黄芩对制剂微生物限度检查方法的影响

朱广平 徐晓玲

摘要：目的 探讨黄芩抑菌作用对制剂微生物限度检查方法的影响，同时建立平哮合剂微生物限度与控制菌的检查方法。方法 采用常规法对中药制剂进行微生物限度方法验证，采用直接接种法进行控制菌方法验证。结论 黄芩的抑菌作用对制剂微生物限度检查的影响与制剂中黄芩的浓度有关，平哮合剂通过试验未见影响。结果 平哮合剂可用常规法进行微生物检验。

关键词：黄芩；微生物限度方法驗证；平哮合剂1仪器和材料

1.1 仪器

DNP-9082电热恒温培养箱和MJX-150霉菌培养箱（上海申贤仪器设备厂）、YXQ.SG41.280手提式消毒锅（上海医用核子仪器有限公司），100级洁净工作台。

1.2 试剂

培养基：营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、改良马丁培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、MUG、培养基ｐＨ７．０无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液。上述除供试品外均由北京三药科技开发公司生产，适应性检查均符合２０１０年版《中国药典》一部附录要求，可用于微生物限度检查。供试品平哮合剂 (批号：130527)，江苏省中医院配制。菌株：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌验证、黑曲霉，以上由南京市药检所提供，实验所用的菌株均为第3代。

2方法和结果

2.1 供试液制备

吸取供试品10ml，加入pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液90 ml，摇匀，作为1:10供试液。

2.2 菌液制备

接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18~24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于23～28℃培养24~48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至相应浓度制成每1ml含菌数为30～100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中,培养5~7天，加入3~5ml 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的孢子悬液。

2.3 微生物限度方法验证

2.3.1 试验组

按照２０１０年版《中国药典》一部附录要求，取供试液１ml，分别加入试验菌液１ml，立即倾注１５ml相应培养基，平行制备２个平皿，待凝固后置规定温度培养，细菌培养３ｄ，霉菌培养５ｄ，观察结果，记录菌落数。

2.3.2 菌液组

按照２０１０年版《中国药典》一部附录要求，每平皿分别加入试验菌液1ml，立即倾注琼脂培养基15ml相应培养基，待凝固后相应温度条件下倒培养，计数。每株试验菌平行制备2个平皿。

2.3.3 供试品对照组

按照２０１０年版《中国药典》一部附录要求，取供试液1ml，平行制备2个平皿，立即倾注相应培养基15ml，凝固后于相应温度条件下培养，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。

根据下式计算回收率，结果见表１。

回收率（％）＝（实验组平均菌落数－供试品对照组平均菌落数）／菌液组平均菌落数×１００％。

每种试验菌进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收。

2.3.4 回收率验证结果

回收率均高于70%。

2.4 控制菌验证方法

1ml大肠埃希菌（含菌数为10～100cfu），加入100ml胆盐乳糖培养基中，经35~37℃培养24小时。

2.4.1 试验组

取供试液10ml及10-100cfu的大肠埃希菌液加入100ml胆盐乳糖增菌培养基中检查，35℃-37℃培养18h-24h，取上述增菌液0.2ml加入5mlMUG试管中，置35℃-37℃培养5h-24h，观察荧光，再加入靛基质试剂观察结果。

2.4.2 供试品组

与试验组同法，不加阳性菌液

2.4.3 阴性组

取pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml，加入100ml胆盐乳糖培养基中，后面与供试品组同法操作。

2.4.4 空白组

取100ml胆盐乳糖培养基，经35~37℃培养24小时后，后面同前。

2.4.5 控制菌验证结果

3讨论

制剂对微生物限度检验时抑菌作用的产生，与制剂中的中药材品种以及该品种的浓度有关，平哮合剂中黄芩的生药浓度为0.05g/ml，因为浓度较低，其抑菌作用未对微生物检验方法产生影响，可以用常规法检验。

[参考文献]

[1]赵敏,谭钢文,唐小异,等．十种中药提取物与抗生素合用对铜绿假单胞菌最小抑菌浓度影响的体外实验[J]．湖南师范大学学报(医学报)，2011，8(4):80-82．

[2]国家药典委员会．中国药典2010年版[S]．一部．北京：中国医药科技出版社，2010:附录79-88．