突变型Ras蛋白表达与食管癌复发的相关性分析

江 定

（新郑市第二人民医院肿瘤科，河南新郑451100）

突变型Ras蛋白表达与食管癌复发的相关性分析

江 定

（新郑市第二人民医院肿瘤科，河南新郑451100）

目的分析突变型Ras蛋白表达与食管癌复发的相关性。方法采用免疫组化S-P法检测65例食管癌（复发组43例和未复发组22例）手术标本中突变型Ras蛋白的表达情况。结果复发组Ras蛋白阳性表达率是72.09%（31/43），未复发组是18.18%（4/22）（P＜0.05），且其表达与分化程度有关。结论突变型Ras蛋白检测可作为预测食管癌术后是否复发的参考因素。

食管癌；术后复发；Ras蛋白

食管癌是消化系统常见的恶性肿瘤，发病率较高且容易复发。Ras蛋白在细胞的生长和分化中起重要的作用［1］。Ras基因突变，特别是第12、13和61密码子部位的点突变可使细胞发生恶性转化［1］。消化道肿瘤，尤其是食管癌，有较高的Ras基因突变发生率［1-2］。本研究对食管癌术后复发组与术后未复发组的突变型Ras基因测定，探讨其与食管癌复发的关系，并为临床提供早期干预的理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料入组我院外科收治的2003年1月至2009年12月手术后病理证实为食管癌的65例患者，年龄32～73岁，中位年龄55岁；男34例，女31例。通过进行电话复访、信件回访及门诊复诊等形式的回访，以复查过胃镜为标准，择出未复发组22例，复发组43例。未复发组随访时间是5个月～4 a，中位随访时间22个月；复发组随访时间是3个月～3 a，中位随访时间14个月。未复发组早期15例，中晚期7例；高分化12例，中分化6例，低分化4例；鳞癌18例，腺癌4例。复发组早期32例，中晚期11例；高分化16例，中分化13例，低分化14例；鳞癌36例，腺癌7例。标本均经胃镜或开放性手术获得，所有患者均是保留部分食管，术后均行常规放疗或化疗。

1.2 Ras蛋白检测方法将中性甲醛固定、石蜡包埋的组织制成 4～5 μm切片，常规脱蜡，浸入0.01mol·L-1、pH为6.0的枸橼酸盐缓冲液内，微波炉抗原修复10 min，温度为92～98℃。用S-P法进行免疫组化染色。Ras试剂盒为北京中杉生物试剂公司提供的Zymed公司产品。

1.3 结果判定高倍镜（×400）下随机取10个视野共计数1 000个细胞中的ras蛋白阳性表达的百分数。结果判断：未着色的细胞定为阴性细胞，细胞核呈棕黄色或黄色的定为阳性细胞。每次均设阳性和阴性对照。以已知阳性切片作阳性对照，阴性对照用PBS代替一抗。

1.4 统计学处理采用SPSS 12.0进行统计分析，计数资料比较采用χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

复发组Ras蛋白阳性表达率是72.09%（31/43），高于未复发组的18.18%（4/22），差异有统计学意义（P＜0.05）。在复发组与未复发组中，肿瘤细胞分化越差，Ras蛋白阳性表达水平越高（P＜0.05）（表1）。

表1 Ras蛋白在不同分化程度食管癌组织中的表达

3 讨论

Ras基因在正常细胞中有重要作用，编码相对分子质量为21 000的鸟苷酸结合蛋白，生化及遗传学研究［3］提示，Ras蛋白在细胞增殖分化信号从激活的跨膜受体传递到下游蛋白激酶的过程中起作用。约有50%的结直肠癌及20%的非淋巴细胞性白血病有KRas、N-Ras基因点突变［4］。Ras基因在消化道肿瘤发生突变的频率较高，特别是肠道肿瘤，其突变发生率为40%，Ras基因突变在消化道肿瘤癌变过程中起重要作用的观点已被大多数学者所证实［1-2］。

本研究发现，复发组食管癌组织中Ras蛋白阳性表达率高于未复发组；此外，在复发组与未复发组中，肿瘤细胞分化越差，Ras蛋白的表达水平越高，这提示在食管癌的发生、发展过程中，Ras基因表达与食管癌的生物学行为密切相关。

肿瘤免疫学研究［5］表明，在肿瘤组织中，间质中抗体产生细胞主要依靠其产生的抗肿瘤抗体参与体液免疫，达到抑制肿瘤细胞生长的目的。研究［6］发现，在食管黏膜细胞癌变过程中，IgG产生细胞与肿瘤细胞的生物学行为关系密切，Ras基因的突变可通过抑制IgG产生细胞而降低局部体液免疫力，或IgG通过抑制Ras基因突变而达到抑制肿瘤细胞的肿瘤性生长的特性。因此，食管癌复发患者Ras基因突变，可能影响机体的免疫功能，从而造成食管癌的复发。

综上所述，相对于食管癌细胞分化程度、肿瘤大小、侵袭能力而言，Ras蛋白阳性表达强度可以作为一个独立的观察指标，从分子水平上可以作为预测其是否复发的参考因素。

［1］ Máthé E.RASSF1A，the new guardian of mitosis［J］.Nat Genet，2004，36（2）：117-118.

［2］ Agathanggelou A，Cooper WN，Latif F.Role of the Ras-association domain family 1 tumor suppressor genei n human cancers［J］. Cancer Res，2005，65（9）：3497-3508.

［3］ Pretlow TP，Brasitus TA，Fulton NC，et al.K-ras mutations in putative preneoplastic lesions in human colon［J］.J Natl Cancer Inst，1993，85（24）：2004-2007.

［4］ Fearon ER.K-ras gene mutation as a pathogenetic and diagnostic marker in human cancer［J］.J Natl Cancer Inst，1993，85（24）：1978-1980.

［5］ Ioachim HL，Dorsett BH，Paluch E.The immune response at the tumor site inl ung carcinoma［J］.Cancer，1976，38（6）：2296 -2309.

［6］ 苏蔚，赵卫星，付华民，等.食管癌P53、PCNA表达与局部体液免疫的关系［J］.癌症，2000，19（2）：128-130.

Correlation of Mutated Ras Protein Expression with Recurrence in Esophagus Carcinoma

Jiang Ding
（Department of Oncology，the Second People's Hospital of Xinzheng，Xinzheng 451100，China）

ObjectiveTo investigate the correlation of Ras protein with recurrence in esophagus carcinoma.MethodsImmunohistochemistry S-P method was used to detect the mutated Ras protein expression in the 65 patients with undergone surgery for esophagus carcinoma（43 patients with recurrence and 22 patients without recurrence）.ResultsThe positive rate of mutated Ras protein was 72.09%（31/43）in the patients with recurrence，and was 18.18%（4/22）in the patients without recurrence（P＜0.05）.The expression of mutated Ras protein was related to differentiation.ConclusionMutated Ras protein may be refered as a factor for predicting the recurrence in esophagus carcinoma.

esophagus carcinoma；recurrence；Ras protein

10.3969/j.issn.1673-5412.2014.02.005

R735.1

A

1673-5412（2014）02-0109-02

2012-03-20）

江定（1973-），男，主治医师，主要从事肿瘤内科临床工作。

E-mail：445990201@qq.com