猪流感的生物学特性及诊断方法

赵显威 邵善英 邹红梅 胡翠清

猪流感病毒是正黏液病毒，可引起地方性猪群流行性感冒。世界卫生组织将此前被称为猪流感的新型致命病毒更名为H1N1甲型流感。猪流感是具有高度传染性的猪只呼吸系统传染病，其特点为发病急骤，突然发烧及伤风，康复和发病一样快。猪流感病毒与感染人类的流感病毒同属，此病毒具人畜共同感染的特性，猪群发生猪流感通常与猪场引进新猪群有关。

一、猪流感的生物学特性

1.抗原性 根据流感病毒的表面和内部抗原特性，流感病毒可分为A、B 和C三个亚型。猪流感病毒属于A 型流感病毒属，A型流感病毒能够引起猪急性呼吸道传染病。A型和B型病毒的内部抗原为核蛋白和基脂蛋白，性质稳定，可用血清学方法区分。猪流感病毒的抗原性较强，被感染的动物一般都能产生较高水平的抗体。

2.血凝特性 其血凝谱相当广泛，在适当条件下，猪流感病毒能凝集包括鸡、兔、牛等动物和人的红细胞。猪流感病毒的血凝活性并不一致，同一代次、同一亚型、不同毒株的血凝价相差很大。猪流感病毒的血凝活性容易被破坏，血凝素具有热不稳定性，60℃处理10分钟即可灭活。

3.增殖特性 犊牛肾细胞、胎猪肺细胞、猪肾细胞、鸡胚成纤维细胞、人二倍体细胞等动物细胞的猪流感病毒的感受性都很高，通过研究，鸡胚对猪流感病毒的易感性高于细胞。因此，通常采用鸡胚进行病料培养。病毒接种细胞，也能产生细胞病变，表现为细胞圆缩和脱落。但细胞经连续传代，病毒对细胞的感染性会降低，猪流感疫苗的生产通常采用鸡胚培养。

二、猪流感的诊断方法

猪流感的诊断可通过剖检观察，也可从病猪的样品中分离和培养猪流感病毒。猪流感病毒的快速、准确的检测方法为抗原检测，由于病毒的敏感性比较高高，所以通常被认为是猪流感诊断的“金标准”。目前，检测常用的方法有血凝试验和血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验、免疫荧光技术和免疫组化技术。

1.血凝试验和血凝抑制试验 血凝素蛋白存在于猪流感病毒表面，但一些动物（鸡、豚鼠和人的O型血等）血凝素受体附着在红细胞表面，由于猪流感病毒粒子的吸附作用使红细胞产生凝集现象，称为血凝试验，相应的抗血清可抑制猪流感病毒的吸附凝集作用，称血凝抑制试验。方便、快捷、易于操作及敏感性、特异性好是血凝试验和血凝抑制试验特有的优势，常被用于培养物中猪流感病毒的检测。

2.免疫组化检测 研究者用中性甲醛固定含有猪流感病毒的组织，然后通过石蜡包埋组织，进行免疫组化研究。研究者在确认含有病毒的30例组织中，通过免疫组化技术检测到28例组织含有猪流感病毒。

3.酶联免疫吸附试验 操作简便、特异性强、敏感性高，易于直接用眼观察，可进行大量样本的检测，适于基层和现场的快速检测。酶联免疫吸附试验是近代血清学检测上革命性、标志性的新成果。研究者通过建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验，可检测出禽源、马源、猪源和人源的A型流感病毒。抗原捕获酶联免疫吸附试验，能将纯化病毒的最低检测量减少至1纳克/毫升。

4.分子诊断技术 传统的诊断方法操作比较繁琐，而且诊断的重复性差。在传统方法的基础上，对病毒进行分离和亚型鉴定，然后用分子生物学技术进行快速诊断，主要有聚合酶链式反应（PCR）、荧光定量PCR、基因芯片和蛋白芯片等技术，上述技术特异性强、诊断速度快、灵敏性高，已广泛应用于实验室的病毒诊断。

5.免疫荧光技术 主要用于样品的快速检测，敏感性强、特异性高是其最大优点。研究者通过使用单克隆抗体的间接免疫荧光技术对猪鼻上皮细胞中的猪流感病毒抗原进行检测，特异性荧光出现在感染细胞的细胞浆和细胞核内。另外，免疫荧光技术与鸡胚分离病毒一样敏感，能在短短的数小时内快速分析出诊断结果。