高效液相色谱法测定连花清瘟胶囊中连翘酯苷A的含量

苏平菊 陈红燕 安青松 王娟敏

高效液相色谱法测定连花清瘟胶囊中连翘酯苷A的含量

苏平菊 陈红燕 安青松 王娟敏

目的 建立采用高效液相色谱法测定连花清瘟胶囊中连翘酯苷A含量的方法。方法 采用C18 色谱柱 , 乙腈 -0.1% 磷酸溶液为流动相梯度洗脱 , 检测波长 228 nm。结果 连翘酯苷 A 在 18.6～186 ng 浓度范围内呈良好的线性关系。连翘酯苷 A 平均回收率为 99.16%(n=6), RSD=1.58%。结论 该法操作简便准确、专属性强 , 可作为连花清瘟胶囊的质量控制方法。

高效液相色谱法 ；连花清瘟胶囊醇提浸膏 ；连翘酯苷A ；含量测定

连花清瘟胶囊由金银花、连翘、石膏等 13 味药组成［1］。清瘟解毒 , 宣肺泄热。本品种收载于《中国药典》(2010 年版第二增补本 ), 连翘酯苷 A 为处方中连翘的主要成分之一 ,因此采用高效液相色谱法对本品连翘酯苷A的含量测定进行了研究［2］。

1 仪器与试药

1. 1 仪器 高效液相色谱仪 (Waters 2695)。

1. 2 试药 连翘酯苷 A 对照品 (购自中国药品生物制品检定所 ), 乙腈为色谱纯 , 其它试验所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2. 1 色谱条件 色谱柱 ：用十八烷基硅烷键合硅胶为填料 ；流动相乙腈 -0.1%磷酸梯度洗脱 ；流速 0.4 ml/min；检测波长 228 nm；理论塔板数按连翘酯苷 A峰计算应不低于 3000。

2. 2 供试品溶液制备 取供试品 (批号 120406), 约 0.5 g, 精密称定 , 置具塞锥形瓶中 , 精密加入甲醇 25 ml, 密塞 , 称重 ,超声外理 30 min, 取出 , 放冷 , 再称定重量 , 用甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 , 即得。

2. 3 对 照 品 溶 液 的 制 备 精 密 称 取 连 翘 酯 苷 A对 照 品23.25 mg, 置 25 ml量瓶中 , 加甲醇溶解 , 并定容至刻度 , 摇匀 ,即得。再精密吸取上述对照品溶液 2 ml, 置 25 ml量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 即得。浓度 ：74.4 μg/ml。

2. 4 阴性试验 按处方比例称取除连翘外的其它方中药材 ,按制备工艺制得阴性样品 , 按供试品溶液的方法进行处理 ,得阴性供试品溶液。分别吸取阴性供试品溶液、对照品溶液及供试品溶液 , 按照选定测定条件进行检测 , 结果表明 ：在连翘酯苷 A相应的保留时间 , 阴性样品无相应波峰出现。

2. 5 线性范围考察 精密吸取浓度为 186 μg/ml的对照品溶 液 0.1、0.2、0.4、0.5、0.8、1.0 μl注 入 液 相 色 谱 仪 , 测定峰面积见表1。以峰面积积分值为纵坐标 , 进样量为横坐标 , 绘制标准曲线。结果表明 ：连翘酯苷 A浓度在 18.6~186 ng范围内呈良好线性关系 , 回归方程为 ：Y=2301.7X-257.33, r=0.9997。见表1。

表1 线性考察结果

2. 6 进样精密度考察 吸取对照品溶液 , 连续进样 5次 ,连翘酯苷 A对照品 5次测定的 RSD为 0.25%, 说明仪器性能良好。

2 .7 供试品溶液稳定性考察 精密吸取供试品溶液 , 每隔一定时间进样 , 考察了 16 h 内的稳定性 , 结果见表2。

表2 稳定性实验结果

从以上结果可见 , 供试品峰面积 RSD 值 0.39%,表明在测定的 16 h 内 , 供试品稳定。

2. 8 重复性试验 取同一批供试品 (批号 120406), 按高、中、低剂量取样 , 每个剂量取 3 份 , 按供试品含量测定项下方法 ,进行提取 , 制备 , 测定结果 , 连翘酯苷 A的平均含量 2.3660 mg/g, RSD 为 0.995%。表明方法重现性良好。

2. 9 回收率试验 采用加样回收试验 , 取同一批供试品 (批号 120406)6 份 , 加入连翘酯苷 A 对照品溶液 , 按供试品含量测定项下方法 , 进行提取 , 制备 , 测定 , 计算回收率。连翘酯苷 A 的平均回收率为 99.16%(n=6), RSD 为 1.56%, 结果见表3。

表3 回收率试验结果

2. 10 样品含量测定 按上述方法测定 3 批样品含量 , 结果

见表4。

表4 样品含量测定结果

3 讨论

本实验对含量测定中供试品溶液的制备方法进行了研究。

3. 1 提取溶媒选择实验结果表明 , 50%甲醇、75%甲醇和甲醇对连翘酯苷 A的提取含量影响不大 , 但 50%甲醇过滤较困难 , 以甲醇为提取溶媒时杂质峰较 75% 甲醇小 , 为更好地保护色谱柱 , 因此选择甲醇为提取溶媒。

3. 2 超声提取时间考察实验结果表明 , 超声提取 15、30和45 min对连翘酯苷 A的含量影响不大 , 但为保证充分提取 ,选定超声提取时间为 30 min。

［1］国家药典委员会 . 中国药典 (一部 ). 北京 :中国医药科技出版社 , 2010:159-160.

［2］国家药典委员会 . 中国药典 (第二增补本 ).北京 :中国医药科技出版社 , 2013:35-36.

2014-04-14］

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