AtheNA Multi-Lyte系统在抗核抗体检测中的应用

史兵伟，秦峰，吴琳

（南京中医药大学附属常州市中医医院检验科，江苏常州213003）

AtheNA Multi-Lyte系统在抗核抗体检测中的应用

史兵伟，秦峰，吴琳

（南京中医药大学附属常州市中医医院检验科，江苏常州213003）

目的：探讨AtheNA定量检测系统在抗核抗体检测中的性能，同时评价其对抗dsDNA抗体检测的敏感性和特异性。方法：收集系统性红斑狼疮（SLE）标本16例，其他自身免疫病标本57例及健康对照标本20例，分别以线性免疫印迹法（LIA法）和AtheNA系统进行抗dsDNA，抗SSA，抗SSB，抗Sm，抗核糖核蛋白（RNP），抗Scl-70，抗Jo-1，抗着丝点B和抗组蛋白9种自身抗体检测；同时以LIA法、间接免疫荧光（IIF）法、ELISA法和AtheNA系统4种方法检测抗dsDNA抗体，评价不同检测方法的性能。结果：LIA法和AtheNA系统对抗核抗体的检测结果显示，健康对照者与SLE患者、不同自身免疫病患者的总体阳性率相比，差异均无统计学意义（P均＞0.05）。AtheNA系统与LIA法对9种自身抗体的检测结果具有良好的一致性（P＜0.01）。LIA法、IIF法、ELISA法和AtheNA系统4种检测方法对抗dsDNA抗体检测结果显示，AtheNA系统检测抗dsDNA抗体具有较好的敏感性和特异性（68.8%，83.1%），但4种方法对SLE患者和其他自身免疫病患者的检测阳性率差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论：AtheNA系统对抗核抗体的检测具有良好的性能，其对抗dsDNA抗体的检测具有较好的敏感性和特异性。

抗核抗体；线性免疫印迹法；AtheNA Multi-lyte系统

抗核抗体是一组以真核细胞的核成分为靶抗原，具有多种细胞核成分的自身抗体的总称。目前，抗核抗体靶抗原的分布已由传统的细胞核抗原扩展至整个细胞，可与不同来源的细胞核起反应，无器官特异性和种属特异性［1］。抗核抗体不仅在多种自身免疫病中呈不同程度的阳性，而且还存在于在许多慢性疾病（如肝硬化、慢性胃溃疡）和某些肿瘤（如肝癌、肺癌、骨髓瘤、淋巴瘤等）患者的血清中［2］。抗核抗体对自身免疫病的临床诊断、鉴别诊断、疗效评价和预后估计等具有一定的临床意义。本文采用AtheNA Multi-Lyte检测系统对抗核抗体和抗dsDNA抗体进行检测，并与其他方法进行比较，探讨AtheNA系统对抗核抗体的检测性能，现将结果报告如下。

1 对象与方法

1.1 对象

收集本院2013年1月至9月期间的93份血清标本，包括确诊的系统性红斑狼疮（SLE）患者16例，其他自身免疫病患者57例和健康对照者血清20例。送检人群的年龄范围为24～74（42.2± 15.0）岁。

1.2 仪器与方法

AtheNA Multi-LyteTM抗核抗体检测试剂盒（多重微珠免疫法）由美国宙斯公司提供，可半定量地检测人血清中8种IgG抗体，包括抗SSA，抗SSB，抗Sm，抗核糖核蛋白（RNP），抗Scl-70，抗Jo-1，抗着丝点B和抗组蛋白，同时还可定量检测人血清中抗dsDNA的IgG抗体及抗核抗体的IgG抗体。检测时，取10μL稀释血清（1∶200）与50μL微珠悬浮液，室温温育30 min，加50μL结合剂（羊抗人IgG-藻红蛋白），温育30 min后上机检测。微粒通过流动室时，垂直的光分散器检测每个微粒的颜色以及荧光强度，通过荧光—数字转换系统转换为最终结果，通过该方法可知总抗核抗体定性结果、每个特异性分析物的半定量值以及抗dsDNA的定量结果。

抗可提取的核抗原抗体谱检测试剂盒（线性免疫印迹法，以下简称LIA法）、抗dsDNA抗体IgG酶联免疫吸附检测试剂盒（ELISA法）和抗dsDNA抗体IgG间接免疫荧光检测试剂盒（IIF法）均由德国欧蒙医学实验诊断公司提供，按照其说明书进行操作。

1.3 统计学分析

采用SPSS 13.0软件进行统计学分析，阳性检出率比较采用χ2检验，AtheNA系统与LIA法9种自身抗体检测结果采用Kappa一致性检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 AtheNA系统与LIA法检测不同人群抗核抗体的总体阳性率比较

SLE组中两种检测方法的阳性率均为100%，在其他自身免疫病组和健康对照组中，LIA法的阳性率高于AtheNA系统，但差异均无统计学意义（P均＞0.05）。见表1。

表1 2种检测系统对不同样本抗核抗体检测的阳性率比较

2.2 AtheNA系统与LIA法中9项自身抗体检测结果比较

以LIA法为参考标准，AtheNA系统与LIA法检测抗SSA、抗SSB、抗RNP、抗Sm、抗组蛋白、抗Jo-1、抗Scl-70和抗着丝点-B的单项符合率均大于85%，分别为90.3%，95.7%，93.5%，94.6%，90.3%，87.1%，98.9%，100.0%，抗dsDNA抗体的符合率为77.4%；对两种方法检测结果作一致性分析，均显示良好一致性（P值均小于0.01）。见表2。

2.3 4种检测方法抗dsDNA抗体阳性率比较

LIA法、IIF法、ELISA法和AtheNA系统4种检测方法对3组抗dsDNA抗体检测结果显示，LIA法诊断的特异性最高，为90.9%，但敏感性较低，为43.8%；AtheNA系统定量检测抗dsDNA抗体的敏感性最高，为68.8%，特异性为83.1%；IIF法和ELISA法的敏感性分别为37.5%和50.0%，不及AtheNA系统，但比较4种方法测得的两组阳性检出率，差异均无统计学意义（P均＞0.05）。见表3。

表2 所有送检样本AtheNA系统与LIA法9项自身抗体检测结果

表3 不同检测方法检测抗dsDNA抗体的阳性率

3 讨论

LIA法的原理是在反应膜条上平行包被多种高度纯化或重组的抗原物质，一次可检测多种与自身免疫病相关的自身抗体，属于抗核抗体确认检测中的一种，具有易实现自动化、操作简单快速、结果判读方便等优点［3－4］。而AtheNA系统结合了荧光编码微球技术、激光分析技术、流式细胞技术等，为抗核抗体的分析提供了一种高精度、易于操作的方法，实现了在单一微孔中对多种抗体的同时检测，具有高通量、高速度、低成本、准确性高、重复性好、灵敏度高、线性范围广等优点［5］。本文采用LIA法和A-theNA系统对93份不同来源的血液样本进行分析，以欧蒙印迹膜条检验各种可溶性自身抗体作对照，AtheNA检测相应结果与之对比，所有项目均有良好相关性。两种方法在总体符合率方面一致性较高，对9项可溶性自身抗体检出结果一致，说明AtheNA系统对抗核抗体的检测具有很好的临床应用价值。

SLE是一种累及多器官、多系统的小血管及结缔组织疾病，病程中往往复发与缓解交替出现，患者体内可产生针对核酸、核蛋白和组蛋白的抗核抗体及其他自身抗体，其中dsDNA就是SLE诊断和疗效观察中最有效的自身抗体。有文献报道，在抗dsDNA抗体的检测中，IIF法具有灵敏度高、操作简单等优势［6］，但会因干扰现象或者基质中部分靶抗原分布不均而产生假阳性结果。ELISA法操作简单，更适用于大批量标本的检测［7］。本文采用LIA法、IIF法、ELISA法和AtheNA系统4种检测方法对抗dsDNA抗体进行检测。结果显示AtheNA系统检测抗dsDNA抗体的敏感性和特异性综合指标最好；与其他3种方法相比，AtheNA系统检测出的抗dsDNA结果为定量结果，符合SLE患者动态观察的需要，敏感性高于其他3种方法。研究认为，这种敏感性是由于所用抗原基质及测定方法不同所致［8］。

作为一种新型的自身抗体自动化检测技术，A-theNA系统具有较好的精确度和敏感性，且操作简便，适合高通量筛选，实现了在单一微孔中对多种抗体同时检测［5，9］，可溶性自身抗体检出效率与欧蒙印迹膜条相当，抗dsDNA检测能提供可靠的定量结果。因此，在临床诊治自身免疫病中，AtheNA为多种可溶性抗体的同时检测提供了一种简便易行的方法。

［1］Damoiseaux JG，Tervaert JW.From ANA to ENA：how to proceed？［J］.Autoimmun Rov，2006，5（1）：10－17.

［2］邢艳，唐中.抗核抗体的研究进展［J］.国外医学：内科学分册，2006，33（5）：218－221.

［3］Meheus L，van Venrooij WJ，Wiik A，et al.Multicenter validation of recombinant，natural and synthetic antigens used in a single multiparameter assay for the detection of specific anti-nuclear autoantibodies in connective tissue disorders［J］.Clin Exp Rheumatol，1999，17（2）：205－214.

［4］Damoiseaux J，Boesten K，Giesen J，et al.Evaluation

of a novel line-blot immunoassay for the detection of antibodies to extractable nuclear antigens［J］.Ann N Y Acad Sci，2005，1050：340－347.

［5］Gilburd B，Abu-Shakra M，Shoenfeld Y，et al.Autoantibodies profile in the sera of patients with Sjogren′s syndrome：the ANA evaluation-a homogeneous，multiplexed system［J］.Clin Dev Immunol，2004，11（1）：53－56.

［6］Kavanaugh A，Tomar R，Reveille J，et al.Guidelines for clinical use of the antinuclear antibody test and tests for specific autoantibodies to nuclear antigens.American College of Pathologists［J］.Arch Pathol Lab Med，2000，124（1）：71－81.

［7］Paz E，AdawiM，Lavi I，et al.Antinuclear antibodies measured by enzyme immunoassay in patients with systemic lupus erythematosus：relation to disease activity［J］.Rheumatol Int，2007，27（10）：941－945.

［8］杨林，虞伟.抗dsDNA、抗核小体抗体的3种检测方法及诊断SLE的评价［J］.临床检验杂志，2009，27（4）：292－294.

［9］Shovman O，Gilburd B，Zandman-Goddard G，et al.Multiplexed AtheNA multi-lyte immunoassay for ANA screening in autoimmune diseases［J］.Autoimmunity，2005，38（1）：105－109.

Application of AtheNA Multi-Lyte system in the detection of antinuclear antibodies

SHIBing-wei，QIN Feng，WU Lin

（Clinical Laboratory，Changzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine，Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Changzhou Jiangsu 213003，China）

Objective：To access the detection property of AtheNA system in antinuclear antibodies and anti-dsDNA antibodies.M ethods：Ninety and three serum sampleswere tested utilizing the AtheNA system and LIAmethod：16 samples from patientswith systemic lupus erythematosus（SLE），57 samples from other known autoimmune diseases and 20 healthy donors.The antinuclear autoantibodies to nine different analytes（SSA，SSB，Sm，RNP，Jo-1，Scl-70，dsDNA，Centromere B and Histone）were tested.Meanwhile，the dsDNA antibodieswere tested using line immunoassay（LIA），IIF，ELISA and the AtheNA system.Results：There were no significant difference in the antinuclear antibodies detected in three subjects.Antinuclear autoantibodies screening by AtheNA system revealed high concordance with the LIA in samples obtained from 16 samples from patients with SLE，20 healthy donors，57 samples from other known autoimmune diseases samples，respectively.The test results of4methods showed that the sensitivity and specificity of AtheNA system was better in anti-dsDNA antibody test（68.8%，83.1%）than other threemethods.Conclusion：The AtheNA system is a sensitive and automaticmethod for simultaneous quantitative detection of antinuclear antibodies and anti-dsDNA antibodies profiles.

antinuclear antibody；line immunoassay；AtheNA Multi-Lyte system

R446.62

A

1671－7783（2014）01－0044－04

10.13312／j.issn.1671-7783.y130229

史兵伟（1971—），男，江苏常州人，副主任技师，主要从事自身免疫病等研究。

2013－10－14 ［编辑］刘星星