，采血人员容易掌握；具有单人即可操作、采血快速、保定简单、防止人畜受伤等优点。缺点是不适用于犊牛的血液采集，会造成犊牛尾部血管的永久性损伤。

2.6 通过实践猪前腔静脉采血法较耳缘静脉采血法更为方便、快捷。

2.7 市面上出售的“捕猪器”存在的缺点：多为细钢丝绳材质，质地坚硬强度大，对猪的牙齿、牙龈、口腔粘膜等部位的损伤大，会影响猪几天甚至十几天的生长发育，有的还导致感染死亡，因此，建议改用质地结实，相对柔软的麻绳来进行保定较好。