2种观赏柳愈伤诱导外植体与最佳激素筛选试验

王莹等

摘要：对2种观赏柳旱柳（Salix matsudana）、龙爪柳（Salix matsudana）进行愈伤组织诱导培养研究。结果表明：利用茎尖诱导培养愈伤组织的诱导效果明显优于叶片；选用乙醇与HgCl2溶液组合作为消毒剂，灭菌效果较好；3个因素对旱柳、龙爪柳愈伤组织诱导影响由大到小依次为NAA浓度、6-BA浓度、2，4-D浓度，对2种柳树而言，最优组合均为6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.4 mg/L+2，4-D 0.3 mg/L。

关键词：柳树；外植体；愈伤组织；诱导培养；新品系；诱变选育

中图分类号： S687.043；Q943.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0066-03

收稿日期：2013-07-31

基金项目：江苏沿江地区农业科学研究所青年科技基金（编号：G122601）。

作者简介：王莹（1986—），女，硕士研究生，研究实习员，主要从事耐盐植物育种研究。E-mail：huakaihualuowyw@163.com。柳树为杨柳科（Salicaceae）柳属（Salix）落叶乔木、灌木或亚灌木，分布广泛，品种丰富，适应性强。由于其具有速生、抗盐碱、耐瘠薄、抗风沙等优良特性，越来越受到育种工作者的青睐[1]。很多学者在柳树综合开发及遗传改良方面作了大量工作[2]。受传统方法的限制，柳树育种研究存在技术瓶颈，如传统的人工杂交方法耗时耗力、育种周期长[3]。转基因技术虽然在柳树新品种选育方面已得到应用，但是因为其转导效率低且成本高等问题，效果并不显著[4]。利用EMS化学诱变技术，可以有效解决诱变率低、成本高、育种周期长等问题，目前该技术已经在农作物及果树中得到广泛应用[5]。旱柳（Salix matsudana）枝条柔软，树冠丰满，是我国北方常用的行道树。龙爪柳（Salix matsudana）小枝绿色且呈不规则扭曲，在我国各地多作为庭院绿化树种。这2种柳树都具有很高的观赏价值，深受人们的喜爱，但是其耐盐碱性均不强。笔者以旱柳、龙爪柳为研究对象，建立愈伤组织培养体系，旨在为柳树新品系的诱变选育提供依据。

1材料与方法

1.1材料

供试材料为旱柳与龙爪柳幼嫩的茎段与叶片，均采自江苏沿江地区农业科学研究所柳树种质资源圃。采集2种柳树当年生木质化茎段，截成长约10～15 cm的小段，扦插在装有基质的育苗容器中，恒温光照培养箱培养，光照时间为 16 h/d，控制温度为（25±1） ℃。

1.2方法

1.2.1适宜外植体的筛选外植体有2种。（1）幼嫩茎段：每个茎段留1～2个腋芽，每个茎段长1.5～2.0 cm；（2）幼嫩叶片：用解剖刀将叶片切成1 cm×1 cm的小块。培养基为：MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L。

1.2.2消毒灭菌将合适的外植体置于洗洁精溶液中浸泡30 min，再用流动的自来水冲洗1.5～2 h，置于超净台上。先用75%乙醇浸泡外植体30 s，然后用无菌水冲洗3～4次，再用0.1%HgCl2溶液浸泡10～20 min，其间不断搅动使外植体与溶液充分接触，之后用无菌水冲洗6～7次，用无菌滤纸吸干水分进行接种。

1.2.3激素种类与浓度的确定选用6-BA、NAA、2，4-D 3种激素，设计正交试验（表1），以MS为基本培养基，蔗糖浓度为30 g/L，琼脂7 g/L，调节pH值为5.8，每瓶培养基接种2个外植体。

3结论与讨论

植物表面携带大量的微生物，尤其是内生菌较多的外植体，在接种前要进行彻底的消毒处理，但是消毒过度也会造成植物褐化及细胞死亡。本研究选用乙醇与HgCl2溶液组合作为消毒剂，灭菌效果较好。选取外植体时，生长活跃的器官一般能获得较好的诱导效果[6]。本研究表明，利用茎尖诱导培养愈伤组织的诱导效果明显优于叶片。植物生长调节物的配比及浓度可以极大地影响愈伤组织的诱导效率、质地、生长量等[7]。本研究表明，3个因素对旱柳、龙爪柳愈伤组织诱导影响由大到小依次为NAA浓度、6-BA浓度、2，4-D浓度，对2种柳树而言，最优组合都为6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.4 mg/L+2，4-D 0.3 mg/L。中浓度的NAA与6-BA配合使用，可以显著促进愈伤组织的发生与生长；高浓度的2，4-D不利于龙爪柳愈伤组织的生长，培养后期会出现玻璃化现象，这可能与激素配比不当有关。

参考文献：

[1]孙兆祜，张玉霞，梁群宝. 几种柳树抗逆性调查初报[J]. 甘肃林业科技，1999，24（1）：21-22，34.

[2]刘巍，蔄胜军. 柳树遗传改良研究进展[J]. 辽宁林业科技，2012（1）：45-48.

[3]张继明，张彩军，郭俊. 柳树杂交育种研究[J]. 内蒙古林业科技，2001（2）：9-13.

[4]王源秀，徐立安，黄敏仁. 柳树遗传学研究现状与前景[J]. 植物学通报，2008，25（2）：240-247.

[5]吴伟刚，刘桂茹，杨学举. 诱变与组织培养相结合在植物育种中的应用[J]. 中国农学通报，2005，21（11）：197-201.

[6]黄华艳，吴耀军. 柳窿桉芽器官离体培养研究[J]. 广西林业科学，2003，32（1）：27-28.

[7]梁慧敏，黄剑，夏阳，等. 苜蓿组织培养高频率再生体系的建立[J]. 农业生物技术学报，2003，11（3）：321-322.

摘要：对2种观赏柳旱柳（Salix matsudana）、龙爪柳（Salix matsudana）进行愈伤组织诱导培养研究。结果表明：利用茎尖诱导培养愈伤组织的诱导效果明显优于叶片；选用乙醇与HgCl2溶液组合作为消毒剂，灭菌效果较好；3个因素对旱柳、龙爪柳愈伤组织诱导影响由大到小依次为NAA浓度、6-BA浓度、2，4-D浓度，对2种柳树而言，最优组合均为6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.4 mg/L+2，4-D 0.3 mg/L。

关键词：柳树；外植体；愈伤组织；诱导培养；新品系；诱变选育

中图分类号： S687.043；Q943.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0066-03

收稿日期：2013-07-31

基金项目：江苏沿江地区农业科学研究所青年科技基金（编号：G122601）。

作者简介：王莹（1986—），女，硕士研究生，研究实习员，主要从事耐盐植物育种研究。E-mail：huakaihualuowyw@163.com。柳树为杨柳科（Salicaceae）柳属（Salix）落叶乔木、灌木或亚灌木，分布广泛，品种丰富，适应性强。由于其具有速生、抗盐碱、耐瘠薄、抗风沙等优良特性，越来越受到育种工作者的青睐[1]。很多学者在柳树综合开发及遗传改良方面作了大量工作[2]。受传统方法的限制，柳树育种研究存在技术瓶颈，如传统的人工杂交方法耗时耗力、育种周期长[3]。转基因技术虽然在柳树新品种选育方面已得到应用，但是因为其转导效率低且成本高等问题，效果并不显著[4]。利用EMS化学诱变技术，可以有效解决诱变率低、成本高、育种周期长等问题，目前该技术已经在农作物及果树中得到广泛应用[5]。旱柳（Salix matsudana）枝条柔软，树冠丰满，是我国北方常用的行道树。龙爪柳（Salix matsudana）小枝绿色且呈不规则扭曲，在我国各地多作为庭院绿化树种。这2种柳树都具有很高的观赏价值，深受人们的喜爱，但是其耐盐碱性均不强。笔者以旱柳、龙爪柳为研究对象，建立愈伤组织培养体系，旨在为柳树新品系的诱变选育提供依据。

1材料与方法

1.1材料

供试材料为旱柳与龙爪柳幼嫩的茎段与叶片，均采自江苏沿江地区农业科学研究所柳树种质资源圃。采集2种柳树当年生木质化茎段，截成长约10～15 cm的小段，扦插在装有基质的育苗容器中，恒温光照培养箱培养，光照时间为 16 h/d，控制温度为（25±1） ℃。

1.2方法

1.2.1适宜外植体的筛选外植体有2种。（1）幼嫩茎段：每个茎段留1～2个腋芽，每个茎段长1.5～2.0 cm；（2）幼嫩叶片：用解剖刀将叶片切成1 cm×1 cm的小块。培养基为：MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L。

1.2.2消毒灭菌将合适的外植体置于洗洁精溶液中浸泡30 min，再用流动的自来水冲洗1.5～2 h，置于超净台上。先用75%乙醇浸泡外植体30 s，然后用无菌水冲洗3～4次，再用0.1%HgCl2溶液浸泡10～20 min，其间不断搅动使外植体与溶液充分接触，之后用无菌水冲洗6～7次，用无菌滤纸吸干水分进行接种。

1.2.3激素种类与浓度的确定选用6-BA、NAA、2，4-D 3种激素，设计正交试验（表1），以MS为基本培养基，蔗糖浓度为30 g/L，琼脂7 g/L，调节pH值为5.8，每瓶培养基接种2个外植体。

3结论与讨论

植物表面携带大量的微生物，尤其是内生菌较多的外植体，在接种前要进行彻底的消毒处理，但是消毒过度也会造成植物褐化及细胞死亡。本研究选用乙醇与HgCl2溶液组合作为消毒剂，灭菌效果较好。选取外植体时，生长活跃的器官一般能获得较好的诱导效果[6]。本研究表明，利用茎尖诱导培养愈伤组织的诱导效果明显优于叶片。植物生长调节物的配比及浓度可以极大地影响愈伤组织的诱导效率、质地、生长量等[7]。本研究表明，3个因素对旱柳、龙爪柳愈伤组织诱导影响由大到小依次为NAA浓度、6-BA浓度、2，4-D浓度，对2种柳树而言，最优组合都为6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.4 mg/L+2，4-D 0.3 mg/L。中浓度的NAA与6-BA配合使用，可以显著促进愈伤组织的发生与生长；高浓度的2，4-D不利于龙爪柳愈伤组织的生长，培养后期会出现玻璃化现象，这可能与激素配比不当有关。

参考文献：

[1]孙兆祜，张玉霞，梁群宝. 几种柳树抗逆性调查初报[J]. 甘肃林业科技，1999，24（1）：21-22，34.

[2]刘巍，蔄胜军. 柳树遗传改良研究进展[J]. 辽宁林业科技，2012（1）：45-48.

[3]张继明，张彩军，郭俊. 柳树杂交育种研究[J]. 内蒙古林业科技，2001（2）：9-13.

[4]王源秀，徐立安，黄敏仁. 柳树遗传学研究现状与前景[J]. 植物学通报，2008，25（2）：240-247.

[5]吴伟刚，刘桂茹，杨学举. 诱变与组织培养相结合在植物育种中的应用[J]. 中国农学通报，2005，21（11）：197-201.

[6]黄华艳，吴耀军. 柳窿桉芽器官离体培养研究[J]. 广西林业科学，2003，32（1）：27-28.

[7]梁慧敏，黄剑，夏阳，等. 苜蓿组织培养高频率再生体系的建立[J]. 农业生物技术学报，2003，11（3）：321-322.

摘要：对2种观赏柳旱柳（Salix matsudana）、龙爪柳（Salix matsudana）进行愈伤组织诱导培养研究。结果表明：利用茎尖诱导培养愈伤组织的诱导效果明显优于叶片；选用乙醇与HgCl2溶液组合作为消毒剂，灭菌效果较好；3个因素对旱柳、龙爪柳愈伤组织诱导影响由大到小依次为NAA浓度、6-BA浓度、2，4-D浓度，对2种柳树而言，最优组合均为6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.4 mg/L+2，4-D 0.3 mg/L。

关键词：柳树；外植体；愈伤组织；诱导培养；新品系；诱变选育

中图分类号： S687.043；Q943.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0066-03

收稿日期：2013-07-31

基金项目：江苏沿江地区农业科学研究所青年科技基金（编号：G122601）。

作者简介：王莹（1986—），女，硕士研究生，研究实习员，主要从事耐盐植物育种研究。E-mail：huakaihualuowyw@163.com。柳树为杨柳科（Salicaceae）柳属（Salix）落叶乔木、灌木或亚灌木，分布广泛，品种丰富，适应性强。由于其具有速生、抗盐碱、耐瘠薄、抗风沙等优良特性，越来越受到育种工作者的青睐[1]。很多学者在柳树综合开发及遗传改良方面作了大量工作[2]。受传统方法的限制，柳树育种研究存在技术瓶颈，如传统的人工杂交方法耗时耗力、育种周期长[3]。转基因技术虽然在柳树新品种选育方面已得到应用，但是因为其转导效率低且成本高等问题，效果并不显著[4]。利用EMS化学诱变技术，可以有效解决诱变率低、成本高、育种周期长等问题，目前该技术已经在农作物及果树中得到广泛应用[5]。旱柳（Salix matsudana）枝条柔软，树冠丰满，是我国北方常用的行道树。龙爪柳（Salix matsudana）小枝绿色且呈不规则扭曲，在我国各地多作为庭院绿化树种。这2种柳树都具有很高的观赏价值，深受人们的喜爱，但是其耐盐碱性均不强。笔者以旱柳、龙爪柳为研究对象，建立愈伤组织培养体系，旨在为柳树新品系的诱变选育提供依据。

1材料与方法

1.1材料

供试材料为旱柳与龙爪柳幼嫩的茎段与叶片，均采自江苏沿江地区农业科学研究所柳树种质资源圃。采集2种柳树当年生木质化茎段，截成长约10～15 cm的小段，扦插在装有基质的育苗容器中，恒温光照培养箱培养，光照时间为 16 h/d，控制温度为（25±1） ℃。

1.2方法

1.2.1适宜外植体的筛选外植体有2种。（1）幼嫩茎段：每个茎段留1～2个腋芽，每个茎段长1.5～2.0 cm；（2）幼嫩叶片：用解剖刀将叶片切成1 cm×1 cm的小块。培养基为：MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L。

1.2.2消毒灭菌将合适的外植体置于洗洁精溶液中浸泡30 min，再用流动的自来水冲洗1.5～2 h，置于超净台上。先用75%乙醇浸泡外植体30 s，然后用无菌水冲洗3～4次，再用0.1%HgCl2溶液浸泡10～20 min，其间不断搅动使外植体与溶液充分接触，之后用无菌水冲洗6～7次，用无菌滤纸吸干水分进行接种。

1.2.3激素种类与浓度的确定选用6-BA、NAA、2，4-D 3种激素，设计正交试验（表1），以MS为基本培养基，蔗糖浓度为30 g/L，琼脂7 g/L，调节pH值为5.8，每瓶培养基接种2个外植体。

3结论与讨论

植物表面携带大量的微生物，尤其是内生菌较多的外植体，在接种前要进行彻底的消毒处理，但是消毒过度也会造成植物褐化及细胞死亡。本研究选用乙醇与HgCl2溶液组合作为消毒剂，灭菌效果较好。选取外植体时，生长活跃的器官一般能获得较好的诱导效果[6]。本研究表明，利用茎尖诱导培养愈伤组织的诱导效果明显优于叶片。植物生长调节物的配比及浓度可以极大地影响愈伤组织的诱导效率、质地、生长量等[7]。本研究表明，3个因素对旱柳、龙爪柳愈伤组织诱导影响由大到小依次为NAA浓度、6-BA浓度、2，4-D浓度，对2种柳树而言，最优组合都为6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.4 mg/L+2，4-D 0.3 mg/L。中浓度的NAA与6-BA配合使用，可以显著促进愈伤组织的发生与生长；高浓度的2，4-D不利于龙爪柳愈伤组织的生长，培养后期会出现玻璃化现象，这可能与激素配比不当有关。

参考文献：

[1]孙兆祜，张玉霞，梁群宝. 几种柳树抗逆性调查初报[J]. 甘肃林业科技，1999，24（1）：21-22，34.

[2]刘巍，蔄胜军. 柳树遗传改良研究进展[J]. 辽宁林业科技，2012（1）：45-48.

[3]张继明，张彩军，郭俊. 柳树杂交育种研究[J]. 内蒙古林业科技，2001（2）：9-13.

[4]王源秀，徐立安，黄敏仁. 柳树遗传学研究现状与前景[J]. 植物学通报，2008，25（2）：240-247.

[5]吴伟刚，刘桂茹，杨学举. 诱变与组织培养相结合在植物育种中的应用[J]. 中国农学通报，2005，21（11）：197-201.

[6]黄华艳，吴耀军. 柳窿桉芽器官离体培养研究[J]. 广西林业科学，2003，32（1）：27-28.

[7]梁慧敏，黄剑，夏阳，等. 苜蓿组织培养高频率再生体系的建立[J]. 农业生物技术学报，2003，11（3）：321-322.