新疆维吾尔族抑郁症基因样本库的初步建立及应用

张丽丽， 韩书贤， 安治国， 钟衔江， 罗 晓， 伊琦忠

(新疆医科大学第一附属医院心理医学中心, 乌鲁木齐 830054)

抑郁症是一种慢性复发性精神疾病，在所有精神障碍中抑郁症患病率最高。1993年，世界范围的流行病学调查显示，普通人群抑郁症的患病率为5.8%[1]，且有很高的自杀风险[2]。

研究显示，抑郁症是一种多基因遗传病，有家族聚集现象,从遗传学的角度阐述发病机制及风险因素，对于抑郁症的诊断及治疗意义重大[3-4]。目前国内多个研究机构建立了抑郁症基因数据库，并发现与抑郁症密切相关的88个基因[5-6]。新疆维吾尔族很少与汉族通婚，保有本民族的遗传特色，是基因研究中不可多得的资源[7]。抑郁症中的自杀行为一直为人们所关注[8-9]。有研究发现，5-HT合成限速酶色氨酸羟化酶2(TPH-2)与抑郁症自杀倾向密切相关[10-14]。Zhang等[15]提出，在抑郁症有自杀行为患者中，TPH-2基因位点rs7305115等位基因A与基因型A/A的频率要低于无自杀行为的患者。本研究旨在初步建立新疆维吾尔族抑郁症的基因样本库，并以rs7305115为例进行危险因素的评估。

1 资料与方法

1.1研究对象研究对象均来自世居新疆及无生物学亲缘关系的维吾尔族人群。入组前签署知情同意书，并通过新疆医科大学第一附属医院伦理委员会的审查。样本共计800例，男性364例，女性436例，平均年龄(40.85±0.43)岁。按职业分组：脑力劳动者350例，体力劳动者450例；按文化程度分组：高中文化程度以上313例，高中文化程度以下(包括高中)487例。入组标准：(1)2010年1月-2013年1月于新疆医科大学第一附属医院精神科及新疆其他精神病院治疗的维吾尔族抑郁症患者；(2)诊断、一般人口学资料及临床信息的收集由2名主治医师以上精神科医生完成，采用半定式临床检查(SCID)进行精神检查，符合《美国精神障碍诊断与统计手册》第4版(DSM-IV)抑郁发作的诊断标准；(3)按照一般划界分，汉密顿抑郁量表(HAMD-17)评分≥7分者视为有抑郁症状。排除标准：(1)中枢神经系统及脑器质性疾病患者；(2)严重躯体疾病，如肿瘤、内分泌、心血管疾病、肝肾功能损伤及由躯体疾病继发的抑郁；(3)其他精神疾病与精神发育迟滞患者；(4)有精神疾病阳性家族史者；(5)孕期、哺乳期及月经期女性。

1.2方法

1.2.1 一般人口学资料及临床资料库的建立 收集一般人口学资料，包括姓名、出生年、性别、民族、文化程度、职业、联系方式等；临床资料包括住院号、初次发病年龄、本次诊断、HAMD前17项评分、本次出院评价、是否为双生儿、寄养子、近亲婚配、精神病互相婚配、一级亲族遗传史等信息。上述信息首先填入“精神疾病家系调查表”，然后应用Excel软件建立与上述信息一一对应的资料库。

1.2.2 DNA样本库的建立

1.2.2.1 采集外周血 采集研究对象晨起空腹肘静脉血各5 mL，2%EDTA抗凝处理。及时送往新疆医科大学第一附属医院重大疾病资源标本库。由专业人员控制质量，进行血清与血细胞的分离，统一编码(参照国际通用标准)。

1.2.2.2 基因组DNA的提取 每例样本各选取500 μL血细胞，采用天根血液基因组提取试剂盒(DP319)提取DNA。

1.2.2.3 基因组DNA的质量控制 用NanoDrop1000分光光度计对DNA样本浓度、纯度进行测定并予以记录。使纯度(ODA280/A260)为1.6～1.9，浓度为200～500 ng/μL，不符合要求的重新提取。经质量控制后，将与Excel数据库信息一一对应的DNA样本存入我院的重大疾病资源标本库，-80℃长期保存，初步建立DNA样本库。

1.2.3 数据库及DNA样本库的初步应用

1.2.3.1 抑郁症危险因素评估 比较不同职业、文化程度各组间HAMD-17评分的差异，进行危险因素的评估。

1.2.3.2 TPH-2基因与抑郁症自杀倾向的研究 随机抽取DNA样品268例，按有无自杀倾向(有自杀观念或未遂)分组：自杀倾向组123例，无自杀倾向组145例，以rs7305115为例，进行关联性研究。具体方法如下：(1)利用primer 5.0设计引物，引物为：5′-ACCTGAGCCCACGAGACTTT -3′和5′-TCGAGCCAGAGCTGGAATAT-3′。(2)PCR扩增目的片段，反应体系为25 μL，包括模板DNA 50 ng 、12.5 μL PCR Master Mix、正向及反向引物各0.5 μL、ddH2O 6.5 μL。反应条件为：94℃ 5 min，94℃ 30 s，55℃ 30 s，72℃ 30 s，共35个循环，72℃ 5 min。(3)扩增产物经琼脂凝胶电泳检测后，送往上海生物工程股份有限公司进行测序。

1.3统计学处理根据是否符合正态性及方差齐性检验，应用SPSS17.0软件对不同文化程度、职业组间HAMD-17评分差异进行t检验或秩和检验；对不同基因型组间HAMD-17评分差异进行单因素方差分析。利用SHEsis软件(http://analysis.bio-x.cn)进行Hardy-Weinberg遗传平衡度检验、组间等位基因和基因型频率差异分析。

2 结果

2.1DNA样本库及临床数据库的初步建立收集维吾尔族抑郁症患者基因组DNA共计800例，纯度为1.6～1.9，浓度为200～500 ng/μL；对样本库进行初步应用后发现，rs7305115位点中基因型成功测定率为99.6%，进一步证实了DNA样本质量可靠。且DNA样品与临床数据库信息严格对应，由本院重大疾病资源标本库专业人员保存，初步构建了DNA样品库和资料库。

2.2不同文化程度及职业患者HAMD-17评分的比较高中以下(包括高中)组HAMD-17评分为(26.45±0.30)分，与高中以上组HAMD-17评分(25.28±0.37)分比较，差异有统计学意义(Z=2.04，P=0.042)；体力劳动者组HAMD-17评分为(26.43±0.31)分，和脑力劳动者组HAMD-17评分(24.79±0.34)分比较，差异有统计学意义(Z=3.23，P<0.001)。

2.3不同基因型间HAMD-17评分的差异性比较对于rs7305115位点，剔除1例未成功测序的样本，发现A/A、A/G、G/G 3种不同基因型组间HAMD-17评分差异无统计学意义(P>0.05)，见表 1，测序图见图1。

表1 不同基因型间HAMD-17评分的比较 分)

图中箭头标注位置为突变位点A/G

2.4rs7305115基因多态性与抑郁症自杀倾向的关联性自杀倾向组与无自杀倾向组间性别、年龄均衡可比(P性别=0.35；P年龄=0.85)，且基因型的分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P>0.05)。两组间等位基因(P=0.20，OR=0.80，95%CI为0.57～1.12)与基因型(P=0.45)的分布频率差异均无统计学意义，见表2。

表2 rs7305115基因多态性与抑郁症自杀倾向的关联性/例(%)

3 讨论

新疆维吾尔族和汉族存在遗传学和地理及社会文化背景等差异。本研究以rs7305115为例进行的研究与Zhang等[15]的研究结论不相一致，提示内地建立的汉族抑郁症基因库及寻找的基因位点不一定适合新疆维吾尔族抑郁症病人。因此，建立维吾尔族抑郁症样品DNA库和临床数据库，是研究维吾尔族抑郁症发病机制、诊断、个体治疗及新药研究的基础。

通过对基因库质量的控制发现：DNA样本质量可靠，纯度为1.6～1.9，浓度为200～500 ng/μL。以rs7305115为例进行研究时，基因型成功测定率高达99.6%，且符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律，进一步说明DNA样品质量可靠，且有良好的群体代表性。通过对临床数据库相关风险因素的分析，发现低文化程度和体力劳动患者的病情严重，符合抑郁症发病的一般规律。

郝伟[16]研究提示5-HT相关基因可能参与抑郁症的发病机制。本研究通过初步应用该基因库，进行 TPH-2基因多态性与抑郁症的关联性研究。结果显示A/A、A/G、G/G 3种不同基因型组间HAMD-17评分差异无统计学意义；有自杀倾向组与无自杀倾向组间等位基因与基因型的分布频率差异无统计学意义，未能找到rs7305115与抑郁症自杀倾向有关的证据，也未能找到影响疾病严重程度的危险基因或基因型。考虑一方面可能与样本量偏小有关；另一方面，可能是由于维吾尔族特有的遗传因素所致。

综上所述，本研究初步建立了规范化的维吾尔族抑郁症DNA样品库及临床资料库，并以TPH-2基因为例对该库初步应用，进行其与抑郁症的关联性研究，进一步证实了该遗传资源库的可靠、科学。但离建立大规模基因样本库仍有一定距离，目前对维吾尔族抑郁症的DNA样本收集工作仍在继续，争取为今后维吾尔族抑郁症研究提供一定规模的生物学资源。

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