高效液相色谱法测定石杏痰咳片中盐酸麻黄碱含量

黄海婷，蒙庆东

（广西壮族自治区北海食品药品检验所，广西 北海 536000）

石杏痰咳片由麻黄、石膏、苦杏仁、百部、款冬花、浙贝母、桑白皮、鱼腥草、功劳木、陈皮、甘草等药组方，具有疏风宣肺、止咳化痰的功效，适用于改善咳嗽、咳痰症状。麻黄为方中君药，故以麻黄碱为指标进行含量测定，控制成品的质量。2010年版《中国药典（一部）》采用高效液相色谱(HPLC)法测定麻黄碱的含量[1]，该方法操作简单、方法可靠、重复性好，故本试验参照该方法测定盐酸麻黄碱的含量。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪（色谱系统由G1311A型四元泵、G1329A型标准型自动进样器、G1314B XL VWB型检测器、色谱数据工作站、AT-330型色谱柱恒温箱组成）。盐酸麻黄碱对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为171241-200303）；石杏痰咳片（广西钦州金页制药有限公司，国药准字B20020463，批号为120901）；乙腈为色谱纯，水为超纯水，磷酸等其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent TC-C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm）；柱温：40 ℃ ；流动相：乙腈 -0．1% 磷酸溶液（4 ∶96）；检测波长：207 nm；流速：1．0 mL ／min；进样量：10 μL。按上述色谱条件分别测定样品溶液、对照品溶液、阴性对照品溶液，色谱图见图1。结果表明，盐酸麻黄碱对照品与石杏痰咳片中盐酸麻黄碱的保留时间基本一致，阴性对照品溶液在相应位置无相应峰出现，同时与其他组分分离完全，分离度大于1．5，理论板数以盐酸麻黄碱峰计算不低于 3 000。

图1 高效液相色谱图

2．2 溶液制备

精密称取盐酸麻黄碱对照品20．16 mg，置20 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL置25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL中含40．32 μg的盐酸麻黄碱对照品溶液。取10片石杏痰咳片，称定质量，研碎，取0．5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理40 min，放冷，再称定质量，用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。按成品制剂方法制得缺麻黄的阴性样品制剂。取阴性样品制剂10片，研细，取0．5 g，精密称定，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

线性关系考察：精密称取盐酸麻黄碱对照品20．16 mg，置20 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置20 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL中含50．40 μg盐酸麻黄碱的对照品溶液。吸取上述对照品溶液适量，以甲醇分别制成质量浓度为 5．04，10．08，20．16，30．21，40．32，50．40，60．48，80．06，100．80 μg ／mL 的对照品溶液。分别吸取各质量浓度对照品溶液10 μL注入高效液相色谱仪，按拟订色谱条件测定峰面积。以盐酸麻黄碱浓度（X，μg／mL）为横坐标。峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得线性回归方程 Y＝25．236 X-23．617，r＝0．999 9。结果表明，盐酸麻黄碱质量浓度在 5．04 ～100．80 μg／mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验：取质量浓度为40．32 μg／mL的对照品溶液及同一供试品溶液，按拟订色谱条件重复进样6次，测定盐酸麻黄碱对应的色谱峰高度并计算 RSD。结果对照品溶液的 RSD为0．27%，供试品溶液的 RSD为0．68%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，于 0，2，4，6，12，24 h 时分别测定峰面积。结果的 RSD为0．86%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验：取6份供试品溶液，平行操作，测定盐酸麻黄碱的含量。结果的 RSD为1．87%，表明方法重复性良好。

加样回收试验：称取已知含量的样品9份，每份0．25 g，精密称定，置25 mL容量瓶中，每3份分别精密加入盐酸麻黄碱对照品 0．126 0，0．252 0，0．504 0 mg，按供试品溶液制备方法处理样品并测定峰面积，以外标法计算盐酸麻黄碱含量，并计算回收率。结果见表1。

表1 盐酸麻黄碱加样回收试验结果（n＝9）

2．4 样品含量测定

取3份同一批（批号为20090301）样品，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定。分别精密吸取对照品溶液（质量浓度为 40．32 μg ／mL）与供试品溶液各 10 μL 注入高效液相色谱仪，依法测定3份供试品溶液中盐酸麻黄碱的含量。结果每片石杏痰咳片中盐酸麻黄碱的平均含量分别为0．578 8 mg，RSD为1．76% （n＝3）。

3 讨论

石杏痰咳片成分非常复杂，本试验选择盐酸麻黄碱作为测定指标，测定其含量。在国家药品监督管理局标准（试行）[2]中采用了薄层扫描法测定石杏痰咳片中盐酸麻黄碱的含量，该方法复杂、重复性不好、灵敏度不高。根据文献报道，盐酸麻黄碱的含量测定方法有双波长扫描法、差示分光光度法和HPLC法等[1-9]，其中HPLC法灵敏度高、重复性好，因而本试验采用HPLC法测定盐酸麻黄碱的含量。

取盐酸麻黄碱对照品适量，加甲醇溶解，于200～400 nm波长范围内扫描，结果盐酸麻黄碱在207 nm波长处的吸收强度最大，直线平直，同时参考相关文献选用207 nm作为测定波长。

本试验分别考察了以下几种流动相系统[3-9]：乙腈-甲醇-0．1% 磷酸溶液（4．5 ∶9 ∶86．5）、乙腈 -0．1% 磷酸溶液（含 0．1% 三乙胺）（3 ∶97）、甲醇 -0．1% 磷酸溶液（5 ∶95）、乙腈 -0．02 mol／mL磷酸溶液（8 ∶92）、乙腈 -0．1% 磷酸溶液（4 ∶96），其中以乙腈 -0．1%磷酸溶液（4∶96）系统的色谱峰对称性好，供试品溶液中所测组分分离度好，无杂质干扰。原有文献中测定的流动相系统对柱子的损害大，对柱效影响大，而本研究所用流动相系统比原有流动相系统效果好[10]。此外，还对柱温 30，35，40，45℃进行了试验，其中40℃效果好，故柱温设定为40℃。

在供试品溶液的制备上，对供试品的提取方法、提取溶剂、提取时间进行了考察，结果采用70%甲醇溶液作为提取溶剂，超声40 min，供试品溶液中盐酸麻黄碱含量高、杂质少。提取效果优于国家药品监督管理局标准（试行）中的酸性提取方法，也优于文献[10]的提取方法，便于操作，提高了效率。

本试验建立的测定石杏痰咳片中盐酸麻黄碱含量的HPLC法，色谱分离和线性关系良好，重复性及回收率均符合要求，且准确、灵敏、稳定和快速，可作为本品的质量控制方法。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2010:301．

[2]WS-5442(B-0442)，国家药品监督管理局标准（试行）[S]．

[3]陈桂香．HPLC法测定小儿化痰止咳冲剂中盐酸麻黄碱的含量[J]．中国当代医药，2012，19（7）：55-56．

[4]许允剑，雷凯琴，王建林．高效液相法测定滴通鼻炎水中盐酸麻黄碱的含量[J]．海峡医学，2012，24（4）：61-62．

[5]王朋义，张海鸣，王成芳，等．HPLC测定艾芩止咳颗粒中盐酸麻黄碱的含量[J]．中国医药信息杂志，2012，19（1）：56-57．

[6]罗兴洪，周进东，余筱蕾，等．HPLC法测定咳喘宁胶囊中盐酸麻黄碱的含量[J]．南京中医药大学学报，2012，28（3）：292-293．

[7]李惠敏，简淑娟，黄丹莹．HPLC法测定复方川贝片中盐酸麻黄碱的含量[J]．中国药师，2004，7(9):738-739．

[8]曹纬国，刘志勤，杨 锡，等．HPLC法测定麻黄及其两种制剂中盐酸麻黄碱的含量[J]．哈尔滨医科大学学报，2004，38（4）：382-383．

[9]洪国芬，朱晓峰，陈金文．高效液相色谱法测定麻黄碱含量的研究[J]．海峡医学，2008，20（1）：46．

[10]杨 辉．HPLC法测定石杏痰咳片中盐酸麻黄碱的含量[J]．中国药师，2007，10（5）：465-466．