PTEN和survivin基因在视网膜母细胞瘤组织中的表达及临床意义

黄海东，李莉洋，郭 颖，赵 兴，康景佳,管 迪

PTEN和survivin基因在视网膜母细胞瘤组织中的表达及临床意义

黄海东，李莉洋，郭 颖，赵 兴，康景佳,管 迪

目的探讨PTEN及survivin基因在视网膜母细胞瘤组织中的表达及临床意义。方法选择30例视网膜母细胞瘤组织为观察组，30例正常视网膜组织为对照组，应用免疫组织化学方法检测两组切片中PTEN、survivin基因的表达，比较两组PTEN和survivin表达差异。结果观察组PTEN总阳性表达率为53.3%，对照组PTEN总阳性表达率为100.0%，两组差异有统计学意义(P<0.05)；观察组survivin总阳性表达率为60.0%，对照组survivin总阳性表达率为0.0%，两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论PTEN基因阳性表达降低与survivin基因阳性表达升高，是视网膜母细胞瘤的发病机制之一。

PTEN基因；survivin基因；视网膜母细胞瘤；表达

PTEN是一种抑癌基因，具有双特异性磷酸酶活性，在细胞迁移、阻滞细胞周期及细胞凋亡过程中具有重要意义，在很多恶性肿瘤中PTEN基因均存在改变。survivin基因是凋亡抑制蛋白的家族成员，在正常组织中不表达或者低表达，而在很多恶性肿瘤组织中出现高表达[1，2]。目前，视网膜母细胞瘤的发病机制尚未明确[3]，本研究于2012-02至2013-02选取我院存档的视网膜母细胞瘤病理标本，分析PTEN、survivin基因在视网膜母细胞瘤组织中的表达，探讨视网膜母细胞瘤发生及发展的病理机制，为临床诊治及判断预后提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料 30例视网膜母细胞瘤(观察组)选自我院近10年来存档的病理标本，其中男17例，女13例，年龄10个月～4岁，平均(2.3±1.5)岁。另外取正常视网膜组织30例为对照组(为同期非眼部疾病死亡的婴幼儿视网膜标本，取组织切片之前均经监护人签字同意)，其中男16例，女14例，年龄1～5岁，平均(2.5±1.7)岁。两组视网膜切片基本资料具有可比性，本研究经过医院伦理委员会审核批准。

1.2 试剂及方法 选用兔抗人survivin及PTEN多克隆抗体；DAB(二氨基联苯胺)显色试剂盒(博士德生物工程有限公司，武汉)；试剂盒(SAl022型)。采用免疫组织化学(SABC)方法检测切片组织中PTEN和survivin，根据试剂盒说明书进行相关操作；比较两组PTEN和survivin表达情况。

1.3 评价标准 PTEN阳性染色标准：切片组织细胞质及细胞膜内可见棕褐色的颗粒；survivin阳性染色标准：分别定位于细胞膜、细胞核及细胞质，染成棕黄色。表达强度根据阳性细胞的比例及阳性物质染色的深浅进行评价。在每张切片上随机选择高倍视野(×400)5个，每个视野的肿瘤细胞为100个，5个视野即500个细胞，如阳性细胞比例≤5%则记为0分； 6%～24%记为1分；25%～49%记为2分；50%～74%记为3分；≥75%者记为4分。同时根据染色物质颜色计分，棕褐色为3分，棕黄色为2分，淡黄色为1分，无染色为0分。表达强度为强阳性：上述两项计分之和为6～7分；阳性：4～5分；弱阳性：2～3分。

1.4 统计学处理 运用SPSS16.0统计学软件，采用秩和检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组PTEN基因表达情况比较 观察组PTEN基因总阳性表达率为53.3%，显著低于对照组100.0%，差异有统计学意义(P<0.05，表1)。PTEN表达阳性病理图见图1。

表1 两组视网膜组织切片PTEN基因表达情况比较 (n;%)

图1 PTEN基因表达阳性组织切片(SABC，×400)

2.2 两组survivin基因表达情况比较 观察组survivin基因总阳性表达率为60.0%，显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05，表2)。survivin表达阳性病理图见图2。

表2 两组视网膜组织切片survivin基因表达情况比较 (n;%)

图2 survivin基因表达组织切片(SABC，×400)

3 讨 论

视网膜母细胞瘤在婴幼儿期常见，是眼内的恶性肿瘤，严重损害患儿的视力并对生命健康产生威胁[4]。PTEN基因具有脂质磷酸酶及蛋白磷酸酶活性，是一种多功能的蛋白质，自从被报道后一直为临床研究的热点[5]。PTEN是一种抑癌基因，对正常细胞具有促进生长的作用，同时抑制其异常增殖、分裂及凋亡。在很多癌症细胞中，PTEN均有着较低的表达率。因此，PTEN可以成为评价众多恶性肿瘤预后的指标，对其作用机制进行研究有助于诊断癌症及进行基因治疗。Survivin基因具有调节细胞周期的作用，仅在胚胎组织及肿瘤组织中表达，其在癌症细胞浸润转移及分化增殖中具有重要意义。另外，在内源性及外源性细胞的凋亡过程中也有survivin的参与。目前尚不能明确肿瘤分子中survivin的作用机制，但是如果survivin在肿瘤细胞中表达过度，则预示着不良的预后。临床上通过对患者放疗及化疗，能够在一定程度上控制survivin的表达。本研究结果显示，PTEN在视网膜母细胞瘤组织中的阳性表达率为53.3%，明显低于其在正常视网膜组织中的表达率；Survivin在视网膜母细胞瘤组织中的阳性表达率为60.0%，而在正常视网膜组织中无表达。

综上所述，抑癌基因及致癌基因所产生的抑癌及致癌作用，并不仅仅是某个或者某几个基因参与，均是共同作用产生的结果。PTEN和survivin在视网膜母细胞瘤组织中的异常表达是视网膜母细胞瘤的发病机制之一，明确两种基因在视网膜母细胞瘤组织中的具体表达机制对于视网膜母细胞瘤的诊治具有重要意义[6]。随着分子生物学的发展，可以从分子基因角度对临床上难治疾病进行诊疗，由于PTEN对视网膜母细胞瘤具有抑制作用，而survivin对视网膜母细胞瘤可能产生了一定的促进作用，因此应用分子靶细胞药物激活PTNE基因同时抑制survivin基因，对于治愈视网膜母细胞瘤具有指导意义。

[1] 吴子旭,郭晓铭,姚 宏,等.PTEN和Survivin在视网膜母细胞瘤中的表达和意义[J].中国药物与临床,2010,10(6):1645-1647.

[2] 李 雁,张军军.视网膜母细胞瘤发病机制的分子生物学研究回顾与进展[J].国际眼科杂志,2010,10(4):703-705.

[3] Dimaras H,Dimba E A,Gallic B L.Challenging the global retinoblastoma survival disparity through a collaborative research effort[J].Br J Ophthalmol,2010,94(11):1415-1416.

[4] 乔丽珊,方 严.视网膜母细胞瘤的临床特点和治疗分析[J].临床眼科杂志,2007,15(3):239-241.

[5] 苗丽霞,李 明,王亚峰,等.CIK细胞联合化疗治疗儿童中晚期视网膜母细胞瘤的安全性及初步疗效观察[J].武警医学,2012,23(11)：135-137.

[6] 赵水喜,曹京旭,王迎选.视网膜母细胞瘤的外照射放疗[J].武警医学,2012,23(10):768-769.

(2013-02-27收稿 2013-09-12修回)

(责任编辑 尤伟杰)

ExpressionsandclinicalsignificanceofPTENandsurvivininretinoblastomatissues

HUANG Haidong,LI Liyang,GUO Ying,ZHAO Xing,KANG Jingjia,and GUAN Di.
Department of Ophthalmology, Liaoning Provinial Corps Hospital, Chinese People’s Armed Police Forces. Shenyang 110034,China

ObjectiveTo study the expressions and clinical significance of PTEN and survivin in retinoblastoma tissues.MethodsRetinoblastoma tissue sections from 30 patients were selected as observation group, 30 healthy retinal tissue sections were selected as control group. Immunohistochemical method was used to detect the PTEN and survivin expressions， Expressions of PTEN and survivin were compared between the two groups， and their clinical significance was discussed.ResultsIn the observation group, PTEN-positive expression rate was 53.3%；in the control group，the total positive expression rate of PTEN was 100%. In the observation group，the total positive expression rate of survivin was 60%；in the control group，the total positive expression rate of survivin was 0%；the difference between the two groups was significant(P<0.05).ConclusionsIn retinoblastoma tissues, the survivin-positive expression was significantly increased and PTEN-positive expression was significantly reduced.

PTEN; survivin; retinoblastoma; expressions

黄海东，本科学历，主治医师，E-mail: hhd91980@sina.com

110034沈阳，武警辽宁总队医院眼科

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