猴耳环浸膏对豚鼠过敏性哮喘的治疗作用

符路娣 潘卫松，2 谭滴清，3 王萧 肖瑛陈土地

（1.广州中医药大学,广州510405；2.广州市药品检验所,广州510160；3.华南农业大学，广州,510642；4.暨南大学,广州510632；5.广东药学院,广州510006)

支气管过敏性哮喘（哮喘）是免疫刺激引起嗜酸性粒细胞、T淋巴细胞和组织胺等多种炎性细胞或炎性介质的释放，导致气道产生炎症反应，这种慢性炎症导致气道高反应性和广泛多变的可逆性气流受限，引起反复发作性的哮喘、气急、胸闷或咳嗽等症状，气道高反应性又可加重哮喘。OVA诱导豚鼠哮喘建立豚鼠哮喘模型是研究急性炎症治疗的常用模型，其主要特点是只有糖皮质激素对其有效，而肥大细胞膜稳定剂对该模型没有治疗作用。猴耳环水提物抗炎作用在临床用药治疗实践中已得到证实，但目前研究对其药理作用的研究及开发尚不全面。据于猴耳环的众多功效，本研究采用OVA诱导豚鼠哮喘建立豚鼠哮喘模型，观察猴耳环浸膏对哮喘豚鼠相关指标的干预调节机制，探讨猴耳环的抗炎作用可能的机制。

1 材料和方法

1.1 实验材料 普通级雄性的Hartley豚鼠50只，体重250～350g，由广州中医药大学实验动物中心提供；生产许可证号：SCXK（粤）2008-0020；使用许可证：SYXK（粤）2008-0001。

1.2 药物与试剂 中药猴耳环浸膏，密度为

1.1641g?mL-1（批号：130903，含没食子酸5.1%），由广州莱泰制药有限公司提供。地塞米松（批号：41211251）（规格：1ml:5mg:10支），天津金耀集团湖北天药药业股份有限公司生产；卵清蛋白（OVA），由美国Sigma公司生产、广州威佳生物科技有限公司提供。IL-4、IgE和NO试剂盒、均由广州有田生物科技有限公司提供。

1.3 动物分组、造模及治疗给药

1.3.1 动物分组：将50只雄性豚鼠依体重按随机表分成5组：阴性对照组（生理盐水，n=10），阳性对照组（地塞米松，n=10）、猴耳环浸膏高剂量组(n=10)、猴耳环浸膏中剂量组（n=10）、猴耳环浸膏低剂量组（n=10），每组10只。

1.3.2 动物模型的制备及给药 购回豚鼠适应性喂养一星期后，各组均参照卵清蛋白致豚鼠哮喘的方法[1]，实验第8天用10%卵清蛋白生理盐水溶液腹腔注射豚鼠，每只1ml。各组分别于致敏后第7天起，每天下午灌胃给药。阴性对照喂生理盐水；阳性对照喂地塞米松，剂量为0.1mg/100g；猴耳环浸膏高剂量组采用原液的1/2浓度给药，剂量为1ml/kg；猴耳环浸膏中剂量组采用原液的1/4浓度给药，剂量为1ml/kg；猴耳环浸膏低剂量组采用原液的1/8浓度给药，剂量为1m l/kg；第14天将致敏豚鼠放在半密闭塑料箱内，用雾化器喷入0.05%OVA，40s/次/只，连续4次；第15天，喷入1%OVA溶液超声雾化激发2次，第一次2min/次/只，过4h后5min/次/只。

1.4 采集标本及指标检测 第16天（动物末次激发24h后）心脏采血。麻醉处死豚鼠，对肺部进行肺泡灌洗，肺泡灌洗方法：分离气管使气管暴露，在环状软骨下端1cm处剪一个V型切口，做气管插管，插入2mm长1.5cm的无菌塑料管，每次用2ml生理盐水进行气管肺泡灌洗，灌洗两次，将灌洗的回收液置于洁净塑料瓶内以待下一步的白细胞计数和嗜酸性粒细胞计数。打开胸腔取出小片肺组织用10%的福尔马林溶液固定以做病理切片。

表1猴耳环浸膏不同剂量对血液中IL-4、IgE和NO含量的比较（X±s，n=10）

1.5 血液细胞因子IL－4、IgE和NO水平的检测采用酶联免疫法检测。

1.6 统计方法SPSS15.0软件进行统计并用t检验进行组间比较分析，结果以（）表示。

2 结果

猴耳环浸膏不同剂量对血液中IL-4、IgE和NO含量的影响。

由表1可见，阳性组与空白组的IL-4水平相比，无差异无统计学意义；中剂量组IL-4水平显著低于于空白组IL-4水平（P<0.01），其结果有显著性差异。

阳性组、高剂量组、中剂量组和低剂量组的IgE水平与空白组的IgE水平相比较，差异无统计学意义（P>0.05）。低、中、高剂量组NO水平显著低于空白组NO水平(P<0.01)，结果存在极显著差异统计学意义。

3 讨论

支气管哮喘是一种气道慢性炎症性疾病，伴有嗜酸性粒细胞增多、杯状细胞肥大、粘液分泌增多及对吸入变应原和非特异性刺激的高反应等特点[2]。在过敏原等的刺激下由于炎性因子的激活引起呼吸道平滑肌的收缩，促进粘液分泌，改变血管通透性导致气道变应性和气道炎症的形成[3]。IL-4是Th2细胞分泌的促进IgE合成的最主要细胞因子，而IgE的合成分泌受到Th细胞分泌的细胞因子严格控制。IgE引起肥大细胞脱颗粒引起即刻型气道反应的重要原因，因此IL-4在哮喘炎性过程起着十分重要的作用。此外IL-4还能促进T、B细胞增殖和诱导粘附分子表达。IL-4不仅可以促进T细胞与B细胞的相互作用，还可以使B淋巴细胞的抗体应答向IgE类型转化，但IL-4不能单独诱导B淋巴细胞产生IgE[4]。

当结合在肥大细胞或噬碱性粒细胞上的IgE与相应的抗原结合时，这些细胞就释放化学活性物质而引起一系列速发型变态反应。Melhop认为虽然血清IgE水平增高与哮喘有关，但对哮喘的发生、发展并非绝对必需，哮喘的发病机制还包含其他免疫学机制。

哮喘属于中医学哮证范畴，其病机为宿痰内伏于肺，复加外感、饮食、体虚病后等因素，以致痰阻气道、肺气上逆所致。久病迁延，正气渐虚，正虚邪实，肺脾肾三脏受损，脏器功能失调，瘀血阻络而致病情反复难愈

本研究中，猴耳环浸膏对哮喘豚鼠没有体现出治疗作用，但对IL-4和NO的变化产生了积极的影响。以上结果提示，猴耳环浸膏的抗炎作用可能不是通过糖皮质激素作用通路而起作用，极有可能是通过对于炎症细胞因子的调节作用而发挥积极的抗炎作用的。

[1]张徐.固本平喘汤治疗支气管哮喘44例[J].河南中医，2004，24(11)：51.

[2]兰小玲，黄跃，杨广林.《猴耳环消炎片治疗咽喉炎、扁桃腺炎200例疗效观察》[J]实用临床医学2007，8(2):89-92.

[3]Xia-Yu Guo;Nai-LiWang;LiBo.Chemicalconstituents from Pithecellobium clyPearia and theireffectson T lymPhoeytesproliferation，[J].JournalofChinece PharmaceuticalSciences，2007(03)；208-213.

[4]林耀广,主编.《现代哮喘病学》，中国协和医科大学出版社，197-