催乳汤对产后缺乳大鼠乳腺的影响

董世起，李欢欢，卞艺斐，范迎赛，Naw ras Hamdan，王婷婷，高宗勤，刘钟杰

（中国农业大学动物医学院临床兽医学系中兽医教研室，北京100193）

如果在母畜分娩后出现乳汁不足或无乳，仔畜因吃不到乳汁而表现饥饿、逐渐消瘦，如不及时采取治疗措施，往往导致仔畜最终死亡（刘小艳，2013；万鹏等，2013）。因此本病的防治可以提高仔畜的成活率，对本病开发新的治疗药物，具有巨大的应用前景和经济效益（张明海，2012）。本研究尝试根据传统中医理论，以调理气血，通络下乳为主要原则自主拟定方剂（毛成荣，2011），以SD大鼠产后缺乳模型为实验对象，研究催乳汤对产后缺乳SD大鼠乳腺的结构和功能的影响，探索治疗产后缺乳的新药及其治疗效果。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验药品 甲磺酸溴隐亭片，由匈牙利吉瑞大药厂生产，生产批号：T33129A；方剂所需中药药材均购自北京同仁堂大药房马连洼店；实验用SD大鼠由北京军事医学科学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK(军)2012-0004，所有SD大鼠均为SPF级，体重范围为215g-235g。

1.1.2 催乳汤制备 本研究自拟的催乳汤由黄芪、党参、当归、王不留行、白术、甘草组成。用电子天平分别称取所需中药药材放于陶瓷煎药罐中，加入药重量10倍体积的蒸馏水，浸泡30分钟后大火煮沸再调至小火煎煮30分钟，将药液用8层脱脂细纱布过滤到大烧杯中后第二次加入8倍药量体积的蒸馏水，直接大火煮沸后再调至小火煎煮20分钟后，将药液用8层脱脂细纱布过滤倒出，合并两次过滤药液，用24层脱脂细纱布过滤，过滤后用双层分析滤纸加压过滤，最后收集药液的过滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至生药浓度1g/ml，4℃保存待用。

1.1.3 溴隐亭溶液配制 取甲磺酸溴隐亭片（2.5mg）32片置于棕色试剂瓶中，量取100mL烧开后冷却至室温的蒸馏水，充分溶解即制得0.8mg/mL的溴隐亭药液，4℃避光保存备用。

1.2 实验方法

1.2.1 实验动物分组及给药 将未经孕产SD大鼠母鼠和公鼠按照3:1比例自然配种，分娩后随机将母鼠分成3组，每组母鼠10只，调整每只母鼠带仔鼠12只。3组分别做为空白对照组、缺乳对照组和汤剂治疗组。每天早晚对各组母鼠按以下药量灌胃：空白对照组：2ml蒸馏水，分两次1ml进行灌胃；汤剂治疗组：1m l溴隐亭溶液+1ml催乳汤；缺乳对照组：1ml溴隐亭溶液+1ml蒸馏水。

1.2.2 催乳汤对乳腺泌乳功能的影响 本试验采用称量母鼠哺乳前后全窝仔鼠重量的方法，来代替计算母鼠的泌乳量，即在母鼠哺乳前后，对全窝仔鼠进行称重，哺乳后全窝仔鼠重量减去哺乳前全窝仔鼠重量，就是母鼠一次泌乳量。

1.2.2.1 母鼠每小时泌乳量比较 每天早晨灌胃给药2小时后，将母鼠和仔鼠进行分离，称量每窝仔鼠的总重，记为W1；仔鼠和母鼠隔离4小时后，再次称量每窝小鼠的总重，记为W2；哺乳1小时后第三次称量每窝仔鼠的总重，记为W3。则：母鼠每天每小时泌乳量为：W3-W2+(W1-W2)/4

连续7天称量母鼠的泌乳量，第七天称量结束后泌乳量称量实验结束。缺乳对照组在实验后期有母鼠出现仔鼠全窝死亡，记该母鼠泌乳量记为0。

1.2.2.2 仔鼠每窝净增重比较 仔鼠每窝净增重为：W3(Ⅶ)-W1(Ⅰ)，其中，W3(Ⅶ)是最后一天的仔鼠窝总重W 3，W1(Ⅰ)是第一天的仔鼠窝总重W1。

1.2.3 催乳汤对乳腺结构的影响

1.2.3.1 乳腺湿重的比较 最后一天称重结束后，将母鼠采用断头法处死，采集母鼠腹部两侧乳腺，称量并记录两侧乳腺的总重量。

1.2.3.2 乳腺结构的比较 乳腺称重后采取乳腺同一部位的组织，用4%中性多聚甲醛溶液固定，固定24小时后制作组织蜡块，采用HE染色法比较观察乳腺结构变化。

1.3 结果处理 对获得的各组数据，使用IBM SPSSStatistics20版软件进行单因素方差分析，多重比较时，如果方差齐则采用LSD法，如果方差不齐则采用Tamhane法，以P<0.05认为差异具有统计学意义（黄波，2012）。实验结果用平均值±标准差(x±s)表示（小数点后保留两位有效数字）。对组织切片用奥林帕斯显微镜及成像系统（OLYMPUSCX21）进行观察，并进行拍照保存。

2 实验结果

2.1 催乳汤对乳腺功能的影响

2.1.1 母鼠每小时泌乳量比较 母鼠每小时泌乳量比较见表2-1。如表2-1所示，对于各组内，缺乳对照组的每小时泌乳量自第三天起急剧下降，到第七天的时候每小时泌乳量极小，母鼠泌乳几乎停止；汤剂治疗组的母鼠每小时泌乳量在第三天后略有下降，从第五天呈上升趋势。对于各组间的比较，汤剂治疗组的每小时泌乳量比缺乳对照组高，但低于空白对照组。统计学分析显示，缺乳对照组的每小时泌乳量与空白对照组相比在第三天的降低具有极显著性（P<0.01），而汤剂治疗组的每小时泌乳量在第三天的降低仅具有显著性（P<0.05）；与缺乳对照组相比，汤剂治疗组的每小时泌乳量在第五天出现了显著性升高（P<0.05），自第六天起每小时泌乳量的升高具有极显著性（P<0.01）。

表2-1 母鼠每小时泌乳量比较（n=10）

2.1.2 仔鼠每窝净增重比较 仔鼠每窝净增重比较见图2-1。如图2-1，经过7天的治疗，汤剂治疗组的仔鼠每窝净增重比缺乳对照组高，但低于空白对照组。统计学结果显示，与缺乳对照组相比，汤剂治疗组的仔鼠每窝净增重具有显著性增高（P<0.05）。

2.2 催乳汤对乳腺结构的影响

2.2.1 母鼠乳腺（腹部）重量比较 母鼠乳腺（腹部）重量比较见图2-2。如图2-2，经过7天的治疗，汤剂治疗组的母鼠乳腺（腹部）重量明显高于缺乳对照组，但低于空白对照组。统计学结果显示，与缺乳对照组相比，汤剂治疗组的母鼠乳腺（腹部）重量具有显著性增加（P<0.05）。

图2-1 仔鼠每窝净增重比较（n=10，单位：g）

图2-2 母鼠乳腺（腹部）重量比较（n=10，单位：g）

图2-3 母鼠乳腺（腹部）结构比较

2.2.1 母鼠乳腺（腹部）结构比较 母鼠乳腺（腹部）结构比较见图2-3。如图2-3，相比正常对照组的泌乳期乳腺，缺乳对照组的乳腺组织严重萎缩，大量增生的结缔组织、脂肪组织取代了正常乳腺组织的位置，乳腺小叶面积明显减小，小叶内腺泡腔明显变小，小叶内和边缘可以明显看到大量的取代脂肪细胞。相比缺乳对照组，汤剂治疗组的乳腺内乳腺组织具有恢复明显，可以见到乳腺小叶面积明显变大，小叶内腺泡大量增生，腺泡腔明显大于缺乳对照组，部分小叶内腺泡腔恢复到正常水平，小叶内较少见取代脂肪细胞，部分小叶边缘可见取代脂肪细胞。

3 分析与讨论

SD大鼠的母鼠泌乳是催乳素依存型调节，乳腺组织在催乳素的作用下分泌乳汁并排入乳腺管内（唐立刚，2012）。溴隐亭可以直接激活多巴胺受体而抑制催乳素的分泌（马爱团等，2006），因此，本研究采用溴隐亭阻止和减少乳汁的分泌，通过母鼠每小时泌乳量和仔鼠每窝净增重的数据分析，证明获得了缺乳效果明显的产后缺乳模型。

中医认为乳汁是由气血津液化生，资于冲任，乳汁减少或不足是由于气血亏虚、津液不足或因乳脉不行而致（刘小艳，2013）。本研究中催乳汤采用的是调理气血，通络下乳相结合的传统产后缺乳治疗方法。中药的治疗则侧重于综合调整机体的生理状态，通过调整恢复组织器官的功能而产生治疗作用，催乳汤要产生临床明显的泌乳量恢复效果，必须等到机体生理恢复而增加的泌乳能力大于溴隐亭的抑制力后。故而汤剂治疗组母鼠的每小时泌乳量在第三天后略有下降，在第五天比缺乳对照组显著性升高，此后呈极显著性升高，说明本研究的催乳汤可以显著提高产后缺乳母鼠的泌乳量。而汤剂治疗组的仔鼠每窝净增重显著大于缺乳对照组，也充分说明了本研究的催乳汤可以显著提高产后缺乳母鼠的泌乳量，增加仔鼠的体重。母鼠每小时泌乳量和仔鼠每窝净增重两项的统计分析结果高度一致，说明催乳汤能够恢复产后缺乳母鼠乳腺的功能。

缺乳对照组的母鼠乳腺组织逐渐萎缩，停止分泌的腺组织由增生的结缔组织、脂肪组织取代，乳腺重量极显著降低，说明产后缺乳的母鼠乳腺已经逐渐向静止期乳腺结构转化。经过催乳汤治疗的汤剂治疗组的母鼠乳腺组织明显恢复，部分腺泡腔恢复正常，乳腺重量比产后缺乳组明显增加，说明催乳汤具有恢复产后缺乳母鼠乳腺结构的功能，和之前催乳汤能够恢复产后缺乳母鼠的乳腺功能相一致。

由于催乳素的生理作用是促进泌乳，维持泌乳期乳腺的结构，因此，以上分析提醒催乳汤可以明显提高产后缺乳母鼠的催乳素水平，这一推断需要进一步的实验来进行验证。

4 结论

本研究中的催乳汤显著提高了产后缺乳母鼠的泌乳量和仔鼠净重量，明显恢复了产后缺乳母鼠的萎缩乳腺结构，能够明显恢复产后缺乳母鼠的乳腺功能和结构，能够用于产后缺乳证的治疗。

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