EMT与Ⅱ期结直肠癌复发转移的相关性分析

曹传培

EMT与Ⅱ期结直肠癌复发转移的相关性分析

曹传培

目的 探讨E-cadherin、vimentin与Ⅱ期结直肠癌(colorectal cancer,CRC)复发转移的关系。方法 选取Ⅱ期结直肠癌复发转移与未复发转移患者的组织切片，采用免疫组化技术检测E-cadherin、vimentin的表达情况。结果 E-cadherin、vimentin表达与复发转移有关。结论 E-cadherin、vimentin可能作为Ⅱ期CRC复发转移的分子标志物。

Ⅱ期结直肠癌；上皮间质转化；复发转移；预后

(ThePracticalJournalofCancer,2014,29:1538～1539)

Ⅱ期(T3-4N0M0) CRC占全部CRC的40%，5年生存率为70%～85%，仍有近20%的Ⅱ期CRC患者在根治术后会出现复发转移[1-2]。TNM分期是判断CRC预后的良好依据，因患者存在个体异质性，所以即使同一分期的患者实行规范的治疗后仍可能有不同的预后。而复发转移是造成Ⅱ期CRC预后差的主要原因，研究Ⅱ期CRC患者复发转移的高危因素及相关分子标记物可以补充分期系统的不足，并对基于肿瘤个体生物学特征的治疗提供理论依据。

上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是肿瘤发生侵袭转移的早期事件而受到广泛关注。EMT是指在特定情况下上皮细胞向间充质细胞转化的现象。EMT可以破坏肿瘤细胞间连接，使细胞间粘附性减弱，迁移能力增强[3]。EMT重要标志为E-cadherin表达下调及Vimentin表达上调。

本实验旨在探索EMT在Ⅱ期CRC复发转移中的作用，为寻找结直肠癌诊断治疗新靶点提供理论依据，并指导临床个体化治疗。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取2003年1月-2007年12月在九江学院附属医院行根治术的Ⅱ期结直肠腺癌患者86例。入选标准：①依据TNM分期标准，均为Ⅱ期；②术前未接受放化疗；③接受标准根治性手术治疗；④术后复发转移情况明确；⑤病历资料完整。

1.2 主要试剂

一抗：E-cadherin(SC-8426)及Vimentin(BM0135)购自武汉博士德公司，DAKO Real Envision anti mouse/rabbit 二抗检测系统购自基因公司，进口羊血清工作液、一抗稀释液购自中杉金桥公司。

1.3 免疫组织化学染色

采用Envision法检测E-cadherin、vimentin的表达，将组织切片以4 μm厚度切片置于60 ℃恒温箱过夜；二甲苯常规透明后以100%-100%-95%-95%-90%-80%-70%各级乙醇浸泡10 min,超纯水浸泡5 min；高温高压抗原修复，从排气阀开始排气时算起3 min，自然冷却；超纯水浸泡2次，PBS浸泡2次，3 min/次，以洗去修复液；免疫组化油笔圈住组织防漏，3%过氧化氢室温封闭10 min；放入PBS浸洗3次，5 min/次；滴加封闭血清封闭10 min；

一抗孵育：用吸水纸吸去血清，加稀释的一抗溶液(1∶100)，37 ℃孵育1 h；倾去一抗，PBS浸洗3次，5 min/次；滴加Dako二抗，将组织完全覆盖，平放于湿盒，室温孵育30 min；倾去二抗，PBS浸洗3次，5 min/次；DAB显色；苏木精复染2 min，超纯水中返蓝1 h；70%-80%-90%-95%-95%-100%-100%乙醇；二甲苯透明10 min；中性树胶封片；光镜下观察结果。

1.4 免疫组化染色结果观察及判断

采用光镜下半定量法对阳性细胞染色强度及范围进行判定：以染色强度分为：无(0分)；浅黄色(1分)；棕黄色(2分)；棕褐色(3分)。以阳性细胞数比例分为：阴性(0分)，<10%(1分)，10%～50%(2分)，51%～75%(3分)，76%～100%(4分)。免疫组化染色结果为上述两项评分之积，<6分为低表达组，≥6分为高表达组(Vimentin表达于细胞间质，将计数阳性细胞比例改变为估算阳性细胞表达面积百分比，计分方法同上)。

1.5 统计学分析

应用SPSS 13.0软件对结果进行统计学分析；分析各分子表达量与复发转移的关系采用卡方检验；以α=0.05(双侧)为标准，以P<0.05为有统计学意义。

2 结果

在制作免疫组化染色过程中，出现掉片、卷片等不可评价共5例，这5例样本无法完成分子指标检测，最后纳入分析的病例共81例。

2.1 复发转移情况

在统计的81例患者中，16例(19.8%)复发转移。根治术后2年内复发转移率占56.3%(9/16)，3年内出现复发转移占87.5%(14/16)。术后复发转移中位时间为20个月。

2.2 E-cadherin、vimentin在Ⅱ期CRC 中表达情况

E-cadherin在CRC肿瘤组织中主要表达于细胞质或胞质、胞膜混合表达，肿瘤组织中其表达率为53.1%(43/81)，高表达者占16%(13/81)，低表达者占84%(68/81)。Vimentin表达于细胞间质，表达率为64.2%(52/81)，高表达者占40.7%(33/81)，低表达者占59.3%(48/81)。

2.3 复发转移与E-cadherin、vimentin表达的关系

以复发转移为终点事件，采用单因素卡方检验分析术后各分子表达量与复发转移的关系，分析得出肿瘤复发转移与E-cadherin(P=0.009)、vimentin(P=0.048)表达有关，见表1。

表1 各分子表达情况与复发转移的关系/例

3 讨论

EMT重要标志为E-cadherin表达下调，E-cadherin属于I型钙粘蛋白，介导钙离子依赖性的同型上皮细胞间的黏附,限制细胞的随意运动[4]。E-cadherin表达水平下降、丧失或分布异常,有利于肿瘤细胞侵袭转移[5]。Xiaobing等[6]研究显示E-cadherin在维持细胞间粘附性有重要作用，若E-cadherin表达缺失，会增加CRC细胞的侵袭性。

EMT另一个重要标志是波形蛋白(vimentin)表达上调，vimentin是由310个氨基酸残基组成的III型中间纤维丝蛋白，与微管、微丝共同组成细胞骨架以维持细胞的形态及结构，参与肿瘤细胞的迁移、黏附、凋亡。研究表明vimentin选择性高表达于侵袭性强的乳腺癌细胞中，并且与细胞角蛋白呈正相关性[7]。在恶性黑色素瘤和前列腺癌中也发现vimentin的过表达与肿瘤的侵袭性呈正相关[8-9]。

综上所述，探寻更多复发转移相关肿瘤标志物对于监测复发转移、判断预后及个体化治疗非常重要，若能提前干预可以减少复发转移率，对于提高Ⅱ期CRC总生存有重要意义。本研究发现E-cadherin、vimentin可能作为复发转移的分子标志物。

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(编辑：吴小红)

Correlation Research between EMT and Recurrence and Metastasis of Stage ⅡColorectal Cancer

CAOChuanpei.

JiujiangUniversityHospital,Jiujiang,332000

Objective To explore the relationship between E-cadherin,vimentin and recurrence and metastasis of stage Ⅱ colorectal cancer.Methods Expression of E-cadherin and vimentin in stage Ⅱ colorectal cancer patients with and without recurrence and metastasis were detected by immunohistochemical technique.Results Multivariate analysis showed that the recurrence and metastasis of stage Ⅱ colorectal cancer was significantly associated with E-cadherin and vimentin expression (P<0.05).Conclusion E-cadherin and vimentin may be used as a molecular biomarker for predicting the recurrence and metastasis of stage Ⅱ colorectal cancer.

Stage Ⅱ colorectal cancer；Epithelial-to-mesenchymal transition(EMT)；Recurrence and metastasisⅡPrognosis

332000 九江学院附属医院普外科

10.3969/j.issn.1001-5930.2014.12.009

R735.3+7

A

1001-5930(2014)12-1538-02

2014-09-17

2014-10-30)