三七粉对非酒精性脂肪肝防治作用的实验研究①

劳雪玲，陈华梅，郑薇英，何家欣，韦维，农嵩，李韬②

（1.右江民族医学院医学检验学院、临床学院，广西 百色 533000 E－mail：1533711232＠qq.com；2.右江民族医学院生物化学教研室，广西 百色 533000）

非酒精性脂肪肝是我国常见的慢性肝病之一，近年来我国及亚太地区的患病率呈逐年上升趋势，严重危害人民健康。随着人民生活水平的提高，生活方式和饮食结构的改变，脂肪肝的发病率逐年上升，全世界范围内有望成为慢性肝病的首要原因。我国的酒精性脂肪肝流行并不严重，所占脂肪肝的比重较低，主要是以非酒精性脂肪［1］。我国脂肪肝的患病率为17%左右，其中90%的为非酒精性脂肪肝，脂肪肝已成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病。复方中药治疗非酒精性脂肪肝是目前临床报道的主流，采用疏肝理气、活血化瘀、健脾祛痰、清热利湿和补益肝肾等治法为主［2－3］，三七具有止血、活血化瘀、降低血脂、抗凝等作用［4］，本实验用高糖高脂高蛋白制造小鼠非酒精性脂肪肝模型，给予三七粉、三七皂甙灌胃治疗，观察其对非酒精性脂肪肝的防治作用。

1 材料

1.1 动物 小鼠48只，雄性，普通级，体重20～30g，由右江民族医学院实验动物中心提供，动物许可证号：syxk桂2011－0010。

1.2 饲料配方 高糖高脂高蛋白饲料配制参照文献［5］修改：5%猪油、5%花生油、2.8%胆固醇、0.28%丙硫氧嘧啶、20%蔗糖、67%普通饲料粉末，混匀后加压成条粒。

1.3 试剂 三七粉（云南向辉生物科技有限公司），三七皂甙（昆明制药集团股份有限公司），胆固醇（分析纯），丙硫氧嘧啶（化学纯），猪油、花生油、伊利高脂奶粉（购于市场），总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、γ－谷氨酰转移酶（γ－GT）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总蛋白（TP）测定试剂盒购于四川迈克生物科技股份有限公司。

2 方法

2.1 分组 48只小鼠随机分为正常组、模型组、三七粉治疗组、三七皂甙治疗组，每组12只。

2.2 造模及给药 除正常组给予普通饲料喂养外，其余三组均给高糖高脂高蛋白饲料喂养，开始1～4周给予高糖高脂高蛋白饲料喂养，每只按2.5、5、7.5、10ml／kg每周递增，第5～6周持续按10ml／kg喂养。同时，三七粉组与三七皂甙组分别每日给予三七粉（0.84g／kg）、三七总皂甙（100mg／kg），用蒸馏水溶解，每只按0.25ml灌胃，正常组和模型组给等量生理盐水灌胃，持续6周。

2.3 检测 于实验6周结束后，小鼠眼球取血，EP管收集，室温静置后4000r／min离心5min，取血清做 TC、TG、GGT、ALT、TP检测（按试剂盒说明操作）；各组小鼠剖腹取肝脏，称取1g肝脏组织，制成匀浆，做姬坶萨染色观察细胞形态变化。

3 结果

3.1 动物的一般情况 正常组小鼠活动状态良好，模型组小鼠出现脂溢性皮炎，毛发油腻、厌食等，三七粉组、三七总皂甙组活动、饮食状态较好。

3.2 各组小鼠血清 TC、TG、GGT、ALT、TP含量变化 三七粉、三七总皂甙组用药后血清TC、TG、ALT显著降低（P＜0.05或P ＜0.01），结果见表1。

表1 各组小鼠血清TC、TG、GGT、ALT、TP含量变化 （）

表1 各组小鼠血清TC、TG、GGT、ALT、TP含量变化 （）

注：与正常组比较，a：P ＜0.05，b：P ＜0.01；与模型组比较，c：P ＜0.05，d：P ＜0.01

3.3 肝组织观察

3.3.1 肝脏外观 正常组肝脏外观鲜红，表面光滑，包膜及质地柔软；模型组体积明显增大，包膜紧张，质地较软，表面光滑，部分肝脏呈奶黄色；三七粉组体积略微增大，包膜紧张；三七总皂甙组体积增大，包膜紧张，质地较硬。

3.3.2 肝细胞姬坶萨染色观察 正常组细胞膜、细胞核完整，圆形；模型组细胞膜有较多绒状凸起，边界不够完整，形成炎性浸润，细胞核不明显；三七粉组细胞膜有少量绒状凸起，边界完整，炎性浸润有所改善；三七总皂甙组细胞质膜有绒状凸起，边界基本完整，细胞核完整，各组详见图1。

图1 三七粉对非酒精性脂肪肝细胞形态影响（×400光镜）

4 讨论

脂肪肝的成因除酒精外，营养过剩、肥胖、糖尿病、高脂血症、营养不良等也易造成脂肪肝。当食物中的糖类、脂类含量过高时，使肝脏脂肪合成过多，超过了肝脏处理的限度，使肝脏负担增大，干扰了对脂肪的代谢，打破了肝脏的输入输出平衡，造成脂肪在肝内堆积而形成脂肪肝。从中医范畴来看，非酒精性脂肪肝当属肝胆湿热、肝郁脾虚、肝气郁结等症候［6］。三七具有化瘀止血、活血定痛等作用，古今医家多用三七配伍活血行气药，对气滞、血瘀、痰凝互结的积聚类疾病有着极好的疗效。本实验采用高糖高脂高蛋白制造脂肪肝小鼠模型，给予三七粉、三七皂甙灌胃治疗，实验结果表明给药后小鼠血清TG、TC含量比模型组显著降低（P＜0.05或P＜0.01），表明三七粉及三七皂甙具有抑制脂质的吸收，促进脂类的排泄，降低血清中TG及TC的含量，减少肝脏内脂质的堆积，改善由高糖高脂饮食导致的非酒精性脂肪肝的保护作用，与文献报道一致［7－8］。

ALT主要分布在肝细胞内，若肝细胞受损，ALT则释放入血，引起血中ALT含量升高，故ALT是监测肝细胞损伤最重要的指标。GGT（旧称γ－谷氨酰转肽酶γ－GT）主要存在肝细胞膜和微粒体上，参与谷胱甘肽的代谢，当肝内合成亢进或胆汁排出受阻时，血清中GGT增高，肝炎、肝硬化、脂肪肝也可增高。本实验模型组小鼠血清ALT、GGT明显增高，同时肝组织细胞染色观察可见细胞膜有较多绒状凸起，边界不完整，伴有炎症浸润；而采用三七粉和三七总皂甙灌胃后ALT含量显著降低，细胞膜边界较完整，炎性浸润有所改善，说明三七粉及三七总皂甙对肝损伤有一定的保护功能。综上所述，三七粉对非酒精性脂肪肝有防治作用，其机制可能是抑制脂质吸收，进而减少肝内脂肪的合成。

［1]朱方超，黄智铭.非酒精性脂肪肝危险因素流行病学论述［J］.实用医学杂志，2010，26（18）：3452－3454.

［2]陈常云，郭彦敏，聂宝增，等.化痰祛脂汤治疗非酒精性脂肪肝临床研究［J］.中国临床医生，2010，38（4）：50－52.

［3]王亚平，要全保，张志银，等.益肝降脂方治疗痰瘀互结型非酒精性脂肪肝64例［J］.上海中医药杂志，2006，40（2）：21－22.

［4]李韬，雷菠，冯丽芬，等.三七对高脂血症家兔血浆TBX2、GMP－140含量的影响［J］.江苏医药，2012，38（7）：763－765.

［5]魏伟，吴希美，李元建.药理实验方法学［M］.4版.北京：人民卫生出版社，2010：1132－1133.

［6]陈剑明，张声生，吴震宇.非酒精性脂肪性肝病常见中医证候类型及证候要素的现代文献研究［J］.中西医结合肝病杂志，2012，22（1）：51－53.

［7]吴震宇，张声生，陈剑明，等.三七总皂甙对非酒精性脂肪性肝病大鼠保护作用研究［J］.中国中西医结合消化杂志，2013，21（4）：176－178.

［8]李韬，曲德英，雷菠.三七粉对家兔实验性动脉粥样硬化的影响［J］.中医研究，2006，19（1）：17－19.