高效液相色谱法测定骨刺丸中欧前胡素含量

李学红，巩长芹，周利章

（山东省临沂市药品检验所，山东 临沂 276001）

骨刺丸[1]由制川乌、制草乌、制天南星、秦艽、白芷、当归、甘草、红花等12味药组方，具有祛风止痛的功效，用于骨质增生、风湿类关节炎、风湿痛。其中白芷为方中主药，欧前胡素为其主要有效成分。为进一步提高了该药质量控制标准，笔者采用高效液相色谱法测定骨刺丸中欧前胡素的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪，包括四元泵、在线脱气机、柱温箱、自动进样器、G1315D 1260DAD VL检测器（美国Agilent公司）；XS205DU型电子分析天平（梅特勒 －托利多公司）；KQ3200型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。欧前胡素对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为110826－201013，含量以 99．6%计）；骨刺丸（水蜜丸，河北万岁药业有限公司，批号分别为 111105，120203，120601）；甲醇为色谱纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2．1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：AgilentC18柱（250 mm×4．6mm，5 μm）以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇 －水（60 ∶40）；流速：1．0 mL ／min；柱温：35℃；检测波长：300 nm。理论板数按欧前胡素峰计算应不低于8 000。在此条件下，色谱图见图1。

2．2 溶液制备

图1 高效液相色谱图

精密称取欧前胡素对照品5．71 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取续滤液5 mL，置50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。参考2010年版《中国药典（一部）》中白芷原药材的含量测定方法[2]，取本品，研细，取约5 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声45 min，放冷，用甲醇补足减失的质量。精密量取续滤液25 mL，蒸干，用甲醇溶解并转移至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按骨刺丸中处方比例精密称取全方中除白芷外的其他药材，按供试品溶液的制备方法制备成阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

阴性干扰试验：按取2．2项下3种溶液适量，拟订方法测定。结果阴性对照品溶液色谱中在主成分出峰处无干扰峰（见图1）。

线性关系考察：精密吸取对照品溶液 5．0，8．0，10．0，12．0，15．0，20．0 μL，分别注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以对照品进样量（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y＝1 966．58X－0．666，r＝0．999 8（n＝6）。结果表明，欧前胡素进样量在0．028 4～0．113 7 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验：取同一对照品溶液，重复进样5次。结果的RSD为0．15%（n＝5），表明仪器的精密度良好。

重复性试验：取同一样品（批号为120601）5份，依法制备供试品溶液，分别进样测定，计算含量。结果欧前胡素含量的RSD为1．56%（n＝5），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一份供试品溶液（批号为120601），分别于0，1，2，4，8，12，24 h 时进样测定。结果欧前胡素含量的RSD为1．27%（n＝7），表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为120601，含量为0．027 mg／g），精密称定，共取6份，每份中精密加入欧前胡素对照品溶液，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件测定。结果见表1。

表1 欧前胡素加样回收试验结果（n＝6）

2．4 样品含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进行测定，记录峰面积，按外标法计算含量。结果批号分别为111105，120203，120601 的样品中欧前胡素含量分别为 0．029，0．026，0．027 mg ／g。

3 讨论

通过试验得知，欧前胡素在300 nm波长处有较大吸收[2]，其他成分在该波长处无干扰，因此选择300 nm为检测波长。

在对流动相进行选择时，考察了甲醇－水、乙腈－水以及两者的不同比例，结果以甲醇－水（60∶40）为流动相，所得色谱峰峰形较好，阴性无干扰，测定结果准确。

选择样品提取方法时，考察了超声30，45，60 min，热回流30，45，60 min，结果发现超声45 min与60 min时结果无明显差异，热回流与超声的结果基本一致，因此选择超声45 min提取样品，操作简单方便。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：889 －890．

[2]YBZ17512005，国家药品监督管理局标准（试行）[S]．