新疆维、汉民族乳腺良恶性病变组织中Axl及其配体蛋白Gas6的表达与临床意义

张明帅， 朱丽萍， 齐 新， 赵 倩， 吐鲁洪·沙比尔， 倪 多， 张国庆

(新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺外科， 乌鲁木齐 830011)

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，发病率逐年上升，但其发病及侵袭、转移机制还未完全阐明。有资料表明，超过50%的原癌基因和癌基因产物都具有蛋白酪氨酸激酶活性，它们的异常表达将导致细胞增殖调节发生紊乱，进而导致肿瘤的发生、侵袭及转移，与肿瘤新生血管的生成及肿瘤的化疗抗性密切相关[1]。TAM受体是最新的一个受体酪氨酸激酶家族，包括Tyro3、Axl和Mer 3个成员，它们具有共同的配体生长停滞特异性基因6蛋白(Gas6)。研究提示Axl在肺癌、脑胶质瘤、肝细胞癌等恶性肿瘤的形成、侵袭以及转移过程中扮演着重要的角色。当Axl与其配体Gas6 结合时，激活受体本身的酪氨酸蛋白激酶活性，进而催化下游分子，起到信号转导的作用[2]。研究显示新疆维、汉民族乳腺癌患者临床和病理特征不同，与汉族乳腺癌患者相比维吾尔族女性乳腺癌患者生育次数较多、原发肿块较大、腋窝淋巴结转移数目较多[3-6]。近年来新疆维、汉民族女性乳腺癌的发病率逐年上升，但是目前还没有维、汉民族乳腺癌发病率的流行病学调查。目前国内还未见关于Axl和Gas6的表达情况在不同民族乳腺癌患者间的表达情况的研究。因此，对比分析和研究影响新疆维、汉民族乳腺癌发生、发展的危险因素在少数民族地区具有一定现实意义和价值。本研究采用PV-9000法免疫组织化学技术检测新疆维、汉民族乳腺癌、乳腺良性增生组织中Axl和Gas6表达水平，并探讨其临床病理意义。

1 资料与方法

1.1临床资料选择2006年1月-2007年1月新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺外科收治的Ⅰ～Ⅲ期可手术且临床资料完整的女性乳腺癌患者252例。收集患者的临床和病理资料,内容包括年龄、肿瘤大小、病理类型、淋巴结转移情况、组织学分级、脉管浸润、分子分型(根据ER、PR、Her-2及Ki-67表达情况分型)[7]、Axl和Gas6蛋白表达情况。乳腺癌患者分期依据第六版AJCC标准进行,其中维吾尔族88例(Ⅰ期22例，Ⅱ期50例，Ⅲ期16例)，平均年龄45.6岁；汉族164例(Ⅰ期38例，Ⅱ期108例，Ⅲ期18例)，平均年龄47岁；维吾尔族患者和汉族患者在临床分期(χ2=1.515，P=0.469)及年龄(t=0.355，P=0.573)相比差异无统计学意义；所有患者均行手术治疗，其中行根治术者66例，改良根治术者170例，保乳手术者16例。本组252例患者经手术治疗后腋窝淋巴结检出数10～41枚，平均15枚。所有患者在行手术前均未行化疗、放疗及内分泌治疗。腋窝淋巴结清扫范围为第1～3站水平，送检淋巴结至少10枚。选取同期入院的21例乳腺良性增生患者的组织为对照组。

1.2方法采用免疫组织化学染色PV-9000法检测ER、PR、Her-2、Ki67、Axl、Gas6的表达(ER、PR、Her-2、Ki67单克隆抗体均购自北京中杉金桥生物技术有限公司)。兔抗人Axl、Gas6多克隆抗体购自Santa Cruz公司。Axl及Gas6阳性表达判断标准参考文献[8]。染色强度判定标准为：无染色记为0分，染色浅(即稍高于背景)记为1分，中等染色(明显高于背景)记为2分，强染色记为3分，极强染色记为4分。光镜下分别计数300个细胞，并计算阳性细胞百分数。阳性细胞数积分：≤10%记为0分，11%～25%记为1分，26%～50%记为2分，51%～75%记为3分，>75%记为4分。然后将两项积分相加，7～8分为强阳性(+++)，4～6分为阳性(++)，2～3分为弱阳性(+)，0～1分为阴性(-)。

1.3统计学处理用SPPSS18.0统计软件包对数据进行统计学分析，Axl和Gas6表达与病理学或临床因素的关系采用卡方检验或Fisher’s精确概率法，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1Axl和Gas6在乳腺癌和正常组织中的表达情况在乳腺癌组织中Axl蛋白的阳性表达率为63.5%，明显高于正常对照组织的28.6%，差异有统计学意义(P<0.05)；Gas6在癌组织的阳性表达率为47.6%，明显高于正常对照组的23.8%，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。Axl阳性信号为胞膜上及胞质内棕黄色颗粒，见图1；Gas6阳性信号为胞质内的棕黄色颗粒，见图2。

表1 Axl和Gas6在乳腺癌和正常组织中的表达情况/例(%)

图1 Axl在乳腺癌组织中阳性表达(+++) (PV 9000×400) 图 2 Gas6在乳腺癌组织中阳性表达 (+++) (PV 9000×400)

2.2Axl和Gas6的表达与乳腺癌临床及病理特征的关系不同民族、不同年龄组、不同病理类型及不同分子分型组间Axl和Gas6蛋白的阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)；随着肿瘤T分期的增高，Axl和Gas6蛋白的阳性表达率也逐渐增高，差异均具有统计学意义(P<0.05)；组织学分级在不同分级组间Axl和Gas6蛋白的阳性表达率差异均有统计意义(P<0.05) ，随着组织学分级的增高Axl和Gas6蛋白的阳性表达率也逐渐增高；在淋巴结有转移组的Axl和Gas6蛋白的阳性表达率分别为70.4%、56.3%，明显高于淋巴结无转移组的50.9%和36.4%，差异有统计学意义(P<0.05)；在脉管有浸润组的Axl和Gas6蛋白的阳性表达率明显高于无浸润组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

3 讨论

乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一，在欧美等国家，乳腺癌发病率已跃居女性恶性肿瘤的首位[9]。近10年来，我国乳腺癌的发病率与死亡率分别以每年2.4%和3%的速度上升，成为城市中增长最快的恶性肿瘤。目前我国乳腺癌发病率已经超过卵巢癌而跃居中国女性恶性肿瘤发病之榜首，严重影响着我国广大妇女的身心健康。

Axl是近年来在与乳腺癌的发生、发展关系的领域中研究的较为热点的指标[10]。研究发现Axl在癌细胞中的高表达与细胞的恶性表型、肿瘤分期差、预后不良等相关[11-13]。本组资料显示，在新疆维吾尔族女性乳腺癌中的Axl阳性表达率为65.9%，高于汉族的59.8%，但两组比较差异无统计学意义(P>0.05)，同样维吾尔族女性乳腺癌中Gas6阳性表达率为56.8%，高于汉族的42.7%，两组比较差异也无统计学意义(P>0.05)。本组资料显示T1期乳腺癌患者Axl的阳性表达率为44.7%，而T2 和T3期分别为68.8%、75.0%，Gas6的阳性表达率在T1、T2及T3期分别为32.6%、75%和52.5%，随着肿瘤T分期的增高Axl和Gas6蛋白的阳性表达率也逐渐增高，差异均有统计学意义(P<0.05)，此结果与文献[13]报道的相同，说明Axl和Gas6蛋白的表达与乳腺原发病灶的大小有一定的关系。

本研究显示，在良性增生组织中Axl和Gas6蛋白的阳性表达率分别为28.6%和23.8%，明显低于乳腺癌组织中的63.5%和47.6%，差异有统计学意义(P<0.05)，提示Axl和Gas6的高表达与肿瘤恶性程度密切相关，可以为判断乳腺肿瘤性质及其预后提供参考意见。本组资料显示在淋巴结有转移组的Axl和Gas6蛋白的阳性表达率分别为70.4%、56.3%，明显高于淋巴结无转移组的50.9%和36.4%，差异有统计学意义(P<0.05)。与文献[13-15]报道相同。本组资料显示Axl和Gas6蛋白的阳性表达率在不同组织学分级组间差异有统计意义(P<0.05)，随着组织学分级的增高Axl和Gas6蛋白的阳性表达率也逐渐增高；本组资料显示在脉管有浸润组Axl的阳性表达率为75.6%，高于脉管无浸润组的54.3%，差异有统计学意义(P<0.05)，Gas6蛋白的阳性表达率在脉管有浸润组和无浸润组分别为60.0%和40.7%，两组比较差异有统计学意义，说明Axl 和Gas6的表达与乳腺癌脉管浸润有一定的关系。因此，可以说Axl/Gas6表达程度的高低与乳腺癌细胞的侵袭能力、恶性程度及淋巴结的转移能力有关。

表2 Axl和Gas6的表达与乳腺癌临床及病理特征的关系/例(%)

本组资料显示，在不同分子分型乳腺癌中Luminal A 型Axl的阳性表达率为68.8%，Luminal B 型为68.8%，三阴性乳腺癌为46.9%，Her-2阳性型为57.1%，组间比较Axl的阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。同样，本研究也未发现各分子分型间Gas6蛋白的阳性表达率差异有统计学意义(P>0.05)。但是Bette等[16]报道Axl表达只出现在ER表达阳性的患者中，在乳腺癌细胞系中ER的拮抗剂可以减少Axl的表达。但是本组资料并未发现这种结果，虽然在三阴性乳腺癌和Her-2阳性型乳腺癌中Axl的阳性表达率较Luminal A 型和Luminal B型明显较低，但经统计学分析各分子分型组间差异无统计学意义，与文献[16]报道不同。有关Axl的表达情况与ER状况的研究较少，国内外尚未见有关Axl的表达状况与分子分型间的研究，因此关于Axl及Gas6与分子分型间的关系的研究尚需进行深入的研究。

综上所述，乳腺癌Axl及其配体蛋白的阳性表达率明显高于正常对照组织，随着肿瘤组织的增大、组织学分级的增高及脉管浸润Axl及其配体蛋白的阳性表达率明显增高。同时，在淋巴结有转移组的Axl及其配体的阳性表达率也较未转移组明显增高，提示Axl及其配体与乳腺癌的发生、发展、浸润及转移有密切的关系。考虑可将Axl和Gas6在乳腺肿瘤细胞中的表达检测作为判断乳腺肿瘤性质及判断预后的一个指标，为肿瘤早期发现、早期诊断提供依据。

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