240例耳聋患者常见耳聋基因筛查分析

曲长红，张 宁，曹东华，郝冬梅

解放军第202医院 优生优育计划生育研究所，辽宁沈阳 110003

240例耳聋患者常见耳聋基因筛查分析

曲长红，张 宁，曹东华，郝冬梅

解放军第202医院 优生优育计划生育研究所，辽宁沈阳 110003

目的 分析非综合征型耳聋患者常见耳聋基因突变情况，探讨遗传性耳聋基因芯片检测的临床意义。方法 2013年3 - 8月来自沈阳市和平区残联的非综合征型耳聋患者240例，患者或监护人签署知情同意后提取被检者外周静脉血基因组DNA，采用晶芯®遗传性耳聋基因检测试剂盒对常见的4个耳聋基因(GJB2、GJB3、SLC26A4以及线粒体12S rRNA)的9个突变位点进行检测。结果 240例受检者中，102例存在被检测基因突变，其中GJB2基因突变44例(18.33%，44/240)，SLC26A4基因突变38例(15.83%，38/240)，线粒体12S rRNA基因突变17例(7.08%，17/240)，GJB3 538 C＞T 1例(0.39%，1/240)。明确诊断为遗传性耳聋60例，提示遗传性耳聋42例，占全部耳聋患者的42.5%(102/240)。结论 非综合征型耳聋患者耳聋基因携带率较高，对高危人群进行耳聋基因突变的筛查和遗传咨询是防止和控制遗传性耳聋、优生优育的重要步骤。

遗传性耳聋；基因芯片；耳聋基因

新生儿耳聋的发病率为0.1% ～ 0.3%，一半以上的先天性耳聋是由于遗传因素造成的。遗传性耳聋按表型特征不同分为综合征型耳聋和非综合征型耳聋。综合征型耳聋除听力损伤外还伴有耳外组织的异常或病变，约占30%；非综合征型耳聋只有听力损害，不伴有耳外组织的异常和病变，约占70%[1]。随着耳聋基因研究的深入，耳聋基因检测已成为防控遗传性耳聋的重要举措[2-4]。国内分子流行病学研究表明，我国大部分遗传性耳聋主要由为数不多的几个基因突变引起，如GJB2、GJB3、SLC26A4以及线粒体12S rRNA等[5-6]。为此，本研究应用北京博奥生物有限公司的晶芯®九项遗传性耳聋基因芯片检测试剂盒，检测了沈阳市和平区240例非综合征型耳聋患者，探讨常见遗传性耳聋基因检测的临床应用价值。

对象和方法

1 研究对象 2013年3 - 8月来自沈阳市和平区残联的耳聋患者240例，其中男117例，女123例，年龄5 ～ 59岁。经患者或监护人知情同意后，收集病史资料，包括患者的一般信息、出生史、耳聋发病年龄、家族史、个人史（耳聋性药物应用史、头部外伤史等）及母孕期情况等，排除综合征型耳聋。

2 DNA提取 采集受检者外周静脉血2 ml，置于EDTA抗凝的真空采血管中，应用天根公司全血核酸提取试剂盒提取基因组DNA，并检测浓度和纯度。3 耳聋基因筛查 PCR扩增、芯片杂交、芯片洗涤与甩干、芯片扫描与判读，应用博奥生物有限公司提供的晶芯®遗传性耳聋基因检测试剂盒(微阵列芯片法)，具体步骤参照说明书。

结 果

1 常见耳聋基因突变情况 240例受检者中，102例存在被检测基因突变。同时携带两个突变基因的2例，其中1例同时检出GJB3 538C＞T杂合突变和SLC26A4 IVS7-2A＞G杂合突变；另1例同时检出GJB2 235del C杂合突变和SLC26A4 2168 A＞G杂合突变。见表1。

2 受检者耳聋病因分析 240例中，明确诊断为遗传性耳聋60例，提示遗传性耳聋42例，原因不明耳聋138例。60例明确遗传性耳聋患者中，GJB2基因突变27例，其中纯合突变型12例，复合杂合突变型15例； SLC26A4基因突变16例，其中纯合突变型13例，复合杂合突变型3例；线粒体12S rRNA均质突变型17例。42例提示遗传性耳聋患者中，GJB2基因单杂合突变17例，SLC26A4基因单杂合突变22例，GJB3基因单杂合突变1例，无线粒体12S rRNA基因异质突变型，2例存在两个基因的单杂合突变。102例耳聋患者携带遗传性耳聋致病基因(102/240，42.5%)，138例未提供致病基因信息(138/240，57.5%)。见表2。

讨 论

耳聋是临床上常见的遗传性疾病，严重影响人类的生活质量。由遗传因素导致的耳聋约占60%[7-8]。遗传性耳聋临床上根据不同表现分为综合征型耳聋和非综合征型耳聋。非综合征型耳聋是以听力损失为唯一症状的遗传性疾病。耳聋具有很强的遗传异质性，其遗传学基础比较复杂。根据遗传方式不同，遗传性耳聋可分为常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传、X连锁遗传、Y连锁遗传及线粒体遗传。遗传性耳聋的致病基因及同一基因的突变位点在不同种族、不同地区的人群中不全相同。GJB2、SLC26A4及线粒体12SrRNA基因是导致中国大部分遗传性耳聋发生的最常见的3个基因，其中GJB2、SLC26A4属常染色体隐性遗传，线粒体12S rRNA属母系遗传[9-10]。

我国流行病学调查显示，21%的耳聋患者携带GJB2基因突变，18.5%的患者携带SLC26A4基因突变，3.8%和0.6%的患者分别携带线粒体12SrRNA 1555 A＞G和线粒体12SrRNA 1494 C＞T突变，提示GJB2、SLC26A4、线粒体基因是导致中国人大部分遗传性耳聋发生的3个基因[11]。本研究中检出携带有遗传性耳聋相关突变基因的患者102例(42.5%，102/240)，其中45例GJB2基因突变(18.75%，45/240)，GJB2 235del C占该基因全部突变检出位点的88.89%(40/45)，是沈阳市和平区最常见的耳聋基因突变位点。其次，检出39例SLC26A4突变(16.25%，39/240)，其中IVS7-2 A＞G占该基因全部突变的87.18(34/39)，在SLC26A4基因突变中最常见。携带线粒体12SrRNA突变基因检出率7.08%(17/240)，通过对所有母系成员进行用药宣教，终生禁用氨基糖苷类抗生素，可有效避免药物性耳聋的发生。

表1 受检者中基因序列改变方式及例数Tab. 1 Deafness gene mutations of patients included in this study (n)

表2 受检者耳聋病因分析Tab. 2 Characteristics of deaf patients included in this study (n)

本文检测的240例耳聋患者中，60例证实为遗传性耳聋，占耳聋患者的25%(60/240)，其中27例为GJB2基因突变，16例为SLC26A4基因突变，17例为线粒体12S rRNA均质突变。另外，有42例为杂合突变，占耳聋患者的17.5%(42/240)，其中GJB2基因17例，SLC26A4基因22例，GJB3基因1例，2例存在两个基因的单杂合突变。我们将对相应基因进行全基因测序，提示可能存在其他突变位点。应用遗传性耳聋基因芯片检测试剂盒，我们筛出102例遗传性耳聋患者，占耳聋患者的42.5%(102/240)，我们将对这些患者进行优生优育指导，结合产前诊断技术有效预防下一代耳聋患者的出生。

综上所述，通过对沈阳市和平区240例非综合征型耳聋患者进行常见4个耳聋相关基因的9个致病突变位点检测，了解到沈阳市和平区非综合征型耳聋基因突变携带率较高，GJB2基因突变中235del C最为常见，IVS7-2 A＞G在SLC26A4基因突变中最为常见，与国内文献报道基本相符[12-16]。对该地区耳聋患者及高危人群进行耳聋基因突变的筛查是防止和控制该地区遗传性耳聋的重要步骤，建议遗传性耳聋基因检测试剂盒在临床推广应用。

1 Walsh T， Pierce SB， Lenz DR， et al. Genomic duplication and overexpression of TJP2/ZO-2 leads to altered expression of apoptosis genes in progressive nonsyndromic hearing loss DFNA51［J］. Am J Hum Genet， 2010， 87（1）： 101-109.

2 韩冰，王秋菊.新生儿听力和基因联合筛查研究现状［J］.中华耳科学杂志，2013，11（2）：309-312.

3 陈鑫苹，徐卫华，符生苗，等.遗传性耳聋基因芯片检测的临床应用研究［J］.现代预防医学，2012，39（19）：5103-5105.

4 王艳丽（综述），张颖（审校）.遗传性耳聋常见致病基因及筛查方法的研究进展［J］.国际生殖健康/计划生育杂志，2013，32（4）：309-312.

5 李海波，李琼，李红，等.非综合征性聋突变热点的流行病学分析［J］.临床耳鼻咽喉头颈外科杂志，2012，26（13）：589-594.

6 张小芳.非综合征性耳聋的研究进展［J］.医学综述，2013，19（1）：120-123.

7 江凌晓，凌月仙，蔡桂君，等.遗传性耳聋基因芯片检测的临床应用研究［J］.分子诊断与治疗杂志，2011，3（3）：170-172.

8 胡煜，孙敬武，孙家强，等.非综合征型聋患者常见耳聋基因突变分析［J］.中华耳科学杂志，2013，11（1）：121-125.

9 Van Camp G， Smith R. Hereditary Hearing loss Homepage［DB/ OL］. http：//hereditaryhearingloss.org

10 代志瑶，戴朴.非综合征型耳聋的基因型与表型关系［J］.中华耳科学杂志，2013，11（1）：151-155.

11 张东红，邱海涛，马秀岚，等.新生儿聋病基因GJB2、SLC26A4、线粒体12SrRNA的分子流行病学研究［J］.中国医科大学学报，2010，39（8）：649-651.

12 李亮，鲁建光，刘颖，等.先天性非综合征型耳聋相关基因检测及热点突变分析［J］.中华耳科学杂志，2012，10（2）：246-251.

13 张强伟，张芩娜，杨向茹.山西太原129例重度非综合征型感音神经性耳聋基因的筛查［J］.中华耳科学杂志，2012，10（2）：224-226.

14 孙捷，韦桂玲，陈俞，等.86例非综合征型耳聋患者耳聋基因芯片检测结果分析［J］.中华耳科学杂志，2013，11（2）：216-219.

15 刘启珍，陈丽鸿，张应龙，等.重庆市永川地区青少年耳聋患者耳聋基因热点突变筛查分析［J］.中华耳科学杂志，2013，11（1）：126-130.

16 王强，尤易文，张启成.南通地区150例重度-极重度耳聋患者常见致聋基因突变分析［J］.临床耳鼻咽喉头颈外科杂志，2013，27（7）：366-370.

声 明

近期发现有人在互联网假冒我刊工作人员行骗，要求作者通过银行账号汇款，以及编造我刊编辑部电话、网址、邮箱和通信地址进行欺诈和收稿、组稿等非法活动。为避免广大作者遭受损失，我刊特此声明： 本刊无银行账号； 版面费均须通过邮局汇款。如各位作者接到汇款通知，请与我刊编辑部联系进行核实，切勿上当。以下为我刊联系方式，若与下述不同，均非所属本刊。电话：010-66936767，010-68210643；互联网地址：http://jyjxxyxb.paperopen.com；邮箱：xuebao301@vip.163.com；通信地址： 北京市复兴路28号解放军总医院学报编辑部； 邮编： 100853。

《解放军医学院学报》 编辑部

Analysis of common deafness genes screening in 240 deaf patients

QU Chang-hong, ZHANG Ning, CAO Dong-hua, HAO Dong-mei
Institute of Obstetrics and Gynecology, Chinese PLA 202 Hospital, Shenyang 110003, Liaoning Province, China

HAO Dong-mei. Email: bennyhg@aliyun.com

Objective To investigate the incidence of common deafness gene mutations in patients with non-syndromic deafness. Methods The genomic DNA of 240 deafness patients were extracted from their peripheral blood. The hot-spot deafness gene mutations, including GJB2, GJB3, SLC26A4 and mitochondrial 12S rRNA genes, were detected using a nine deafness gene mutations detection kit. Results Various types of gene locus mutations were detected in 102 of the 240 patients, including 44 GJB2 gene mutations (18.33%, 44/240), 38 SLC26A4 gene mutations (15.83%, 38/240), 17 mitochondrial 12S rRNA gene mutations (7.08%, 17/240). The diagnosis results suggested that 60 cases were sure to be hereditary hearing loss and 42 cases were suspected hereditary hearing loss, which accounted for 42.5% (102/240) of the total. Conclusion Non-syndromic deafness patients have a high ratio of carrying deafness gene, and molecular genetic screening for these hot-spot mutations is a pivotal step for the prevention and control of genetic deafness.

hereditary deafness; gene chip; deafness gene

R 714.55

A

2095-5227(2014)10-1019-03

10.3969/j.issn.2095-5227.2014.10.012

时间：2014-07-15 09:56

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3275.R.20140715.0956.005.html

2014-05-11

曲长红，女，在读硕士。研究方向：优生优育。Email: quchanghong2014@163.com

郝冬梅，女，博士，副主任医师。Email: bennyhg@aliyun. com