肺癌患者血浆白细胞介素10与25-羟基维生素D检测的临床意义

王茂峰，应俊，蒋新良，陈德宝，蒋小伟，楼永刚，张巧红，万汝根

（1.东阳市人民医院 检验科，浙江 金华 322100；2.温州医科大学 检验医学院，浙江 温州325035）

肺癌是发病率和病死率高的恶性肿瘤之一，众多细胞因子参与肿瘤免疫的调节，其中白细胞介素10（IL-10）具有多种抑制抗肿瘤免疫应答的作用[1]。维生素D及其受体除了调节体内钙、磷代谢之外，还具有调节肿瘤细胞凋亡以及免疫调节作用[2]。研究表明，维生素D在肺部疾病中可发挥有益的作用，适当的维生素D水平可能是预防肺癌的重要因素[3]。因此，肺癌患者维生素D与细胞因子IL-10的关系如何值得探讨。本研究将采用电化学发光、酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测肺癌患者血浆25-羟基维生素D与IL-10水平，并探讨两者的相关性及其临床价值，为肺癌预防和干预提供科学依据。

1 资料和方法

1.1 一般资料 收集本院2012年3月-2013年1月新入院肺癌患者78例，其中男41例，女37例，年龄38～77岁，中位年龄57岁。纳入标准：经病理或细胞学、影像学检查确诊的肺癌患者，具有完整的临床和病理资料，所有患者均无免疫相关性疾病和其他肿瘤病史，且无使用激素类药物及免疫抑制剂史。病理分型分类：腺癌40例，鳞状细胞癌28例，小细胞癌10例。健康对照组50例，均为2010年6月至2010年8月本院体检中心的健康体检者，其中男26例，女24例，年龄35～71岁，中位年龄57岁；均无糖尿病、类风湿、甲状腺功能亢进等自身免疫性疾病及免疫治疗史。所有研究对象均获得知情告知并同意参加本研究。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂和仪器：血浆IL-10浓度检测试剂盒购自Biosource公司，检测仪器伯乐酶标仪。25-羟基维生素D采用罗氏电化学发光Cobas 601仪器检测，试剂、校准品、质控品均为罗氏原装配套产品。

1.2.2 样本采集：肺癌患者在治疗前抽血，取一管抗凝血2 mL，离心分离血浆后保存于-80 ℃冰箱待检。

1.2.3 检测方法：血浆IL-10浓度检测根据说明书操作进行，根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。25-羟基维生素D检测按照电化学发光检测标准操作，在定标和质控均通过后检测样本。

1.3 统计学处理方法 采用SPSS 13.0统计学软件。正态分布和方差分析采用Shapiro-Wilk检验评估；正态分布资料采用±s表示，2组间比较采用两独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析；非正态分布资料采用中位数（四分位数间距）表示，两组间比较采用Mann-Whitney U检验，多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验；相关分析采用Spearman相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肺癌患者血浆IL-10水平 肺癌患者血浆IL-10浓度为1 031 ng/L[（805～1 243）ng/L]，高于健康对照组的445 ng/L[（320～580）ng/L]，差异有统计学意义（x2=12.9，P＜0.05）；肺腺癌患者血浆IL-10浓度为1 255 ng/L[（1 050～1 440）ng/L]，高于肺鳞状细胞癌患者的840 ng/L[（530～1 010）ng/L]，差异有统计学意义（Z=-3.957，P＜0.05），如图1所示。

图1 肺癌患者血浆IL-10检测结果

2.2 肺癌患者血浆25-羟基维生素D水平 肺癌患者血浆25-羟基维生素D浓度为（24.5±6.8）ng/mL，低于健康对照组的（35.1±8.7）ng/mL，差异有统计学意义（t=4.251，P＜0.05）；肺腺癌患者血浆25-羟基维生素D浓度为（25.1±7.7）ng/mL，与肺鳞状细胞癌患者的（23.6±6.5）ng/mL比较差异无统计学意义（P＞0.05），如图2所示。

2.3 肺癌患者血浆IL-10与25-羟基维生素D相关性分析 经过Spearman相关分析，肺癌患者血浆IL-10与25-羟基维生素D不存在相关性（r=-0.011，P＞0.05）。

3 讨论

图2 肺癌患者血浆25-羟基维生素D浓度检测结果

维生素D作用于免疫系统的主要靶细胞是抗原递呈细胞，包括树突状细胞、巨噬细胞和T淋巴细胞。本研究显示，肺癌患者外周血25-羟基维生素D水平低于健康对照组，且存在维生素D缺乏者约占60%。既往研究也证实了相似的结果，Grant等[4]对美国人群的研究提示太阳紫外线辐射（增加维生素D）和肺癌病死率呈负相关，Mohr等[5]研究了多个国家的肺癌发病率，发现紫外线照射量与肺癌的发病率有关，这些研究均表明维生素D与肺癌存在密切关系。分析肺癌患者血浆IL-10表明，肺癌患者血浆IL-10高于健康对照者，国内研究[6]发现肺癌患者血浆IL-10升高，国外报道[1]肿瘤患者血浆IL-10明显异常。研究[1，7]证实，IL-10是肺癌中主要的细胞因子，能够以自分泌及旁分泌形式促进患者体内肿瘤生长，调节肿瘤微环境，逃逸机体免疫监视。既往研究[8]显示，在肺癌患者外周血中调节性T细胞明显增加，活化后的调节性T细胞分泌IL-10，抑制肿瘤特异性T细胞，促进了肿瘤生长。这些研究进一步证明了血浆IL-10可能参与了肺癌的免疫逃逸。

进一步研究表明，肺腺癌患者血浆IL-10浓度高于肺鳞状细胞癌患者，肺腺癌患者血浆25-羟基维生素D浓度与肺鳞状细胞癌患者比较差异无统计学意义。有报道显示维生素D能促进树突状细胞产生IL-10，后者作为免疫抑制细胞因子，可以抑制Th1细胞产生IL-12，已证实维生素D在体外能抑制T细胞增殖和细胞周期从G1a期向G1b期进展，它还能影响T细胞产生细胞因子，在减少Th1细胞因子IFN-γ产生的同时，增加Th2细胞因子如IL-4、IL-5和IL-10的产生，从而促进活化的T细胞向Th2细胞的分化[8]。研究[9]发现非小细胞肺癌组织中高表达IL-10的患者预后差。本研究发现血浆IL-10与维生素D两者间不存在相关性。本研究属于横断面研究，样本例数也相对较少，未能全面说明维生素D与IL-10之间的关系，但是维生素D与IL-10之间的相互关系值得更深入的研究，特别是与肺癌患者临床资料、工作方式、生活习惯、饮食习惯、家族遗传史、居住环境、免疫细胞、肿瘤标志物等指标的关联性和临床意义。

总之，维生素D缺乏和IL-10增加可能增加肺癌患者的风险，检测维生素D和IL-10对肺癌患者具有一定的临床价值，为肺癌预防和干预提供科学依据。